高效液相色谱用多肽超分子手性填料及制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了高效液相色谱用多肽超分子手性填料及制备方法与应用，制备方法为：(1)合成

【技术实现步骤摘要】
高效液相色谱用多肽超分子手性填料及制备方法与应用
本专利技术属于高效液相色谱手性填充材料及其制备
，具体涉及高效液相色谱用多肽超分子手性填料及制备方法与应用。
技术介绍
近年来，手性药物一直是医药行业的前沿领域。自然界里有很多手性化合物，这些手性化合物具有两个对映异构体。当一个手性化合物进入生命体时，它的两个对映异构体通常会表现出不同的生物活性。对于手性药物，一个异构体可能是有效的，而另一个异构体可能是无效甚至是有害的。因而建立起快速高效的手性分离方法，对药代动力学研究和手性药物产品质量具有重要意义。目前，高效液相色谱法(HPLC)在手性药物拆分中的应用是最广泛的,是药物质量控制、立体选择性的药理学和毒理学研究的重要手段。高效液相色谱法手性拆分依据其原理可分为手性衍生法、手性流动相法和手性固定相法。其中手性固定相法(CSP)需要手性固定相的填充材料，手性固定相法直接对手性对映体进行拆分，其中被分离的对映体与手性固定相之间由于能量差异形成暂时的非对映异构体复合物。手性固定相法具有较高的手性拆分能力和良好的耐用性,可对较多药物对映体进行快速、高效的分离，具有广泛的应用前景。当前常用作手性固定相的填充材料包括多糖类衍生物、大环抗生素类、分子印迹聚合物、环糊精类、蛋白质等。但目前尚未有采用多肽超分子组装体作为手性填料的报道。多肽超分子自组装是多肽通过自上而下的短肽自组装途径，形成微观结构高度有序的超分子手性纳米结构的过程。由于多肽超分子纳米结构的内在手性以及众多结合位点的存在，与不同的手性药物的结合能力的差异，从而具有高效、快速分离手性药物的能力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种分离效率高、应用潜力大的高效液相色谱用多肽超分子手性填料。本专利技术的第二个目的是提供高效液相色谱用多肽超分子手性填料的制备方法。本专利技术的第二个目的是提供高效液相色谱用多肽超分子手性填料的应用。本专利技术的技术方案如下：高效液相色谱用多肽超分子手性填料的制备方法，包括如下步骤：(1)合成L-Phe-L-Phe-L-Lys，在L-Phe-L-Phe-L-Lys的N-端接枝具有π-π堆积效应的9-芴基甲氧基羰基作为保护基团；(2)按比例，取2-10mmol步骤1)获得的产物，加入1mL超纯水中，搅拌分散均匀，调节pH至3-12.6，在20-35℃下静置反应至少24h，离心去除上清，得到多肽超分子组装体，即为高效液相色谱用多肽超分子手性填料。还可以在L-Phe-L-Phe-L-Lys的C端还连接有L-Lys或L-Asp。上述制备方法制备的高效液相色谱用多肽超分子手性填料。所述手性填料的微观结构为纳米球、纳米带、纳米纤维或纳米片。上述高效液相色谱用多肽超分子手性填料在拆分外消旋手性化合物混合物的应用。本专利技术的优点：本专利技术以对多肽分子进行理性设计，设计合成了数种多肽衍生物，继而通过自组装方法合成得到多肽超分子组装体，即为高效液相色谱用多肽超分子手性填料，本专利技术的填料对手性化合物有良好的拆分效果，可以实现手性化合物，特别是手性药物的高效快速分离。附图说明图1为实施例1制备的多肽超分子组装体的扫描电子显微镜(SEM)图。图2为实施例1制备的高效液相色谱用多肽超分子手性填料对R/S-α-甲基苄胺拆分的液相色谱图。图3为实施例3制备的多肽超分子组装体的SEM图。图4为实施例3制备的高效液相色谱用多肽超分子手性填料对R/S-2-苯基丙酸拆分的液相色谱图。图5为实施例5制备的多肽超分子组装体的SEM图。图6为实施例5制备的高效液相色谱用多肽超分子手性填料对R/S-1-苯基乙醇拆分的液相色谱图。图7为实施例7制备的多肽超分子组装体的SEM图。