抗体纯化制造技术

提供了用于纯化抗体的方法。所提供的纯化方法涉及使用羟基磷灰石树脂(HA)以使感兴趣的抗体与一种或多种杂质物质分离。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体纯化本申请要求2018年2月27日提交的美国临时申请号62/635,943的优先权，其内容通过引用整体并入本文。领域本专利技术涉及用于从杂质(例如抗体降解产物)纯化抗体的方法。本文所公开的纯化方法涉及使用羟基磷灰石树脂。背景抗体是用于医学、诊断、工业及其他用途的重要生物分子。虽然许多方法和试剂可用于抗体的重组产生，但由于抗体的(例如)大小和分子复杂性，通常，特别是在大规模/工业规模生产水平下，仍难以有效地产生和纯化感兴趣的重组抗体。例如，在感兴趣的重组抗体的生产中，有时可能出现与感兴趣的抗体相关的降解产物；该降解产物是不想要的杂质。该降解产物可以具有非常类似于感兴趣的抗体的一些分子性质(例如相同或几乎相同的氨基酸序列或质量)。由于感兴趣的完整抗体与抗体的降解形式之间的分子相似性，可能极难有效地将完整抗体与经降解的抗体分离。因此，需要用于从杂质纯化抗体的新颖并且改进的方法。概述本文提供用于从一种或多种杂质纯化感兴趣的抗体的方法。在一些实施方案中，本文提供纯化抗体的方法，该方法包括：A)将加载缓冲液中的抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纯化抗体的方法，所述方法包括：/nA)将加载缓冲液中的抗体制剂加载至羟基磷灰石(HA)树脂上，其中/n所述抗体制剂包含：I)感兴趣的完整抗体和II)感兴趣的抗体的修剪形式，其中感兴趣的抗体的所述修剪形式为感兴趣的完整抗体的降解产物，并且其质量与感兴趣的完整抗体的质量相差小于10％；和/nB)用包含离子的洗脱缓冲液从HA树脂洗脱感兴趣的完整抗体，其中所述洗脱缓冲液中离子的浓度在洗脱期间增加。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180227 US 62/635,9431.一种纯化抗体的方法，所述方法包括：
A)将加载缓冲液中的抗体制剂加载至羟基磷灰石(HA)树脂上，其中
所述抗体制剂包含：I)感兴趣的完整抗体和II)感兴趣的抗体的修剪形式，其中感兴趣的抗体的所述修剪形式为感兴趣的完整抗体的降解产物，并且其质量与感兴趣的完整抗体的质量相差小于10％；和
B)用包含离子的洗脱缓冲液从HA树脂洗脱感兴趣的完整抗体，其中所述洗脱缓冲液中离子的浓度在洗脱期间增加。


2.一种纯化双特异性抗体的方法，所述方法包括：
A)将加载缓冲液中的抗体制剂加载至羟基磷灰石(HA)树脂上，其中：
所述抗体制剂包含：I)感兴趣的完整双特异性抗体；和II)至少一种杂质物质，其中所述种杂质物质选自：a)感兴趣的双特异性抗体的修剪形式，其中所述感兴趣的双特异性抗体的所述修剪形式为所述感兴趣的完整双特异性抗体的降解产物，并且其质量与感兴趣的完整双特异性抗体的质量相差小于10％；b)第一亲本抗体，其中所述第一亲本抗体为具有与所述完整双特异性抗体的第一臂相同的抗原特异性的单特异性抗体；c)第二亲本抗体，其中所述第二亲本抗体为具有与所述完整双特异性抗体的第二臂相同的抗原特异性的单特异性抗体；和d)高分子质量物质(HMMS)；和
B)用包含离子的洗脱缓冲液从HA树脂洗脱所述感兴趣的完整双特异性抗体，其中所述洗脱缓冲液中离子的浓度在洗脱期间增加。


3.一种纯化双特异性抗体的方法，所述方法包括：
A)将加载缓冲液中的抗体制剂加载至羟基磷灰石(HA)树脂上，其中：
I)所述抗体制剂包含：a)感兴趣的完整双特异性抗体和b)所述感兴趣的双特异性抗体的修剪形式，其中所述感兴趣的抗体的所述修剪形式为所述感兴趣的完整双特异性抗体的降解产物，并且其质量与所述感兴趣的完整双特异性抗体的质量相差小于10％；和
II)所述抗体制剂中所述修剪的双特异性抗体的分子与所述完整双特异性抗体的分子的比率在至少1:50与不大于1:5之间；
B)用包含离子的洗脱缓冲液从所述HA树脂洗脱所述完整双特异性抗体，其中所述洗脱缓冲液中离子的浓度在洗脱期间增加，和任选地，
C)收集从所述HA树脂洗脱的经纯化的级分，其中所述经纯化的级分包含所述完整双特异性抗体。


4.权利要求1的方法，其中所述抗体为异源二聚体双特异性抗体。


5.权利要求1或2的方法，其进一步包括收集从所述HA树脂洗脱的经纯化的级分，其中所述经纯化的级分包含所述感兴趣的完整抗体，并且其中所述经纯化的级分包含以质量计至少95％、96％、97％、98％或99％的感兴趣的完整抗体。


6.权利要求3的方法，其中所述经纯化的级分包含所述完整双特异性抗体和所述修剪的双特异性抗体，此外，其中所述经纯化的级分中修剪的双特异性抗体分子与完整双特异性抗体分子的比率不大于1:100。


7.权利要求l的方法，其中所述感兴趣的抗体为抗-CD3抗体，并且其中所述抗体包含以下中的至少一种：i)包含如SEQIDNO：1中所示氨基酸序列的VH区；ii)包含如SEQIDNO：2中所示氨基酸序列的重链；iii)包含如SEQIDNO：1中所示氨基酸序列的VH区和包含如SEQIDNO：3中所示氨基酸序列的VL区；或iv)包含如SEQIDNO：2中所示氨基酸序列的重链和包含如SEQIDNO：4中所示氨基酸序列的轻链。


8.权利要求2-6中任一项的方法，其中所述双特异性抗体为：i)包含抗-BCMA臂和抗-CD3臂的抗-BCMA/抗-CD3双特异性抗体，或ii)包含抗-FLT3臂和抗-CD3臂的抗-FLT3/抗-CD3双特异性抗体。


9.权利要求8的方法，其中所述抗-CD3臂包含以下中的至少一种：i)包含如SEQIDNO：1中...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·伊斯克拉，A·M·萨克拉莫，
申请(专利权)人：辉瑞大药厂，
类型：发明
国别省市：美国;US