用于实现早期检测败血症并对治疗进行跟踪的方法的药盒技术

公开了一种早期检测败血症及检测败血症的严重程度并对治疗过程进行跟踪评估的方法，以及实现所述方法的药盒。根据本发明专利技术，测定了患者的体液样品中的肽前降钙素和／或其形成的非完整降钙素的肽片段的含量。通过测定这种确定的肽是否存在，含量多少，得出有关是否有败血症，败血症的严重程度以及／或者治疗效果的结论。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及诊断败血症的方法，特征是涉及败血症的早期检测，败血症严重程度的检测以及对败血症的治疗效果进行跟踪检测的方法。该方法以如下新见解为基础某种本身已知的肽和它的某些合适的片段代表了这类疾病的可靠生物指标，由于在发病时它们表现为高浓度，所以用传统的检测方法就能很方便地对其进行测定。根据对这一疾病的更新的理解，目前所说的“败血症”这个词概括了诸项临床特征，一般地说可观察到发热，血细胞增多，意识改变，肌力过度循环(热休克)以及代谢亢进，其主要原因在于微生物侵入了正常无菌组织。而象过去那样以检测血液中病菌作为败血症特征的方法，在败血症的诊断中已经变得不那么重要了。在临床研究中可以看到，对败血症病人病情的预断并不依据感染，尤其是细菌引起的感染的严重程度，而是依据生物体的脓毒性反应的严重程度(参见GPiLzSFateh-Moghadam和kWerdan在Krankenpflege杂志，29卷1991年PP.483-492页，以及其所引用的出版物)。因此，目前在对败血症的评估中，采用并测定多种实验室参数及血液动力学参数进行诊断和病情评估，取代了阳性血培养的方法，或与之并用。在必要时，还要用到计算机辅助的所谓Score系统，如上面提到的文献中所讲的APACHZ(急性生理学及慢性健康状况评估)ⅡScore系统，但迄今为止还没有找到一个可以作为确切的生物指标，对败血症的诊断有重大意义的参数。目前所用的所有参数，要么特异性不够好，要么不能对败血症的严重程度作出确切的评估，也不能做疗法监测，除此之外，测出诸如肿瘤坏死因子(TNF)或白介素如白介素6(IL-6)等物质对临床测定而言太复杂、昂贵并且费时。因此，急需一个易于测定并且其定性及定量对于败血症的诊断和进展评估具有重要指导性意义的生物指标。本专利技术的目地是提供一种早期检测败血症并对其严重程度进行检测的方法，该方法以在临床条件下切实可行的方式确定了一个新的生物指标，得到了与诊断败血症并评估治疗进展有重要关系的结果。通过权利要求书中所述的方法和药盒已达到这一目的。本专利技术以一个惊人的发现为基础，这一发现是本身已知的肽前降钙素或其高分子分裂产物，是与败血症密切相关的生物指标，它们在病人的体液样品中的浓度与败血症的严重程度密切相关，因而对败血症的进展评估及疗法监测而言，是一个很有价值的参数。因此，通过测定肽前降钙素来诊断败血症的可能性具有重大的实际意义。因为在败血症病例中可能出现的其他生物指标，如胞质分裂素(白介素，TNF)是一些不稳定的分子，一般只以很低的浓度出现，因此要在常规的临床诊断中测定它们困难很大，也很费时，因而花费很大。完全意想不到的是，根据本专利技术，凭以往的医学知识可以测定前降钙素，在败血症情况下，其以上含量剧增，因而可测得纳克(ng)级的浓度(每一毫升血清或血浆中达一纳克上，特别是10纳克～500纳克以上)，而对于健康人，即使用当今最好的测定方法也检测不到前降钙素的含量(样品浓度低于0.1ng/ml)，同时，根据本专利技术，在败血症病例中，未观察到降钙素浓度增加，这值得注意，因为迄今为止，前降钙素一般被视为降钙素的前体，它的出现也导致降钙素的形成。本专利技术的方法要测定的肽前降钙素及其可能出现的蛋白水解分裂产物都是已知的，适宜定量及定性免疫诊断测定方法也是已知的。前降钙素是一种由116个氨基酸组成的肽，并且据目前所知，它是某种基因(CALC-1)转译表达的中间产物，并做为降钙素的前体，在大多数组织中，尤其是在甲状腺C细胞及肿瘤细胞中导致了肽激素降钙素的形成，而原始基因(CALC-1)除了形成前降钙素以外，还控制与前降钙素一基因有关的肽的形成，后者与前降钙素的长度及其51至116氨基酸序列有明显区别。参见J，Biol，chem，261∶31(1986)，pp，14386-14391。