用于碱基编辑的融合蛋白制造技术

本发明专利技术提供一种融合蛋白，所述融合蛋白包括载脂蛋白BmRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)和成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)相关(Cas)蛋白，任选地其进一步与尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)融合。即使胞嘧啶在GpC中或为甲基化的，这种融合蛋白也能够通过使胞嘧啶脱氨基为尿嘧啶，从而在DNA中进行碱基编辑。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于碱基编辑的融合蛋白本申请要求2018年2月23日提交的PCT/CN2018/076991和2018年8月14日提交的PCT/CN2018/100411的优先权。上述申请的说明书通过引用整体合并于此。
本专利技术属于基因编辑领域，具体涉及一种用于碱基编辑的融合蛋白。
技术介绍
基因组编辑是一种基因工程，其使用工程核酸酶(分子剪刀)在生物体的基因组中插入、删除或取代DNA。使用基因组编辑工具对细胞和生物体的基因组进行遗传操作，在生命科学研究、生物技术、农业技术开发和最重要的药物或临床创新方面具有广泛的应用兴趣。例如，基因组编辑可用于纠正遗传疾病背后的驱动突变，从而完全治愈生物体内的这些疾病；基因组编辑也可用于改造作物的基因组，从而提高作物产量并赋予作物对环境污染或病原体感染的抗性；同样地，通过精确的基因组编辑进行微生物基因组转化对于可再生生物能源的开发具有重要意义。CRISPR/Cas(成簇规律间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白)系统因其无与伦比的编辑效率、便利性和在生物体中的潜在应用而成为最强大的基因组编辑工具。在向导本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含第一片段和第二片段，其中第一片段包含载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)，第二片段包含成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)相关(Cas)蛋白。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180223 CN PCT/CN2018/076991;20180814 CN PCT/CN201.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含第一片段和第二片段，其中第一片段包含载脂蛋白BmRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)，第二片段包含成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)相关(Cas)蛋白。


2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白进一步包含尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)。


3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白共包含少于2500个氨基酸残基。


4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，根据SEQIDNO:1的残基编号，所述APOBEC3A为野生型人APOBEC3A或具有选自Y130F、D131Y、D131E、Y132D、W104A、W98Y、P134Y及其组合组成的组的突变的人APOBEC3A的突变体，其中所述突变体保留胞苷脱氨酶活性。


5.如权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，根据SEQIDNO:1中的残基编号，所述APOBEC3A为人APOBEC3A的突变体，其具有选自Y130F+D131E+Y132D、Y130F+D131Y+Y132D、W98Y+W104A、W98Y+P134Y、W104A+P134Y、W104A+Y130F、W104A+Y132D、W98Y+W104A+Y130F、W98Y+W104A+Y132D、W104A+Y130F+P134Y和W104A+Y132D+P134Y组成的组的突变。


6.如权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，所述人APOBEC3A为人APOBEC3A亚型a或亚型b。


7.如权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，所述APOBEC3A包含如SEQIDNO:1或6所示的氨基酸序列，或与如SEQIDNO:1所示的氨基酸残基的第29-199位具有至少90％的序列同一性并保留胞苷脱氨酶活性。


8.如权利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述APOBEC3A包含选自如SEQIDNO:1-10和22-36组成的组所示的氨基酸序列。


9.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述Cas蛋白选自由SpCas9、FnCas9、St1Cas9、St3Cas9、NmCas9、SaCas9、AsCpf1、LbCpf1、FnCpf1、VQRSpCas9、EQRSpCas9、VRERSpCas9、RHAFnCas9、KKHSaCas9、NmeCas9、StCas9、CjCas9、AsCpf1、FnCpf1、SsCpf1、PcCpf1、BpCpf1、CmtCpf1、LiCpf1、PmCpf1、Pb3310Cpf1、Pb4417Cpf1、BsCpf1、EeCpf1、BhCas12b、AkCas12b、EbCas12b、LsCas12b、RfCas13d、LwaCas13a、PspCas13b、PguCas13b、RanCas13b、CasX和CasY组成的组。


10.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述Cas蛋白选自由SpCas9、FnCas9、St1Cas9、St3Cas9、NmCas9、SaCas9、AsCpf1、LbCpf1、FnCpf1、VQRSpCas9、EQRSpCas9、VRERSpCas9、RHAFnCas9、KKHSaCas9、NmeCas9、StCas9、CjCas9、AsCpf1、FnCpf1、SsCpf1、PcCpf1、BpCpf1、CmtCpf1、LiCpf1、PmCpf1、Pb3310Cpf1、Pb4417Cpf1、BsCpf1、EeCpf1、BhCas12b、AkCas12b、EbCas12b、LsCas12b、RfCas13d、LwaCas13a、PspCas13b、PguCas13b、RanCas13b、CasX和CasY组成的组的蛋白的突变体，其中所述突变体保留DNA结合能力但不引入双链DNA断裂。

【专利技术属性】
技术研发人员：陈佳，杨力，黄行许，杨贝，王潇，李佳楠，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：上海;31