进行血细胞记数的方法技术

提供了一种评定基本上未稀释的抗凝全血样品的组分的方法，该方法包括如下步骤：ａ）提供一个样品室（１０）；ｂ）将一种敏感着色剂与全血样品掺和；ｃ）将所述掺和后的样品放入该样品室；ｄ）将所述掺和后的样品静态保持一段时间直至在所述样品内形成红细胞钱串（３０）和陷窝（３２）；以及ｅ）评定所述陷窝（３２）中存在的靶组分。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析全血样品的方法和装置，并且涉及评定全血样品中的组分(例如白细胞、血小板等)的方法和装置。分析血液学中的最近进展已增大了可从患者血样获得的信息的数量和质量。结果，医疗界在应用患者血样作为诊断工具方面的兴趣也增大了。然而，分析血样的方法并非在各方面都能跟上可获得的信息。历史上，血样是这样评定的将少量未稀释的血液涂抹在载玻片上，干燥，固定和染色，再在显微镜下检测该涂抹物。从这种涂抹物可获得合理的结果，但数据的准确性和可靠性则主要取决于技术员的经验和技术。此外，血液涂抹物既耗人力又使成本过高，所以，一般不利于商用。评定全血样品的另一已知方法包括稀释一定体积的全血，将它放入样品室，然后，人工评定稀释后样品中的组成细胞。有必要进行稀释，因为全血中红细胞(RBC’s)的数量和浓度都大大超过其它组成细胞。在来自典型个体的全血样品中，例如，有大约4．5×106个RBC’s／微升(μl)血样，但每μl血样只有大约0．25×106个血小板和0．007×106个白细胞(WBC’s)。要测定WBC数，必须在大约一份血液比二十份稀释剂(1∶20)至大约1∶256稀释度的范围内稀释全血样品，这取决于应用的确切技术，并且，一般还有必要用一种或多种试剂选择性地溶解RBC’s。溶解RBC’s有效地从视野除去它们，这样就能看见WBC’s。要测定血小板数，必须在大约1∶100至大约1∶50，000的范围内稀释血样。不过，血小板计数不需要溶解样品中的RBC’s。这种评定全血样品的方法一个缺点是稀释过程既费时又昂贵。此外，往全血样品中添加稀释剂会增大样品数据的错误可能性。一种评定血样的现代方法是阻抗或光学流式细胞仪。流式细胞仪涉及使稀释的血样通过一个或多个小直径孔循环，每个孔邻接一个阻抗型或光学型传感器，随着组成细胞通过单行孔，所述传感器就评定组成细胞。此处又一次必须稀释血样以便调节相对于WBC’s和血小板来说多得多的RBC’s数。尽管比前述方法更方便且更稳定，但流式细胞仪也具有数个缺点。这些缺点的一些来自需要将样品带到传感器装置的管道，以及需要控制流过传感器装置的流体流速的流体控制器。准确控制样品流动对操作流式细胞仪来说极为重要。流式细胞仪中的管道可能而且常常会渗漏，很可能危及仪器的准确性和安全性。另一方面，流体流动控制器和稀释器件需要定期再校准。对再校准的需要说明，就目前很多可获得的应用流式细胞仪的血液学分析仪来说，存在可能的不准确结果和不希望的操作费用。另一个缺点是需要的试剂量。由于应用大稀释比率，所以需要相应大量的液体试剂。大试剂量增大了测试费用并引起废物处理问题。细胞分析的另一种方法是容量毛细管扫描法(volumetric capillaryscanning)，如美国专利Nos．5，547，849和5，585，246中概述的那样，例如，其中，将相关未稀释的全血样品置于已知容积和厚度的毛细管中，当血液呈静止状态时检测。该方法通过限定扫描波长(在那些波长时RBC’s显得较透明)处理存在的RBC’s，而且，它需要处理样品以致RBC’s在检测过程中不凝聚。所以，该方法限于更长波长荧光的应用，并且，对于RBC’s和血小板的检测或任何细胞形态学的检测没有保证。需要评定基本上未稀释的抗凝全血样品的方法和装置，所述方法和装置1)能提供准确的结果；2)在分析前不需要除去RBC’s；3)能应用宽范围的样品检测的光激发源；4)不应用大量试剂；5)在分析过程中不需要样品流体流动；6)能分析样品中的全部或几乎全部细胞和粒子；以及7)是成本低的。因此，本专利技术的一个目的是提供一种准确评定基本上未稀释的抗凝全血样品组分的方法。另一个目的是提供评定全血样品的方法和装置，所述方法和装置不需要很多稀释。又一个目的是提供评定全血样品的方法和装置，所述方法和装置不需要应用大量液体试剂。又一个目的是提供评定全血样品的方法和装置，所述方法和装置不要求样品流体在评定过程中流动。