【技术实现步骤摘要】
一种棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒及其应用
本专利技术属于动物疫病检测
，涉及一种棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒及其制备方法和应用，具体地说，涉及一种用于检测细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒及其应用。
技术介绍
棘球蚴病，俗称包虫病，是由棘球绦虫的中绦期幼虫寄生在哺乳动物脏器内引起的疾病，是一种严重的人畜共患寄生虫病。棘球属包含5个种，即细粒棘球绦虫(E.granulosus)，多房棘球绦虫(E.multilocularis)，少节棘球绦虫(E.oligarthtus)、福氏棘球绦虫(E.vogeli)和石渠棘球绦虫(E.shiquius)。包虫病呈世界性分布，遍及五大洲，在中东、南欧、拉丁美洲、中亚、澳大利亚和非洲部分国家流行。我国的21个省市自治区均发现此病，发病面积占全国总面积的86.9％，特别是西部的新疆、甘肃、宁夏、青海、西藏、四川、内蒙古等省(自治区)流行最为严重。目前，在我国人畜间主要感染2种类型的包虫病...
【技术保护点】
1.一种棘球绦虫的Taqman Real-Time PCR检测试剂盒，其特征在于，包括扩增预混液、阴性对照、阳性对照、SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：3的扩增引物、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5的探针、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7的目的片段。/n
【技术特征摘要】
1.一种棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，包括扩增预混液、阴性对照、阳性对照、SEQIDNO：1至SEQIDNO：3的扩增引物、SEQIDNO：4和SEQIDNO：5的探针、SEQIDNO：6和SEQIDNO：7的目的片段。
2.根据权利要求1所述的棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，所述探针序列SEQIDNO：4的5’端标记物为FAM报告荧光基团、3’端标记物为TAMRA淬灭荧光基团。
3.根据权利要求1所述的棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，所述探针序列SEQIDNO：5的5’端标记物为VIC报告荧光基团、3’端标记物为TAMRA淬灭荧光基团。
4.根据权利要求1所述的棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，所述扩增引物SEQIDNO：1和SEQIDNO：2扩增出的条带序列如：SEQIDNO：6所示。
5.根据权利要求1所述的棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，所述扩增引物SEQIDNO：1和SEQIDNO：3扩增出的条带序列如：SEQIDNO：7所示。
6.根据权利要求1所述的棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为无RNA酶水。
7.根据权利要求1所述的棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照分别为含有细粒棘球绦虫线粒体NADH3基因序列的阳性质粒pMD19-T-Eg和含有多房棘球绦虫线粒体NADH3基因序列的阳性质粒pMD19-T-Em。
8.一种权利要求1所述棘球绦虫的TaqmanReal-TimePCR检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、引物设计
根据GenBank中登录的Eg和Em线粒体NADH3基因保守序列，使用Primer5.0和Oligo6.0软件分别设计特异性引物，并在上游引物和下游引物中分别插入BamHI和SalI限制性内切酶识别位点，引物的合成由北京六合华大基因科技有限公司完成；
步骤2、细粒棘球绦虫原头蚴Eg-PSC和多房棘球绦虫原头蚴Em-PSC总RNA的提取
按照TaKaRaRNAisoPlusRNA提取试剂说明书提取Eg-PSC和Em-PSC总RNA，具体步骤如下：
1)样品的研磨和匀浆：将液氮中保存的Eg-PSC和Em-PSC样品分别迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状；然后向研钵中加入适量的RNAisoPlus，反复吹打，至均一透明；然后将匀浆液转移至离心管中，室温15-30℃静置5min；12000r/min4℃离心5min；小心吸取上...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵莉，王冰洁，班万里，郭宝平，张旭，闫昊，张壮志，胡燕，肖海龙，卡那提别克·开比热，刘志强，努尔·库尔玛那里，郭涛，王方，吕凤军，丁伟强，喻昌盛，艾沙江·阿布拉，陆桂丽，阿依江·卡那提别克，
申请(专利权)人：新疆畜牧科学院兽医研究所新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心，
类型：发明
国别省市：新疆;65
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。