本发明专利技术公开了一种新的与肿瘤相关的人蛋白ＨＣ６，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于诊断和治疗诸如癌症等疾病的方法。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种与肿瘤相关的人蛋白的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及新的编码人肿瘤相关蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。恶性肿瘤的死亡率在我国仅次于心、脑血管疾病名列第二。在恶性肿瘤中肝癌的死亡率列在肺癌、胃癌之后居第三位。目前对肝癌(除小肝癌外)缺乏有效的诊治手段。人们普遍认为癌的发生是一种多因子多步骤的复杂事件，是多种癌基因激活和抑癌基因失活的结果。其中抑癌基因可能更为关键。因此寻找肿瘤抑癌基因是目前研究的热点之一。基因经常通过一个等位基因的丢失(杂合子缺失，Loss ofHeterozygocity，LOH)而失去一种正常性状，LOH频发部位可能存在抑癌基因。上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室长期从事人肝癌基因的研究，早在1991年就发现肝癌的发生与p53失活有关，该基因不仅249编码子突变，还有其它编码子出现点突变(Li D.Z；Gu JR et al Carcinogenesis 14(2)169，1993)。p53位于人染色体17p13.1。另外，对17p13.3区段内的研究国外也有报导。Nishida等(Noashi Nishida et al.，Cancer Research 53368-372，1993)在17p上选10个多态性探针，研究人肝癌的17pLOH和p53基因突变之间的关系，他认为肝癌的发生可能与17p13.3上未被证明的肿瘤抑制基因有关。Schultz等(David C.Schultz，et al.，Cancer Research 561997-2002 1996)，用等位基因丢失作图和定点克隆方法证明了两个新基因OVCA1和OVCA2，定位于17p13.3，这两个新基因在正常的卵巢上皮细胞有表达，在卵巢瘤或卵巢瘤细胞株中表达减少或无表达。Wales等(Michele M.Wales et al.，NatureMedicine570-577，1995)，通过肿瘤组织DNA高度甲基化分析，在17p13.3区域发现一个后选基因Hic-1，它是一个锌指结构转录因子，在正常组织普遍表达，在肿瘤细胞中表达降低。然而，上述报告存在以下不足之处1.没有报导肝癌组织LOH频率的最小范围和位点。2.上述发现的后选基因与肝癌的关系未见报导。由于癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤(如肝癌)，目前人们已越来越关注肿瘤的早期诊断和基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究新的癌症相关的和/或具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。本专利技术的目的是提供一种新的肿瘤相关蛋白-人HC6蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供了一种分离的人HC6蛋白多肽，它包括具有SEQ IDNO2所示氨基酸序列的多肽，或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该该多肽是具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码如 1和2所述多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有SEQ ID NO2所示的氨基酸序列；更佳地，该多核苷酸具有选自下组的序列SEQ ID NO3中所示的编码区序列(第128-532位)或全长序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备肿瘤相关HC6蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含(a)在适合表达蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有肿瘤相关HC6蛋白活性的多肽。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的肿瘤相关HC6蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术的肿瘤相关HC6蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。在本专利技术的第七方面，提供了一种检测肝细胞是否发生癌变或存在癌变易感性的方法，它包括步骤检测肝细胞样品中HC6转录本与正常的HC6转录本相比是否有变化，有变化就表示该肝细胞发生癌变或存在癌变易感性；或者检测肝细胞样品中HC6蛋白的活性与正常的HC6蛋白相比是否有变化，有变化就表示该肝细胞发生癌变或存在癌变易感性。较佳地，所述的变化是核苷酸的缺失、插入、或置换突变。在本专利技术的第八方面，提供了一种检测肝癌的试剂盒，它包括(1)特异性扩增人HC6基因的引物对，(2)检测扩增产物与正常的HC6基因相比是否存在变化所需的试剂。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。在附图中，附图说明图1和2是Southern杂交检测HC6在肝癌组织中的LOH状况，其中，基因组DNA以BamHI酶切；Q21、Q27、Q28、Q29、Q30、Z11、Z12、Z14为肝癌标本。K肝癌组织；L癌旁组织。图3显示了空质粒转染肝癌细胞株SMMC-7721的结果。图4显示了HC6转染肝癌细胞株SMMC-7721的结果图5显示了HC6基因的多组织膜Northern杂交结果。在肝癌的研究中，本专利技术人首先确定了肝癌组织在17p13.3范围内有高频率LOH(60-100％)。最近，通过对肝癌全基因组扫描也证明17p13.3是LOH的最高区域。本专利技术人对人17号染色体短臂13.3位点的癌相关表达序列(EST)进行了分离和全长克隆。用对应于17p13.3区段内926位点的噬菌体人工染色体(PAC)579号(P579)克隆，通过九倍鸟枪法(shotgun)测序得到其序列，应用计算机分析在其中找到1个代表新基因的EST，通过RACE方法获得全长核苷酸序列和编码的氨基酸，命名为HC6。通过Northern、Southern杂交，证明它们与肿瘤相关，体外实验证明它们可以抑制肝癌细胞7721的生长。因此，HC6基因可应用于肿瘤的诊断、治疗和预防。在本专利技术中，术语“HC6蛋白”、“HC6多肽”、“肿瘤相关HC6蛋白”或“肿瘤相关蛋白HC6”可互换使用，都指具有人肿瘤相关蛋白HC6氨基酸序列(SEQ ID NO2)的蛋白或多肽。该术语还包括含有或不含起始甲硫氨酸的肿瘤相关蛋白HC6。如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的肿瘤相关HC6蛋白或多肽”，“分离的HC6蛋白或多肽”是指肿瘤相关HC6蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化HC6蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。HC6蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的人ＨＣ６蛋白多肽，其特征在于，它包括具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽，或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：顾健人，温传俊，覃文新，赵新泰，万大方，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。