重组顶头孢霉工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组顶头孢霉工程菌及其构建方法和应用，所述重组顶头孢霉工程菌是通过敲除顶头孢霉菌基因组上的Acaxl2基因所得。本发明专利技术通过构建Acaxl2基因缺陷的重组顶头孢霉工程菌，来促进节孢子的形成，从而达到提高头孢菌素产量的目的。

【技术实现步骤摘要】
重组顶头孢霉工程菌及其构建方法和应用
本专利技术涉及基因工程菌及其应用，具体涉及一种重组顶头孢霉工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
头孢菌素C(CephalosporinC，CPC)是工业生产头孢菌素的原料，头孢菌素是一类具有重要应用价值的广谱抗生素。头孢菌素C是顶头孢霉菌(Acremoniumchrysogenum)产生的一类次级代谢产物，顶头孢霉培养过程中的主要形态是分生孢子与节孢子，两者在无性周期中有规律地发生。其中，分生孢子由盘状的分生孢子梗簇中的小梗形成，常在固态培养时出现，而节孢子则是液体培养过程中，养分供应的限制后，溶胀的基质菌丝分裂产生。有文献表明，在顶头孢霉菌生产培养过程中发现，节孢子的分化与头孢菌素C生物合成的最大速率相吻合。节孢子的形成似乎与头孢菌素C的高产有关(请参见文献NashCH,HuberFM.AntibioticSynthesisandMorphologicalDifferentiationofCephalosporiumacremonium[J].Appliedmicrobiology,1971,22(1):本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组顶头孢霉工程菌，其特征在于，所述重组顶头孢霉工程菌是通过敲除顶头孢霉菌基因组上的Acaxl2基因所得，所述Acaxl2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组顶头孢霉工程菌，其特征在于，所述重组顶头孢霉工程菌是通过敲除顶头孢霉菌基因组上的Acaxl2基因所得，所述Acaxl2基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的重组顶头孢霉工程菌，其特征在于，所述顶头孢霉菌为顶头孢霉1-D1工业菌株。


3.根据权利要求1所述的重组顶头孢霉工程菌，其特征在于，所述敲除所述顶头孢霉菌基因组上的Acaxl2基因为将所述顶头孢霉菌基因组上的Acaxl2基因替换为核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的egfp基因。


4.根据权利要求1所述的重组顶头孢霉工程菌，其特征在于，所述重组顶头孢霉工程菌在发酵中后期至发酵结束，直径为2-8μm的节孢子的含量为70％至95％。


5.一种重组顶头孢霉工程菌的构建方法，其特征在于，包括步骤：
1)构建pAN7-Acaxl2基因敲除载体；
2)构建同源修复片段；
3)将步骤1)所述基因敲除载体和步骤2)所述同源修复片段共转化至顶头孢霉菌中，获得产头孢菌素C的重组顶头孢霉工程菌。


6.根据权利要求5所述的重组顶头孢霉工程菌的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中的构建pAN7-Acaxl2基因敲除载体包括步骤：
1.1)、提供如SEQIDNO.3所示的sgRNA靶序列，将所述sgRNA靶序列引入到序列如SEQIDNO.4-SEQIDNO.7所示的引物中；
1.2)、以pUC57为模板，进行PCR扩增，回收片段后进行融合PCR后获得可识别Acaxl2基因的特异性sgRNA片段Acaxl...

【专利技术属性】
技术研发人员：储炬，徐燕，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：上海;31