一种金针菇线粒体提取方法技术

本发明专利技术提供了一种金针菇线粒体提取方法，属于微生物技术领域。本发明专利技术提供的金针菇线粒体提取方法，包括如下步骤：将样品用巯基化合物溶剂浸泡，离心弃上清，得到浸泡处理的样品；将浸泡处理的样品用山梨醇重悬，得到浸泡处理样品重悬液，在浸泡处理样品重悬液中加入蜗牛酶进行酶解，离心弃上清，得到酶解后的样品；将酶解后的样品使用Mito‑Cyto Buffer重悬，离心收集上清；将上个步骤得到的上清离心，收集沉淀，得到线粒体。本发明专利技术提供的金针菇线粒体提取方法，操作简单、耗时短，提取的线粒体结构完整、功能活性高。

【技术实现步骤摘要】
一种金针菇线粒体提取方法
本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种金针菇线粒体提取方法。
技术介绍
目前国内外对金针菇线粒体提取方法主要有差速离心法和不连续密度梯度离心法。差速离心法由于提取的线粒体纯度差，目前已鲜有人再使用。不连续密度梯度离心法则是一种比较传统的提取方法，提取线粒体较纯净，但是操作复杂，耗时长，且在将线粒体分散到悬浮介质中之前，线粒体会与液泡的内容物有短暂的接触，线粒体外膜有被这些内容物污染、裂解的风险；同时，多次的高速离心和高浓度蔗糖易造成线粒体内膜破损。目前，迫切需要一种操作简单、耗时短、线粒体完整、功能活性高的金针菇线粒体提取方法。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种金针菇线粒体提取方法。本专利技术提供的金针菇线粒体提取方法，操作简单、耗时短，提取的线粒体结构完整、功能活性高。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种金针菇线粒体提取方法，包括如下步骤：1)将样品用巯基化合物溶剂浸泡，离心弃上清，得到浸泡处理的样品；2)将浸泡处理的样品用山梨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金针菇线粒体提取方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)将样品用巯基化合物溶剂浸泡，离心弃上清，得到浸泡处理的样品；/n2)将浸泡处理的样品用山梨醇重悬，得到浸泡处理样品重悬液，在浸泡处理样品重悬液中加入蜗牛酶进行酶解，离心弃上清，得到酶解后的样品；/n3)将酶解后的样品使用Mito-Cyto Buffer重悬，离心收集上清；/n4)将步骤3)得到的上清离心，收集沉淀，得到线粒体；/n步骤1)所述浸泡的时间为15～30min，所述浸泡的温度为32℃；/n步骤2)所述蜗牛酶添加的质量为所述浸泡处理样品质量的3～4％；所述酶解的时间为55～65min；所述酶解的温度为37℃。/n

【技术特征摘要】
1.一种金针菇线粒体提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将样品用巯基化合物溶剂浸泡，离心弃上清，得到浸泡处理的样品；
2)将浸泡处理的样品用山梨醇重悬，得到浸泡处理样品重悬液，在浸泡处理样品重悬液中加入蜗牛酶进行酶解，离心弃上清，得到酶解后的样品；
3)将酶解后的样品使用Mito-CytoBuffer重悬，离心收集上清；
4)将步骤3)得到的上清离心，收集沉淀，得到线粒体；
步骤1)所述浸泡的时间为15～30min，所述浸泡的温度为32℃；
步骤2)所述蜗牛酶添加的质量为所述浸泡处理样品质量的3～4％；所述酶解的时间为55～65min；所述酶解的温度为37℃。


2.根据权利要求1所述的金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤1)所述巯基化合物溶剂包括巯基乙醇和硫代乙醇酸钠中的一种或两种。


3.根据权利要求1所述的金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤1)所述样品挑选未开伞、子实体完整、无污染无机械伤和菇柄长度10～15cm的金针菇。


4.根据权利要求1所述的金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤1)所述样品的质量和巯基化...

【专利技术属性】
技术研发人员：马宁，王鹤潼，方东路，胡秋辉，王朝，
申请(专利权)人：南京财经大学，南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32