一种提高大肠杆菌胞内血红素含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高大肠杆菌胞内血红素含量的方法，属于代谢工程领域。本发明专利技术在大肠杆菌中敲除编码小电导类机械敏感型离子通道蛋白的基因mscS、敲除编码3‑脱氧‑阿拉伯庚酮糖‑7磷酸合成酶的基因aroG，或过表达了编码谷氨酰‑tRNA还原酶的基因hemA。构建得到的重组菌在LB培养基中进行培养，血红素含量可达47.6μmol·L

【技术实现步骤摘要】
一种提高大肠杆菌胞内血红素含量的方法
本专利技术涉及一种提高大肠杆菌胞内血红素含量的方法，具体地，利用基因敲除和过表达相结合的技术，属于代谢工程

技术介绍
血红素是一类重要的含铁卟啉类化合物，参与电子转移、活性氧分解、底物的催化氧化、基因表达的控制等。在实际应用中，血红素在化学方面可作为天然色素用于食品添加，在医疗保健方面可用作补铁剂或抗贫血药，在治疗疾病方面可用于卟啉症治疗等。血红素是大多数原核和真核生物细胞呼吸的重要辅助因子，以血红素为辅基的蛋白对各种生物学过程至关重要。在以血红素为辅基的重组酶生物合成中，血红素的不足是导致酶活性不高的重要因素，因此血红素辅因子的充足供应对于可溶性和功能性血红蛋白生产至关重要。在异源表达以血红素为辅基的重组蛋白时，胞内血红素含量的增加有利于提高活性蛋白的比例。大肠杆菌(E.coli)作为重要的基因工程宿主菌，主要以谷氨酸为前体物经C5途径合成血红素(图1)。谷氨酸在谷氨酰-tRNA合成酶(gltX编码)和还原酶(hemA编码)的催化下合成5-氨基乙酰丙酸(ALA)，进而合成血红素。虽然外源本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，敲除或沉默了编码小电导类机械敏感型离子通道蛋白的基因mscS、敲除或沉默了编码3-脱氧-阿拉伯庚酮糖-7磷酸合成酶的基因aroG，或过表达编码谷氨酰-tRNA还原酶的基因hemA。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，敲除或沉默了编码小电导类机械敏感型离子通道蛋白的基因mscS、敲除或沉默了编码3-脱氧-阿拉伯庚酮糖-7磷酸合成酶的基因aroG，或过表达编码谷氨酰-tRNA还原酶的基因hemA。


2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述基因mscS的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述基因aroG的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述基因hemA的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。


3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21为出发菌株。


4.构建权利要求1～3任一所述重组大肠杆菌的方法，其特征在于，通过Red同源重组的方法将大肠杆菌基因组的基因mscS或基因aroG敲除。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，
设计如SEQIDNO.1核苷酸序列所示的基因的同源臂，同源臂为基因上下游各400～600bp，再通过Red同源重组的方法将大肠杆菌基因组的基因ms...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐蕾，潘梅，刘爽欣，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32