一种全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种噬菌体ScFv抗体文库的构建方法及其应用，该构建方法包括：1)以cDNA为模板，利用PCR扩增ScFv抗体的重链可变区和引ScFv抗体的轻链可变区；2)以ScFv抗体的重链可变区和轻链可变区PCR产物为模板，利用带有SfiI酶切位点的引物通过overlap PCR扩增ScFv抗体序列；3)扩增产物利用SfiI限制性内切酶对载体pSEX和overlap PCR产物进行双酶切，连接至酶切后pSEX载体的对应位置上，通过回收连接产物并电转化，得到所述噬菌体ScFv抗体文库。本发明专利技术提供构建方法获得的噬菌体ScFv抗体文库，文库库容量大，多样性丰富等特点，能够用于筛选各类特异性抗原及自身免疫疾病相关病原的特异性人源化单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法及其应用。
技术介绍
抗体分子是生物学和医学领域用途最为广泛的蛋白分子，据美国制药工业协会的调查报告显示，单克隆抗体药物的研发比例居所有医药生物技术产品之首。作为重复使用的治疗药物，由于鼠单抗的免疫原性问题，作为治疗用产品，全人源抗体已经成为抗体发展的主要方向。人抗体的产生途径很多，像B细胞的永生化、杂交瘤技术、转基因动物都是产生人抗体的技术方法，其中应用传统的杂交瘤技术获得抗体的途径存在筛选量大，特别是在治疗中存在人抗鼠抗体反应，从而降低疗效，甚至可引起过敏反应，并且这些技术操作复杂，技术难度大，涉及的费用昂贵，而抗体库技术由于它简便、经济、快捷的优点已经成为制备治疗性抗体的一条重要途径。目前已报道的非免疫抗体库主要有天然抗体库、半合成抗体库和全合成抗体库，半合成和全合成抗体库的构建过程中，抗体基因涉及到人工合成，需要计算机模建，工作量大，且可能产生部分无效克隆，影响抗体库的质量。而在天然抗体库中，抗体基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法，其特征在于，该构建方法包括下述步骤：/n1)以cDNA为模板，利用PCR扩增ScFv抗体的重链可变区和ScFv抗体的轻链可变区；/n2)以ScFv抗体的重链可变区和轻链可变区PCR产物为模板，利用带有SfiI酶切位点的引物通过overlap PCR扩增ScFv抗体序列；/n3)扩增产物利用SfiI限制性内切酶对载体pSEX和overlap PCR产物进行双酶切，连接至酶切后pSEX载体的对应位置上，通过回收连接产物并电转化，得到所述噬菌体ScFv抗体文库。/n

【技术特征摘要】
1.一种全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法，其特征在于，该构建方法包括下述步骤：
1)以cDNA为模板，利用PCR扩增ScFv抗体的重链可变区和ScFv抗体的轻链可变区；
2)以ScFv抗体的重链可变区和轻链可变区PCR产物为模板，利用带有SfiI酶切位点的引物通过overlapPCR扩增ScFv抗体序列；
3)扩增产物利用SfiI限制性内切酶对载体pSEX和overlapPCR产物进行双酶切，连接至酶切后pSEX载体的对应位置上，通过回收连接产物并电转化，得到所述噬菌体ScFv抗体文库。


2.根据权利要求1所述的全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法，其中，步骤3)中，所述载体pSEX为载体pSEXRTL2，所述pSEXRTL2载体VH插入片段的5’端和VL插入片段的3’端分别加入SfiI酶切位点。


3.根据权利要求2所述的全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法，其中，所述载体pSEXRTL2的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。


4.根据权利要求1所述的全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方法，其中，步骤3)中，所述的pSEXRTL2载体在pⅢ序列的N端加入TAG终止密码子。


5.根据权利要求1所述的全人源噬菌体ScFv天然抗体文库的构建方...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽萌，陈龙欣，李闰婷，聂晓宁，马润林，王峰，
申请(专利权)人：郑州师范学院，
类型：发明
国别省市：河南;41