【技术实现步骤摘要】
一种应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法
本专利技术涉及中药的靶点活性筛选与评价领域，具体涉及一种应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法。
技术介绍
中药莪术是姜科姜黄属植物的根茎，为我国常用中药，具有行气破血和消积止痛的功效。莪术的化学成分主要包括两大类，即姜黄素类成分和挥发油成分，其中挥发油中的主要成分为莪术醇、β-榄香烯、蓬莪术环氧酮、蓬莪术酮、蓬莪术环二烯、姜黄醇酮、姜黄环氧奥烯醇等半萜烯化合物。现代研究发现该药材具有抗癌、抗凝血、抗氧化和保肝的作用，在临床上用于早期宫颈癌、恶性淋巴瘤、原发性肝癌、缺血性脑病、皮肤溃疡、神经性皮炎、婴幼儿秋季腹泻、小儿急性呼吸道感染及慢性支气管炎等多种疾病。随着越来越多的药用价值逐步被开发和利用，莪术成为具有巨大开发潜力和广阔市场前景的药材。但目前主要以莪术的总提物入药，其药效物质不明确，作用的靶点研究甚少。因此，筛选与评价莪术的作用靶点对后续的药物开发具有重要意义。目前关于FLIPRTetra高通量实时荧光检测分析系统应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法尚未报道。专利技术内...
【技术保护点】
1.一种应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法，其特征在于，基于FLIPR Tetra 高通量实时荧光检测分析系统，利用毒蕈碱受体M3细胞筛选模型、多巴胺受体D2细胞筛选模型、阿片受体delta细胞筛选模型和阿片受体kappa细胞筛选模型，以莪术馏分为筛选对象，通过激动分析和拮抗分析筛选与评价活性作用靶点。/n
【技术特征摘要】
1.一种应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法，其特征在于，基于FLIPRTetra高通量实时荧光检测分析系统，利用毒蕈碱受体M3细胞筛选模型、多巴胺受体D2细胞筛选模型、阿片受体delta细胞筛选模型和阿片受体kappa细胞筛选模型，以莪术馏分为筛选对象，通过激动分析和拮抗分析筛选与评价活性作用靶点。
2.根据权利要求1所述一种应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法，其特征在于，所述的细胞筛选模型为在细胞兼容的96孔板中接种稳转受体的HEK-293细胞，接种的细胞密度为8×104个/孔，细胞培养液体积为100µL/孔，接种后细胞培养时间为16-22h。
3.根据权利要求1或2任一所述一种应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法，其特征在于，所述莪术馏分包括莪术水层、乙酸乙酯层及正庚烷层馏分，获取步骤如下：
首先通过溶剂分配将莪术总提物分成三个馏分，具体操作如下：称取Xkg莪术块茎切成片，用10倍质量的50-90％乙醇溶液加热回流提取三次，每次回流提取时间为1-3小时，合并提取液后抽滤，在60℃真空下旋转蒸发浓缩体积至4X-7XL；
依次用正庚烷（12X-20XL）和乙酸乙酯（25X-30XL）洗脱，旋蒸浓缩液，得到莪术水层、乙酸乙酯层及正庚烷层馏分。
4.根据权利要求3所述一种应用于莪术的靶点活性筛选与评价方法，其特征在于，所述莪术馏分在毒蕈碱受体M3细胞模型上的筛选与评价，具体包括以下步骤：
A．将溶解在含0.05-0.1%DMSO的莪术馏分以浓度为1-100μg/mL加入到96孔板中，检...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，王纪霞，王志伟，刘艳芳，周维佳，于广璞，薛珍珍，单彩龙，
申请(专利权)人：泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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