又一个目的是提供评定全血样品的方法和装置，所述方法和装置不需要在分析前除去大部分RBC’s。又一个目的是提供评定样品的方法和装置，所述方法和装置能评定样品中的全部或几乎全部组分。又一个目的是提供使用简便的评定全血样品的方法和装置。本专利技术涉及用于检测盛于室内的静止的、基本上未稀释的抗凝全血样品并从该样品获取信息的方法和装置。本专利技术应用的术语“基本上未稀释的”描述了被不高于约1∶1稀释(优选小得多的稀释度)的血样。通常，实施本专利技术方法中将应用的仅有试剂是染料、染色剂和抗凝剂，这些试剂不是为了稀释样品而添加的，而是为了产生便利手头试验的反应、效果等而添加的。按本专利技术，提供了一种评定基本上未稀释的抗凝全血样品的组分的方法，该方法包括如下步骤a)提供一个样品室；b)将敏感着色剂与全血样品掺和；c)将掺和的样品放入样品室；d)将掺和的样品在室内保持静态直至样品中形成红细胞钱串和陷窝；以及e)评定陷窝中分布的靶组分。本说明书中应用的术语“着色剂”被定义为这样的任意试剂它通过荧光发射或者通过吸收特定波长的光产生可通过所述装置定量分析的敏感信号。本专利技术方法的一个优点在于，提供了一种评定基本上未稀释的抗凝全血样品组分的方法，该方法提供准确信息。具体地说，该方法不需流体流动控制器和样品稀释，所以避免了与它们相关的错误可能性。本方法的另一个优点在于，可以评定抗凝全血样品中的组分但基本上不需稀释该样品。本方法需要往全血样品中添加较少量的敏感着色剂，于是能使样品保持基本上未稀释。从而避免了与稀释相关的费用和问题。例如，借助本专利技术的方法，可应用与大约10μl用盐水稀释的着色剂或小于1μl干试剂掺和的、100μl以内的血样而获得有用的信息。又一个优点在于，当评定基本上未稀释的抗凝全血样品的组分时，本专利技术的方法不需要大量试剂。本领域技术人员将认识到，试剂量的减少有助于减少分析的原料费用和分析后用过的试剂的处理费用。本方法的又一个优点在于，不需要样品流体流动。本方法能使血样在静止(或“基本上未运动的”)状态下被评定。血样中仅有的运动将是样品内构成组分的布朗运动，该运动不妨碍本专利技术装置的应用。结果，避免了管道渗漏和与这种渗漏相关的任何环境问题和／或安全问题。此外，在静止状态评定样品还避免了流体流动控制器的应用，从而免除购买和维护这类控制器的费用。本领域技术人员应认识到，与很多流式细胞仪相关的维护费用是可观的，所以，免除那些费用是一个明显的优点。根据如附图所阐释的本专利技术最佳实施方案的详细描述，将使本专利技术的这些和其它目的、特征与优点变得明显。附图说明图1是一种样品室的透视图。图2是一种样品室的剖视图，它包括倾斜的第二块平壁。在第一块壁和第二块壁之间形成了直通平面(through-plane)厚度梯度。图3是一种样品室的剖视图，它包括位于具有多级梯阶的第一块壁上面的第二块平壁。所述多级梯阶在不同的直通平面厚度提供多个室区。图4是一种样品室的剖视图，它具有位于第一块壁上面的第二块平壁，第一块壁展示的一个表面与第二块平壁成一定角度。在第一块壁和第二块壁之间形成了直通平面厚度梯度。图5是一种样品室的示意图，它阐释了在形成红细胞钱串和陷窝之前的基本上未稀释的抗凝全血样品形象化不透明外观。图6是一种样品室的示意图，它阐释了在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种评定基本上未稀释的抗凝全血样品的组分的方法，所述方法包括如下步骤： 提供一个在第一块壁（１６）和透明的第二块壁（１８）之间形成的样品室（１０），所述两块壁在所述室的第一区内隔离第一个直通平面厚度（２０）； 将一种敏感着色剂与样品掺和，其中，所述着色剂区分样品中的一种或多种组分； 将所述掺和后的样品放入所述室，使所述掺和后的样品与所述室的所述第一区内所述第一块壁和第二块壁接触； 将所述掺和后的样品在所述室内静态保持一段时间； 其中，在所述期间，在所述静态保存的样品内形成一个或多个与陷窝（３２）邻接的红细胞钱串（３０），并且所述着色剂区分的组分存在于所述陷窝中；以及 评定所述陷窝中一个或多个视区（３８）内的所述区分的组分。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬C沃德罗，
申请(专利权)人：斯蒂芬C沃德罗，沃德罗合伙有限公司，罗伯特A利费恩，
类型：发明
国别省市：US[美国]