物质的测定方法及试片技术

分析物的测定方法，该方法是利用包括试样中的分析对象物质生成可检测物质的化学反应的反应系统测定上述可检测物质，从而测定分析对象物质，其特征是，在包括可检测物质的生成反应的反应系统中存在层状无机化合物。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及采用一种反应系统，该系统根据试样中的分析对象物质的化学反应，生成可检测物质例如染料，通过测定该可检测物质来测定生物成分或环境试样等分析对象物质的方法，以及涉及该方法中使用的试片。
技术介绍
有关检测并定量分析试样中的分析对象物质、例如体液中的尿或血等生物成分，食品、医药、自然环境中存在的微量物质、工业化学物质、废弃物中的微量物质等的方法，已经涉及采用分析对象物质参与的反应系统、测定反应生成的色素等可检测物质的方法。这类方法例如有，在过氧化物酶(POD)存在下，使分析对象物质的化学反应生成的过氧化氢与被氧化性显色剂(色素前体)进行氧化还原反应，对生成的色素化合物进行比色定量的方法等，这种方法由于十分简便在临床检查中被广泛使用。此外，还有一种方法是，利用酶等使电子传递物质(介体)与分析对象物质之间产生氧化/还原反应，根据生成的电子传递物质的氧化体/还原体在电极上还原/氧化时的电化学应答测定分析对象物质。但是，采用以往的方法时，如果分析对象物质量少，测定的灵敏度不足，不能得到高精度的测定结果，因此，人们希望研制出提高测定灵敏度的高精度的测定方法。以往的方法还有一个缺点是，反应时间很长，因此测定需要耗费很长时间，或者，到达检测反应结束需要很长时间，因此采用根据反应速度进行定量的速率法时定量精度较差。为了解决上述问题，以往有人对反应系统加热，以提高反应速度或者提高参与反应的试剂的浓度等方法。但是，采用反应系统加热的方法时，为了进行加热需要有热源，使分析变得复杂化。另外，在生成物质是热不稳定的情况下，检测发生困难，因此不能采用这种方法。另一方面，提高试剂浓度的方法，由于检测的本底计数上升和分析成本的增加，也不实用。另外还有一种方法是，为了提高反应速度而添加催化剂等，但有很多检测反应目前还找不到适宜的催化剂，这种方法也未达到实用程度。如上所述，以往的方法存在许多不足，因而迫切希望更简单、反应速度快、能迅速进行测定的新方法。此外，在生成可检测物质的反应系统中，包括生成对反应溶剂不溶解的物质的场合，存在下面不利的问题(1)在间歇式自动生化检验装置等使用液体试剂进行光学检测的测定时，如果反应生成的色素不溶解于溶剂，它们就会析出，附着在测定池的壁上，遮住入射光和透射光，或者造成分注嘴污染，使测定难以进行。(2)同样，在使用液体试剂进行光学检测时，如果生成不溶性副产物，这些副产物就会析出，附着在测定池的壁上，遮住入射光和透射光，或者造成分注嘴污染，或者由于聚集而引起散射或遮光等，使测定难以进行。(3)在将试样点滴或渗透到试片中，使之反应，用光学方法检测生成的色素的测定过程中，如果生成的色素不溶解于试样溶剂，这些色素就会不均匀地沉淀到试片基材上，或者色素产生聚集，导致测定精度恶化。(4)在间歇式自动生化检验装置等使用液体试剂的电极测定过程中，如果生成不溶性副产物，电极表面就会被不溶性沉淀物覆盖，引起电极污染，使电化学应答降低，导致测定精度恶化。不溶性与难溶性的差别在于不溶解于溶剂的程度，在本专利技术中，下文中所述的不溶性也可以由难溶性替换。另一方面，特别是在生成的可检测物质于反应溶剂中不溶解的场合，采用以往的方法时，可检测物质的生成反应系统不均一，反应不能迅速进行，因此有时导致反应速度和测定灵敏度低下，例如在使用酶的反应系统中，有时生成物会沉淀到酶附近，阻碍反应的进行。因此，利用在进行反应的反应溶剂中生成不溶性副产物的反应来测定的方法几乎都不能使用。