重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法技术

本公开提供一种重组人胰高血糖素样肽‑1类似物融合蛋白的制备方法，以含有重组人胰高血糖素样肽‑1类似物融合蛋白的酵母工程菌发酵液上清为对象，在辛酸钠和氨甲环酸存在的条件下进行加热灭酶，减少了目的蛋白在分离纯化过程中的降解和生物活性损失，提高了注射用重组人胰高血糖素样肽‑1类似物融合蛋白的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种基因工程菌重组表达外源目的蛋白的分离纯化方法，更具体涉及一种重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法。
技术介绍
胰高血糖素样肽-1（GLP-1）及其类似物例如Exendin-4被广泛的用来研究治疗2型糖尿病，由于GLP-1多肽在体内被蛋白酶二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)所迅速失活，在血浆中的半衰期很短，使其难以在临床上被广泛使用；而Exendin-4对DPP-Ⅳ的酶降解不敏感，其稳定性增加，但分子量较低（4187.61D），在体内半衰期短，所以每天必须注射两次，这阻碍了在临床上使用。目前许多努力用来解决这个技术难题，例如缓释微球、PEG修饰，脂肪酸链修饰，白蛋白融合。其中白蛋白融合技术在保持目的蛋白的生物学和治疗功能的同时，通过与人白蛋白融合大大提高了其在体内半衰期。尽管GLP-1类制剂及其衍生物用于治疗糖尿病是现实可行的，但是因为糖尿病患者一经诊断后必须长期持续给药，终生接受治疗，因此对于该类制剂的安全性、经济性和使用便利性的要求都是极其迫切的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，包括工程菌构建、诱导表达、重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白纯化；/n其特征在于，在诱导表达步骤和重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白纯化步骤之间包括对诱导表达发酵液进行预处理的步骤，所述预处理是在添加辛酸钠和氨甲环酸的条件下对工程菌诱导表达的发酵液进行加热处理。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，包括工程菌构建、诱导表达、重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白纯化；
其特征在于，在诱导表达步骤和重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白纯化步骤之间包括对诱导表达发酵液进行预处理的步骤，所述预处理是在添加辛酸钠和氨甲环酸的条件下对工程菌诱导表达的发酵液进行加热处理。


2.如权利要求1所述重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，其特征在于：预处理步骤中辛酸钠和氨甲环酸的摩尔比为1-2：1-2，终浓度分别为10-20mM。


3.如权利要求1所述重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，其特征在于：预处理步骤加热温度为65-70℃，68℃；处理时间为30min-2h。


4.如权利要求1所述的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，其特征在于：将工程菌诱导表达的发酵液调节至pH6.5-7.5之间进行预处理。


5.如权利要求1-4任一所述的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白包括GLP-1类似物、载体蛋白、可选的位于二者之间的蛋白接头。


6.如权利要求5所述的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述GLP-1类似物如SEQIDNO:1所示，所述载体蛋白为HSA，所述蛋白接头选自SEQIDNO:2-4之一。


7.如权利要求5所述的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的制备方法，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：任杰，游猛，梅菲，方鹏，谭小钉，陆游，范敏，曹雨霞，
申请(专利权)人：迈威上海生物科技股份有限公司，江苏迈威康新药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31