【技术实现步骤摘要】
农杆菌介导的炭角菌科真菌sj18转化子菌株及其制备方法和应用
本专利技术属于生物防治
，涉及一种农杆菌介导的炭角菌科真菌sj18转化子菌株及其制备方法和应用。
技术介绍
化学农药的使用在一定程度上造成了食品安全和生态环境问题，随着这一问题的不断严重，高安全性的生物农药在农林业可持续发展中的需求更加突出。生物农药主要包括农用抗生素、细菌杀虫制剂、昆虫病毒杀虫剂和真菌生物农药等。真菌是最大的杀灭病虫害微生物类群之一，某些具有生物防护作用的真菌（简称生防真菌）能通过侵染、破坏、毒性代谢物和抑制营养吸收等多种方式有效杀灭特定类群的病虫害。真菌杀灭病虫害的特点，决定了生防真菌具有高效性（不容易引起病虫害产生抗性）、安全性（对人畜无毒和对天敌伤害较少）和低成本（常规的发酵培养即可）等诸多优势。因此，生防真菌的防治机理和应用已成为当前国内外生物农药领域的研究重点方向之一。尤其是植物内生真菌，不仅能产生杀灭病虫害的活性物质，还能够激发植物对病虫害的抵抗力。另外，有些植物内生真菌还能促进植物生长，提高植物抗逆能力等。因为这些植物...
【技术保护点】
1.农杆菌介导的炭角菌科真菌sj18转化子菌株，其特征在于：在制备该转化子菌株时，农杆菌感染受体为sj18菌株，其保藏号为CGMCC No.12780。/n
【技术特征摘要】
1.农杆菌介导的炭角菌科真菌sj18转化子菌株，其特征在于：在制备该转化子菌株时，农杆菌感染受体为sj18菌株，其保藏号为CGMCCNo.12780。
2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的炭角菌科真菌sj18转化子菌株，其特征在于：农杆菌采用农杆菌菌株AGL-1、农杆菌菌株GV3101或农杆菌菌株EHA105。
3.采用pPK2表达载体，启动子采用来自构巢曲霉gpda启动子和hsp70启动子中的一种或两种，功能基因为eGFP或sGFP报告基因。
4.根据权利要求3所述的农杆菌介导的炭角菌科真菌sj18转化子菌株，其特征在于：pPK2表达载体eGFP或sGFP报告基因的前端留有单酶切位点可供其它功能基因后续接入，接入后形成融合蛋白，方便转化子筛选和功能研究。
5.一种权利要求1所述的农杆菌介导的炭角菌科真菌sj18转化子菌株的制备方法，其特征在于该方法包括以下几个主要步骤：
(1)真菌表达载体的制备；
(2)农杆菌感受态的制备；
(3)待转化真菌的准备；
(4)农杆菌介导的梯度转化；
(5)目的菌株的多层次筛选。
6..根据权利要求5所述的炭角菌科真菌sj18转化子菌株的制备方法，其特征在于步骤(1)包括以下主要两个步骤：
①通过PCR方法用高保真酶从其它质粒中获得带有酶切位点的gpdA或hsp70启动子序列、eGFP或sGFP基因、以及终止子trpc片段，进行酶切并接入到T载体中；
②以pPK2载体为骨架，通过Infusion的同源重组方法插入各种目的片段，来构建所需表达载体。
7.根据权利要求5所述的炭角菌科真菌sj18转化子菌株的制备方法，其特征在于步骤(3)包括以下步骤：
①sj18菌株在PDA培养基平板上20-34℃活化3-7天；
活化后，打孔或刮取健壮菌丝块加入PDB液体培养基中，按100ml培养基接入一块0.5cm左右菌丝块的比例，同时加入2-5mm直径的玻璃珠3-5颗，在32℃150rpm振荡培养3-4天，打散成团的菌丝，方便后续涂布；
③将获得的打散后的sj18菌进行梯度稀释涂板培养，并根据菌落统计，控制稀释后菌的...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭华正，金群英，朱汤军，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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