因此，不得不选择采用不生成不溶性生成物的反应检测系统，或者采用合成化学方法使生成物可以溶解于反应溶剂中，研制、开发新的检测反应系统，但是，这样的反应系统十分有限。要研制、开发只生成可溶性物质的反应系统需要大量的人力和物力。另外，为了实现可溶解化、乳化或分散等状态，需要添加表面活性剂，但添加表面活性剂对于测定成本是不利的，而且还妨碍反应进行，有许多副作用，未必是一个好的解决办法。因此，迫切需要以更简单的方式解决上述问题，研制出在不溶性生成物存在的条件下也能进行测定的新方法。另外，利用生成上述过氧化氢的反应系统测定分析对象物质的方法，有许多反应随着氧化而产生过氧化氢，因此这些方法是重要的测定方法。但以往的方法由于下述原因不能保证容易地进行准确地测定，即在这些测定方法中，色素化合物等可检测物质的量或浓度必须与过氧化氢等特定物质在某些情况下定量相关，由于过剩的过氧化氢的强氧化性或生物试样中的抗坏血酸等的强还原性，使比色定量法中的氧化还原系统受到影响，上述色素化合物等可检测物质被分解，致使测定产生误差。例如，在这些测定方法中，葡萄糖等分析对象物质受葡糖氧化酶等氧化酶的作用一下子生成过量的过氧化氢时，除了色素前体与过氧化氢的反应外，还出现生成的色素与过氧化氢的反应。结果，生成的色素在它形成的同时就被过氧化氢所分解，导致退色。另外，过氧化物酶使过氧化氢生成富有反应性的超氧化物等活性氧类，如果试样中存在这样的过氧化物酶，或存在具有类似作用的过渡金属离子及其配合物，活性氧类就会与生成的色素反应，使之分解、褪色。这种干扰也会给测定带来一些麻烦。此外，生成色素等可检测物质的反应在暴露于大气中的状态下进行时，生成的色素被空气中的氧或溶解在反应液中的氧所氧化，发生分解和褪色。因此，人们进行了各种试验，寻找可以提供不易分解的稳定物质的色素前体以及添加各种稳定化剂等，但结果都不甚理想。另外，在生物试样中含有抗坏血酸、尿酸、胆红素等还原性物质，它们对氧化还原反应的影响很大，特别是在抗坏血酸共存条件下如何准确进行测定，多年来一直是临床分析中研究的课题。除了上述色素前体的探索之外，人们还进行了各种尝试，研究利用酶的选择分解、利用添加过碘酸的分解、利用铁-乙二胺四乙酸螯合物的氧化分解、利用半透膜的选择分离等抑制干扰手段(参见太田宜秀、小川丰《临床检查》34(4)，502-504(1990)；特公平1-41223；特公平2-4861；特公平4-18630；特开平5-95795；特开平7-155196)。此外还有一种方法是，利用除氧化还原反应之外的各种公知的反应(例如酸碱反应之类的缩合反应，或重氮盐的偶联反应、配合物形成反应等)生成与特定的分析对象物质存在定量关系的色素(例如偶氮系色素等)，用光学方法对生成的色素进行定量，从而测定特定的分析对象物质。这些方法在分析化学手册中有详细的描述，是一些重要的方法。但是，有的时候，这样生成的色素是不稳定的化合物，会被环境中的氧及试样中的氧化性物质或还原性物质、试样中的氢离子或碱、光等的作用所分解，在测定这样的物质时，例如，要求操作迅速，或者要求在用氮置换大气的环境或遮光的环境中进行操作，不然的话就会产生误差。另外，在使用电子传递物质(介体)的方法的场合，还有一种方法是，在酶反应进行一预定时间，这期间电子传递物质发生氧化/还原，使电子传递物质的氧化体/还原体蓄积起来，经过一定时间后，蓄积的电子传递物质的氧化体/还原体在电极上还原/氧化，产生很大电化学应答，从而能以高的灵敏度测定分析对象物质，但是，有时蓄积的电子传递物质的氧化体/还原体被与其共存的还原性物质或氧化性物质所还原/氧化，发生分解反应，致使测定产生误差。如果可检测物质不发生分解，保持稳定，测定时能保证本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：福冈隆子，片山敦子，山原建次，米原聪，
申请(专利权)人：株式会社京都第一科学，
类型：发明
国别省市：