一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法，该方法通过低温控制反相乳化交联技术制得交联透明质酸微球，然后将交联透明质酸微球与透明质酸凝胶混合均匀、干燥，得到填充剂。本发明专利技术微球制备具有制备步骤简单、反应条件温和、交联剂用量少、交联均匀性好、安全性高等特点，所得填充剂同时含有未交联的透明质酸和交联的透明质酸微球，能同时达到快速填充凹陷和维持较长填充效果的目的，在矫正过度或误操作时可采取措施使之快速降解，降低了产品注射的风险，适合软组织填充领域的应用。

A preparation method of crosslinked hyaluronic acid filler for injection

【技术实现步骤摘要】
一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法
本专利技术涉及一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法，特别涉及一种医学美容填充用、特别是软组织填充用可注射交联透明质酸长效填充剂的制备方法，属于组织填充和医用生物材料

技术介绍
透明质酸是由D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的酸性粘多糖，具有良好的生物相容性，已经应用在医药领域和化妆品领域，是时下研究热点。由于天然透明质酸钠凝胶稳定性差、对透明质酸酶和自由基敏感、在体内保持时间短、机械强度差，通过化学修饰和交联作用可以增强透明质酸钠凝胶的机械性能和抗酶解性能，从而可以在体内维持更长的时间。交联透明质酸钠凝胶国内外已经研究多年，应用场景也十分广泛。其中，在软组织填充剂领域的应用已经十分成熟。市场上常见的用于美容填充的在售产品有：Restylane、Juvéderm、润百颜等品牌。交联透明质酸凝胶主要的制备方式是透明质酸在碱性条件下与交联剂反应后形成凝胶，得到的块状凝胶一般是经机械粉碎或施压通过筛网来获得不同粒径规格，这种方式制备的交联透明质酸凝胶都存在交联程度不均一，颗粒形态不规范及粒径不均一等问题，用于面部填充容易因表面不规则引起红肿等副反应，同样限制了其在药物载体方面的发展。而交联透明质酸微球的问题解决了这一问题，交联透明质酸微球呈圆润的球状，表面光滑无棱角，大大减少了面部填充副反应的发生。与交联透明质酸钠凝胶的填充原理不同，这种交联剂植入人体后微球会被机体吞噬细胞和巨大细胞包围，促进成纤维细胞和胶原的包裹，凹陷部位逐渐被填充。同时在交联透明质酸钠微球降解过程中，真皮内纤维素增生产生想要的美容效果，随着时间的增加使真皮层增厚，填充部位完全被新生的自体组织代替，得到一个长效美容的效果。CN10318902A公开了一种面部注射用复合交联透明质酸钠凝胶微球的制备方法，该方法将经二次交联的透明质酸钠凝胶破碎、洗涤、过滤得到交联透明质酸钠微球，操作难度大，很难实现微球制备。CN103848995A公开了一种制备透明质酸纳米微球的方法，该方法需要先制备两种功能化的透明质酸，即胸腺嘧啶功能化透明质酸和腺嘌呤功能化透明质酸，然后再进行交联制备微球，操作繁琐，并且制备过程涉及多种有机溶剂，工业化生产困难。CN103333351A和CN104387600A分别公开了一种以透明质酸钠为原料制备可用作栓塞剂的交联透明质酸钠微球的工艺和一种面部注射用复合交联透明质酸钠凝胶微球的制备方法，这两种方法类似，都是先将透明质酸凝胶加入乳化液乳化后再向乳化液中加入交联剂进行交联，这种方法需要大量的交联剂，并且交联剂很难渗透到凝胶内部，导致交联效率不高，交联不均匀，微球的机械性能不高，而且容易破碎。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术不足之处，提供了一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法，该填充剂含有交联透明质酸微球，本专利技术交联透明质酸微球采用低温控制反相乳化交联技术制备，在乳化之前加入交联剂，具有制备步骤简单、反应条件温和、交联剂用量少、交联均匀性好、安全性高等特点，且所得交联透明质酸微球机械性能更高，不易破碎。本专利技术注射用交联透明质酸填充剂的制备方法，包括制备交联透明质酸微球的步骤，具体如下：（1）在低温下，将透明质酸或其盐、交联剂、碱和水混合分散均匀，得到水相；（2）将上述水相加入含有乳化剂的油相中，充分乳化，得到乳化液；（3）将乳化液在交联温度下进行交联，交联后去除油相，进行后处理，得到交联透明质酸微球。进一步的，上述填充剂制备方法中，除了制备交联透明质酸微球的步骤外，还包括以下步骤：a.将透明质酸或其盐用水溶解，得到透明质酸凝胶；b.将交联透明质酸微球或者交联透明质酸微球与其他有效成分加入步骤a的透明质酸凝胶中，搅拌均匀，分装、干燥，得注射用交联透明质酸填充剂。本专利技术通过低温控制反相乳化交联技术制得了交联透明质酸微球。所得微球具有一定的膨胀性，机械性能强，微球粒径和机械强度可控。考虑到微球粒径太小会被吞噬细胞吞噬和直接透过毛细血管，微球粒径太大会造成组织皮下结节的发生，因此为了满足填充剂的要求，交联透明质酸微球的粒径一般为10-70μm。可以调整透明质酸或其盐含量、交联剂用量、乳化时剪切速度、水相与油相比例等条件使微球粒径满足要求。进一步的，步骤（1）中，水相的配制过程在低温下进行，低温会降低反应速度，以抑制或降低透明质酸的交联，温度控制在使水相不会形成较大较硬的凝胶块为宜。一般的，当温度控制在2-8℃时，具有较好的效果。进一步的，水相配制时，各成分的混合顺序随意，各成分可以以纯品的形式加入，也可以以水溶液的形式加入。优选的，先将透明质酸或其盐与交联剂在水中混合均匀，再加入碱，这样有利于交联剂与透明质酸或其盐的均匀接触，有利于提高交联的均匀性和交联效率，也能够降低低温下水相发生交联的概率。进一步的，水相加入油相前，先通过剪切分散的方式将水相分散均匀，剪切速度一般为10000-20000rpm，处理时间一般为10-40min。剪切分散可以将凝胶打散，减小后续乳化过程中的分散压力，并且通过与后续乳化过程相配合，两次高速剪切均质可以得到颗粒粒径更小的微球。进一步的，所述交联剂和碱是透明质酸交联领域报道的各种适合于透明质酸的交联剂和碱。例如，所述交联剂可以为碳二亚胺、二乙烯基砜、乙二醇二缩水甘油醚、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、环氧氯丙烷等中的一种或多种。所述碱可以为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠等中的一种或多种。进一步的，本专利技术交联剂在乳化之前加入，可以很好的与透明质酸或其盐进行接触、混合，与乳化后再加入交联剂相比，交联剂用量少，水相中交联剂含量为5-150mg/mL。进一步的，本专利技术碱的用量满足透明质酸碱性交联的要求即可，其用量可以根据现有技术的报道进行选择，例如水相中碱含量为0.5-5wt%。进一步的，水相中透明质酸或其盐的浓度可以根据现有技术的报道进行调整，透明质酸或其盐在水相中的浓度一般为5-25wt%。进一步的，本专利技术步骤（1）和a中所述的透明质酸或其盐的分子量可以根据填充剂领域的要求进行选择，例如制备交联透明质酸微球的透明质酸或其盐的分子量一般是1000-2500kDa，制备透明质酸凝胶的透明质酸或其盐的分子量一般为1000-2500kDa。本专利技术所提到的透明质酸盐指的均是透明质酸的医学上可接受的盐，例如钠盐、钾盐、锌盐、钙盐等，常用的为钠盐。进一步的，本专利技术采用反相乳化法，将水相加入油相中进行乳化，油相由乳化剂和油相基质组成，乳化剂可以选择现有技术中公开的可用的乳化剂，例如亲水疏水平衡值在3-9的乳化剂，油相基质可以选择能够包裹水相形成小液滴的油相基质，例如植物油、矿物油、硅油、液体石蜡、十二烷、正辛烷、环己烷等。进一步的，乳化剂可以选择失水三梨醇单油酸酯（Span80）、失水三梨醇单硬脂酸酯（Span60）等。进一步的，油相中，乳化剂的含量为2-10wt%。水相和油相的体积比为1:5-20。进一步的，水相和油相混本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法，其特征是：包括制备交联透明质酸微球的步骤，具体如下：/n（1）在低温下，将透明质酸或其盐、交联剂、碱和水混合分散均匀，得到水相；/n（2）将上述水相加入含有乳化剂的油相中，充分乳化，得到乳化液；/n（3）将乳化液在交联温度下进行交联，交联后去除油相，进行后处理，得到交联透明质酸微球。/n

