一种研究鸡生殖细胞自噬的方法技术

一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，属于生物技术领域。在生殖细胞中添加雷帕霉素激活细胞自噬，转染不同MOI值的GFP‑LC3慢病毒载体，在显微镜下观察细胞生长状态，排除MOI值过高导致细胞凋亡的分组。收集各组样品，EdU检测各组细胞的增殖效率，同时通过western‑blot检测游离的GFP蛋白和自噬标志蛋白LC3‑Ⅰ（16 ku）与LC3‑Ⅱ（14 ku）之间的转化和比例及荧光显微镜定位LC3蛋白在细胞中的表达情况综合评判该MOI值在鸡生殖细胞中的适用性。本发明专利技术操作简单，切实可行，探讨GFP‑LC3慢病毒载体在鸡生殖细胞中的转染条件是将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。

A method for studying autophagy of chicken germ cells

【技术实现步骤摘要】
一种研究鸡生殖细胞自噬的方法
本专利技术涉及GFP-LC3慢病毒载体转染鸡生殖细胞确定最佳效果的MOI值，具体是一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，属于生物

技术介绍
自噬是一种在真核细胞内保守的降解过程，从单细胞的酵母到哺乳动物中都普遍存在。自噬通过降解细胞内受损的蛋白、细胞器、细胞质以及入侵的微生物等来维持机体的稳态。通过电镜检测自噬体及其相关结构是检测自噬的金标准，但由于电镜操作及数据分析专业性要求较高，目前的文献报道中最常用的方法有Westernblot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ之间的转化和比例变化，以及通过荧光显微镜观察LC3点状聚集物的形成，这些方法都可以监测自噬发生的程度。利用GFP示踪LC3蛋白来检测自噬流是一种常见的经典的方法。当利用转基因的方法，将GFP融合连接到LC3基因上后，当细胞自噬未发生时，GFP-LC3蛋白将随机分布在细胞质中，而当细胞自噬发生时，GFP-LC3蛋白将作为双层膜的主要组成部分，聚集在一起，在荧光显微镜下，可以看到聚集所形成的绿色点状，然后，参与自噬体的构成和运输。当自噬体运送本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，其特征是，包括：/n1）设置GFP-LC3慢病毒载体的MOI值梯度转染生殖细胞；/n2）收集各组样品，EdU检测不同MOI值组细胞的增殖效率；/n3）通过Western-Blot检测游离的GFP蛋白和自噬标志蛋白LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ之间的转化和比例。/n

【技术特征摘要】
1.一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，其特征是，包括：
1）设置GFP-LC3慢病毒载体的MOI值梯度转染生殖细胞；
2）收集各组样品，EdU检测不同MOI值组细胞的增殖效率；
3）通过Western-Blot检测游离的GFP蛋白和自噬标志蛋白LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ之间的转化和比例。


2.根据权利要求1所述的一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，其特征是，所述步骤1），具体操作：在生殖细胞中...

【专利技术属性】
技术研发人员：左其生，丁颖，李碧春，姜景译，袁霞，石祥，张明，张亚妮，孙红艳，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32