一种高活性、高纯度线粒体提取与纯化方法技术

本发明专利技术涉及生物技术与生物医疗领域，具体涉及一种高活性、高纯度线粒体提取与纯化方法。该方法步骤如下：取动物组织或细胞，加入线粒体和胞浆蛋白制备试剂，匀浆，得匀浆液；将所述匀浆液离心，弃沉淀，保留上清液；将所述上清液离心，保留沉淀，得到粗提线粒体，将粗提线粒体用IB溶液重悬，记作A溶液；将冰浴15％Percoll溶液与A溶液按照1：1的体积比混合后，离心，弃上清液，保留沉淀；将沉淀加入到IB溶液中，离心，弃上清，保留沉淀，清洗沉淀，去除Percoll溶液后得到纯化的线粒体；该方法所获得的线粒体比市售商品化试剂盒所提取的线粒体的纯度更高、活性更高，可用于科学实验研究。

【技术实现步骤摘要】
一种高活性、高纯度线粒体提取与纯化方法
本专利技术涉及生物技术与生物医疗领域，具体涉及一种高活性、高纯度线粒体提取与纯化方法。
技术介绍
线粒体是真核生物细胞内重要的细胞器，是细胞能量代谢和氧代谢的场所，参与氧化磷酸化，三羧酸循环，储存钙离子等，在细胞的生存和死亡过程中发挥关键作用。线粒体是对各种损伤最为敏感的细胞器之一。在细胞受到损伤后，线粒体的结构及功能改变如膜电位、呼吸链、蛋白定位、细胞色素C、氧自由基等的异常，可直接或间接引起细胞坏死或凋亡，最终引起各种疾病的发生。目前已发现线粒体基因、结构和功能异常与衰老、肿瘤、心血管病、糖尿病及神经退行性疾病等100多种疾病相关。线粒体功能研究已成为细胞生物学领域重要研究热点之一。线粒体功能的研究需要纯化的，高活性的线粒体。目前科学研究中用到的线粒体分离方法主要为蔗糖密度梯度离心法或商品化的线粒体分离试剂盒，前者需要超高速离心机，一般实验室不具备，并且步骤繁琐用时较长，得到的线粒体活性较差，后者虽然大大缩减了提取时间但所提线粒体纯度较低，常含有其他细胞成份，如糖原、细胞碎片等。常常导致实验失本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高活性、高纯度线粒体提取与纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：/nS1，取动物组织或细胞，加入线粒体和胞浆蛋白制备试剂，匀浆，得匀浆液；/nS2，将所述匀浆液离心，参数设置为4℃，1000g，5min，保留上清液；将所述上清液离心，参数设置为4℃，10000g，8min，保留沉淀，得到粗提线粒体，将粗提线粒体用IB溶液重悬，记作A溶液；/nS3，将冰浴15％Percoll溶液与A溶液按照1：1的体积比混合后，离心，弃上清液，保留沉淀；/nS4，将S3的沉淀加入到IB溶液中，离心，弃上清，保留沉淀，清洗沉淀，去除15％Percoll溶液后得到纯化的线粒体；/n其中，所述IB溶液由D-甘露...

【技术特征摘要】
1.一种高活性、高纯度线粒体提取与纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：
S1，取动物组织或细胞，加入线粒体和胞浆蛋白制备试剂，匀浆，得匀浆液；
S2，将所述匀浆液离心，参数设置为4℃，1000g，5min，保留上清液；将所述上清液离心，参数设置为4℃，10000g，8min，保留沉淀，得到粗提线粒体，将粗提线粒体用IB溶液重悬，记作A溶液；
S3，将冰浴15％Percoll溶液与A溶液按照1：1的体积比混合后，离心，弃上清液，保留沉淀；
S4，将S3的沉淀加入到IB溶液中，离心，弃上清，保留沉淀，清洗沉淀，去除15％Percoll溶液后得到纯化的线粒体；
其中，所述IB溶液由D-甘露醇、D-蔗糖、浓度为0.5M的HEPES-KOH和浓度为0.5M的MEGTA-KOH溶于水制得，每1000ml的IB溶液中溶解40-41gD-甘露醇，23-24gD-蔗糖，5mlHEPES-KOH，2mlMEGTA-KOH，KOH调pH＝7.4；
所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张坤，冯源，赵吉倩，武胜昔，王亚周，郇宇，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，中国人民解放军中部战区总医院，
类型：发明
国别省市：陕西;61