根据常识，前降钙素是伯蛋白前降钙素前体的水解降解的产物，基因CALC-1表达成某种形式就形成了前降钙素的前体，前降钙素通常按照表现出来的几种形式，借助于完整的降钙素的释放，进行逐步的分段降解，完整的降钙素与一个由32个氨基酸组成的序列(前降钙素的60～81氨基酸)相对应。在这一过程中，开始有两个更大的肽与其它的肽一同形成，它们可能被称作N-前降钙素-(1-57)-肽及C-前降钙素-(60～116)-肽，后者能进一步分裂成激素降钙素及被称作为下降钙素的肽(Bio-chem，J，256，1986，PP245-250，和cdncerResearch，49，1989，PP6845-6851)。目前根据J，Biol，Chem，226(36)，PP24627-24631文献报导可知，除了上述文献中描述的前降钙素以外，在人甲状腺C细胞中还形成一种前降钙素的变体，它在C末端的最后8个氨基酸与前者不同这个肽在本专利技术意义上也被视作“前降钙素”，因为目前本专利技术的研究所采用的免疫诊断测定的方法分辨不出这两种前降钙素以及可能出现的其它与之密切相关的肽。因此，本专利技术意义上的“前降钙素”表示一种或多种肽，包括已知分子的前降钙素和上面提到的在C末端含有不同氨基酸组分的变体及在所用的选择性免疫诊断测定法中，特别是在下面将提到的单克隆免疫放射测定法中具有类似反应性的可能存在的变体。(参见CancerRes，49，1989，P6845-6851)所有这些肽都包含由57个以上氨基酸组成的肽序列，特别是象完整的前降钙素那样的116个氨基酸序列，它们或与已知的序列一致，或者部分一致，只是在相应于前降钙素的第108至116的氨基酸区域可能存在差别。根据以前对测定降钙素及其有关肽方法用于诊断的尝试可知，降钙素对许多恶性疾病是一个有价值的生物指标(肿瘤指标)，并且已经研究出大量专门用于测定降钙素的免疫疹断测定法，通过使用特异的单克隆抗体，这些方法得以实现(举例参见ClinicaOhimicaActa1988174PP35-54;和ImmunolVol141PP3156-3163和J，Endocr1988119PP351-357)。还是为了测定降钙素的前体，如前降钙素及C-前降钙素-(60～119)-肽，已经研究出一种免疫诊断测定法，这一方法根据免疫放射测定法的原理，除了可以测定降钙素外，还可以通过一对单克隆抗体选择地测定前降素钙素，这一对抗体中的一个特异于降钙素序列的外部(下降钙素的1～11氨基酸或前降钙素的96～107氨基酸)，例如以一种固定形式从包含这一序列的分析样品中提取肽;而这一对单克隆抗体中的另一个则用于构成免疫放射测定法的夹层特异于降钙素中相应于第11～17氨基酸的区域(前降钙素的70～76氨基酸)。在免疫测定中，用这一方式只能测定出那些具有与下降钙素的第1～11氨基酸区域一样的降钙素区域的肽。即或者相当于一个完整的前降钙素，或者是一个具有该指定区域的肽，如C-前降钙素-(60～116)-肽(参见Cancer Res 49 1989 PP 6845-6851)。用已知的方法，从现有的众多单克隆抗体中选出那些缔合常数在Kasn＝0.9～3.0×1010M-1范围的单克隆抗体命名为MAbKcoI和MAbcTo8)。这一已知的方法可直接运用于本专利技术相应的测定方法中，也可使用由J Immunol vol 141 No9本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于实现早期检测败血症及检测败血症的严重程度并对治疗过程进行跟踪评估的方法的药盒，从中可测得病人体液样品中的肽前降钙素和／或尚未形成完整的降钙素的肽片段，这种肽的存在及其含量预示着败血症的存在，严重程度以及／或者对败血症的治疗效果，其特征在于：用于测定前降钙素含量为０. １至５００ｎｇ／ｍｌ的血清或血浆的药盒内含有： 一个或多个固定在载体上用以与样品中的前降钙素结合的第一单克隆或多克隆抗体（抗体群）； 另一个携带标记并且与前降钙素在不同于第一抗体（群）的结合区域的另一区域相结合的抗体；以及一般辅助物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C博湖昂，
申请(专利权)人：BRAHMS诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]