【技术特征摘要】
1.一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法，其特征是：包括制备交联透明质酸微球的步骤，具体如下：
（1）在低温下，将透明质酸或其盐、交联剂、碱和水混合分散均匀，得到水相；
（2）将上述水相加入含有乳化剂的油相中，充分乳化，得到乳化液；
（3）将乳化液在交联温度下进行交联，交联后去除油相，进行后处理，得到交联透明质酸微球。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：还包括以下步骤：
a.将透明质酸或其盐用水溶解，得到透明质酸凝胶；
b.将交联透明质酸微球或者交联透明质酸微球与其他有效成分加入步骤a的透明质酸凝胶中，搅拌均匀，分装、干燥，得注射用交联透明质酸填充剂。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（1）中，水相在2-8℃的低温环境下制备，以降低透明质酸或其盐的交联；优选的，步骤（1）中，在低温下，先将透明质酸或其盐、交联剂与水混合，然后加入碱。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（3）中，所得交联透明质酸微球的粒径为10-70μm。


5.根据权利要求1、3或4所述的制备方法，其特征是：水相中透明质酸或其盐的浓度为5-25wt%，水相中交联剂含量为5-150mg/mL，水相中碱含量为0.5-5wt%；优选的，所述交联剂为碳二亚胺、二乙烯基砜、乙二醇二缩水甘油醚、1,4-丁二醇二缩水甘...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏江伟，吴万福，潘存才，张燕，刘建建，郭学平，
申请(专利权)人：华熙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37