荧光分光光度法筛选催化非水相体系转酯化反应用酶的方法技术

荧光分光光度法筛选催化非水相体系转酯化反应用酶的方法，属于酶反应及荧光测定技术领域。本发明专利技术通过ａ、酶催化乙烯基酯和伯醇类物质发生转酯化反应，反应产物之一的乙烯基醇通过酮式－烯醇式互变异构生成乙醛，使转酯化反应不可逆；ｂ、乙醛和４－肼基－７－硝基－２，１，３－苯并氧杂二唑肼（ＮＢＤ－Ｈ．ＮＨ↓［２］ＮＨ↓［２］）反应生成荧光衍生物，并通过测定该荧光衍生物的荧光强度来间接反映酶的催化能力；本发明专利技术操作简洁，能直观明了判定非水相中酶催化转酯化反应能否发生，可以比较能催化转酯化反应酶的催化活性，并可以通过本发明专利技术方法对影响酶催化反应的因素进行研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种催化非水相体系转酯化反应的酶的筛选方法，具体说是利 用荧光分光光度法对酶能否在非水相中催化转酯化反应进行判定，并根据荧光 强度确定酶催化能力强弱，属于酶反应及荧光测定

技术介绍
有些脂肪酶、酯酶和蛋白酶在水相中催化分解反应，却能在非水体系中催 化合成及转酯化反应。酶催化的转酯化反应甚至能对固体高分子聚合物进行改 性，将功能基团引入高分子化合物侧链。因此，如果能够通过酶催化转酯化反 应在棉纤维表面引入不同的基团，则可在不损害棉纤维的条件下通过改性赋予 棉纤维新的功能。目前为止，酶催化反应的测定通常使用气相色谱或高效液相色谱，这些方 法中酶、反应底物和反应溶剂用量较多，并且测定样品前处理要求高，单个样 品测定时间较长。相比之下，荧光分光光度法测定需要样品量少，反应体系可 以以微升计，每次可同时测定多个样品。荧光分光光度法利用自身没有荧光的 荧光底物和酶催化反应的产物之一作用生成荧光衍生物，通过测定荧光衍生物 的荧光强度间接反映酶的催化能力。该方法要求酶催化反应和荧光衍生物产生 反应能同步发生。因此，这两个反应发生的条件必须相协调，而很多荧光底物 反应生成荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
荧光分光光度法筛选催化非水相体系转酯化反应用酶的方法，其特征是ａ、酶催化乙烯基酯和伯醇类物质发生转酯化反应，反应产物之一的乙烯基醇通过酮式－烯醇式互变异构生成乙醛，使转酯化反应不可逆；ｂ、乙醛和４－肼基－７－硝基－２，１，３－苯并氧杂二唑肼ＮＢＤ－Ｈ．ＮＨ↓［２］ＮＨ↓［２］反应生成荧光衍生物，并通过测定该荧光衍生物的荧光强度来间接反映酶的催化能力；步骤为：　（１）酶的冷冻干燥　配制浓度为１．３３３ｇ／Ｌ的酶溶液，加入酶溶液重量百分５％蔗糖作为冷冻干燥保护剂，充分 振荡溶解后，用移液枪分装到０．５ｍＬ离心管中，３００μＬ／管，进行冷冻干燥，得冷冻干燥酶粉备用；　所选用的酶...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖，谷家栋，王树根，范雪荣，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]