图8为实施例7制备的高效液相色谱用多肽超分子手性填料对R/S-α-甲基苄胺拆分的液相色谱图。图9为实施例9制备的多肽超分子组装体的SEM图。图10为实施例9制备的高效液相色谱用多肽超分子手性填料对R/S-2-苯基丙酸拆分的液相色谱图。图11为实施例11制备的多肽超分子组装体的SEM图。图12为实施例11制备的高效液相色谱用多肽超分子手性填料对R/S-1-苯基乙醇拆分的液相色谱图。具体实施方式Fmoc为9-芴基甲氧基羰基的缩写。Fmoc-L-Phe-L-Phe-L-Lys简写为Fmoc-FFK，结构如式(I)：Fmoc-L-Phe-L-Phe-L-Lys-L-Lys简写为Fmoc-FFKK，结构如式(II)：Fmoc-L-Phe-L-Phe-L-Lys-L-Asp简写为Fmoc-FFKD，结构如式(III)：Fmoc-FFK，Fmoc-FFKK和Fmoc-FFKD是委托GLBiochemLtd.(Shanghai,China)生产制备。下面结合具体实施例对本专利技术做进一步阐述，但本专利技术所保护范围不限于此。对本
技术实现思路
所做的等同替换，或相应的改进，仍属于本专利技术的保护范围之内。实施例1高效液相色谱用多肽超分子手性填料的制备方法，包括如下步骤：(1)合成L-Phe-L-Phe-L-Lys，在L-Phe-L-Phe-L-Lys的N-端接枝简称为Fmoc的9-芴基甲氧基羰基为保护基团，得到Fmoc-FFK；(2)取3.314mg(5mmol)步骤(1)获得的产物Fmoc-FFK，加入1mL超纯水中，搅拌分散均匀，调节pH至12.6，在25℃下静置反应24h，8000rpm下离心处理15min，去除上清，得到多肽超分子组装体，即为高效液相色谱用多肽超分子手性填料；该手性填料的微观结构为堆积的纳米片结构，见图1。实施例2高效液相色谱用多肽超分子手性填料在拆分外消旋手性化合物混合物的应用以色谱纯的正己烷为溶剂，配置浓度为5mMR/S-α-甲基苄胺(外消旋手性药物)混合溶液，取1mL，加入实施例1制备获得的全部高效液相色谱用多肽超分子手性填料中，培育24h，取出200μL正己烷层，用0.45mm的有机微孔滤膜过滤得滤液，在254nm下的紫外检测，利用HPLC检测溶液反应后的手性药物相对含量，流动相为正己烷：异丙醇(v/v)＝7:3，流速为0.5ml/min，见图2。实施例3高效液相色谱用多肽超分子手性填料的制备方法，包括如下步骤：(1)合成L-Phe-L-Phe-L-LysL-Lys，在L-Phe-L-Phe-L-LysL-Lys的N-端接枝简称为Fmoc的9-芴基甲氧基羰基为保护基团，得到Fmoc-FFKK；(2)取4.045mg(5mmol)步骤(1)获得的产物Fmoc-FFKK，加入1mL超纯水中，搅拌分散均匀，调节pH至12.6，在25℃下静置反应24h，8000rpm下离心处理15min，去除上清，得到多肽超分子组装体，即为高效液相色谱用多肽超分子手性填料；该本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高效液相色谱用多肽超分子手性填料的制备方法，其特征是包括如下步骤：/n(1)合成

【技术特征摘要】
1.高效液相色谱用多肽超分子手性填料的制备方法，其特征是包括如下步骤：
(1)合成L-Phe-L-Phe-L-Lys，在L-Phe-L-Phe-L-Lys的N-端接枝具有π-π堆积效应的9-芴基甲氧基羰基作为保护基团；
(2)按比例，取2-10mmol步骤1)获得的产物，加入1mL超纯水中，搅拌分散均匀，调节pH至3-12.6，在20-35℃下静置反应至少24h，离心去除上清，得到多肽超分子组装体，即为高效液相色谱用多肽超分子手性填料。

【专利技术属性】
技术研发人员：王跃飞，齐崴，范玉琪，苏荣欣，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12