抗-类EGF结构域多重6(EGFL6)抗体及其于癌症诊断及治疗中的应用制造技术

本发明专利技术系关于抗‑类EGF结构域多重6抗体(抗‑EGFL6抗体)及使用该抗‑EGFL6抗体的癌症检测(或诊断)及治疗。本发明专利技术产生能够结合至EGFL6且抑制血管生成及癌细胞生长的抗‑EGFL6抗体，尤其系单链抗体片段(scFv)及人类化抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗-类EGF结构域多重6(EGFL6)抗体及其于癌症诊断及治疗中的应用
本专利技术系关于癌症检测(或诊断)及治疗的领域。特定而言，本专利技术系关于抗-类EGF结构域多重6抗体(抗-EGFL6抗体)及使用该抗-EGFL6抗体的癌症检测(或诊断)及治疗。
技术介绍
癌症系在身体任何部位中异常细胞的不受控生长。异常细胞称为癌细胞、恶性细胞或肿瘤细胞。癌症的早期诊断通常增加了成功治疗或治愈该疾病的可能性。生物标记物系检测癌症的潜在工具。EGFL6系表皮生长因子(EGF)重复超家族蛋白的成员且由类EGF重复区及整联蛋白缔合基序(RGD)组成。EGFL6促进内皮细胞迁移及血管生成。GeorgeYeung等人报导，EGFL6编码预期信号肽，从而表明其得以分泌，且其转录物表现于脑及肺肿瘤及胎儿组织中(GeorgeYeung等人，Genomics62,1999,pp.304-307)。实施研究以鉴别卵巢肿瘤血管系统的分子特征且展示肿瘤血管标记物可用作卵巢癌的潜在生物标记物及分子靶，其中EGFL6系该等标记物之一(RonaldJ.Buckanovich等人，JournalofClinicalOncology,2007，第25卷，第7期，pp.852-861)。然而，一文章报导，EGFL6mRNA以高含量发现于卵巢癌中，其与良性脑膜瘤中相当，且与纤维母细胞脑膜瘤相比，EGFL6mRNA含量在所有其他所研究肿瘤中(包含神经胶质瘤、肺癌、肝细胞癌、胰脏癌、胃癌、乳癌、前列腺癌、结肠直肠癌及膀胱癌)显著降低(XuanchunWang等人，PLOSONE；2012，第7卷，第12期，e52707)。亦报导，EGFL6过度表现于W1TR细胞系中且系促进内皮细胞迁移及血管生成的分泌蛋白(RadoslawJanuchowski等人，OncologyReports32:1981-1990,2014)。另一文章报导，EGFL6系乳癌中的候选肿瘤血管系统配体(BenjiminMLarimer,J.MolBiomarkDiagn.2014,5(3):doi:10.4172/2155-9929.1000178)。WO2009057849揭示用于结肠癌的诊断组合物，其包括量测一或多种选自KLK6、CKS2、IFITMl、SPPl、DPEPl、CSTl、CDH3、ANLN、CXCLl、MELK、CDCAl、CTHRCl、CEACAM6、MMPl、LCN2、HS6ST2、EGFL6及CA9的基因的mRNA或蛋白质含量的药剂。然而，实际上并无单独EGFL6应用于临床癌症诊断。此外，亦需要研发用于癌症治疗的抗-EGFL6抗体。
技术实现思路
本专利技术提供经分离抗-EGFL6抗体或其抗原结合部分，其包括以下中的至少一者：由SEQIDNO:1或2的胺基酸残基组成的轻链CDR1(L-CDR1)，或具有与SEQIDNO:1及2中的任一者具有至少80％一致性的胺基酸序列的变体；由SEQIDNO:3或4的胺基酸残基组成的轻链CDR2(L-CDR2)，或具有与SEQIDNO:3及4中的任一者具有至少80％一致性的胺基酸序列的变体；及由SEQIDNO:5或6的胺基酸残基组成的轻链CDR3(L-CDR3)，或具有与SEQIDNO:5及6中的任一者具有至少80％一致性的胺基酸序列的变体；及以下中的至少一者：由SEQIDNO:7或8的胺基酸残基组成的重链互补决定区1(H-CDR1)，或具有与SEQIDNO:7及8中的任一者具有至少80％一致性的胺基酸序列的变体；由SEQIDNO:9或10的胺基酸残基组成的重链CDR2(H-CDR2)，或具有与SEQIDNO:9及10中的任一者具有至少80％一致性的胺基酸序列的变体；及由SEQIDNO:11或12的胺基酸残基组成的重链CDR3(H-CDR3)，或具有与SEQIDNO:11及12中的任一者具有至少80％一致性的胺基酸序列的变体；从而该经分离抗体或其抗原结合部分结合至EGFL6。本专利技术抗体的某些实施例包含单株抗体、嵌合抗体、人类化抗体及人类抗体。在一些实施例中，经分离抗-EGFL6抗体系单链Fv(scFv)、IgG、Fab、(Fab)2或(scFv')2。本专利技术一实施例包含含有具有选自由SEQIDNO:13或14组成的群的序列的胺基酸序列的轻链。本专利技术一实施例包含含有具有选自由SEQIDNO:15或16组成的群的序列的胺基酸序列的重链。在另一实施例中，本专利技术包括含有具有如SEQIDNO:13中所陈述胺基酸序列的轻链及具有如SEQIDNO:15中所陈述胺基酸序列的重链的经分离抗体(EL6_S12)。在另一实施例中，本专利技术包括含有具有如SEQIDNO:14中所陈述胺基酸序列的轻链及具有如SEQIDNO:16中所陈述胺基酸序列的重链的经分离抗体(EL6_E5)。本专利技术提供一种医药组合物，其包括本专利技术的抗-EGFL6抗体及医药上可接受的载剂或赋形剂。本专利技术亦提供治疗或预防个体的血管生成病症的方法，其包括向个体投与本专利技术的抗-EGFL6抗体。本专利技术亦提供抑制个体中的癌细胞生长或癌症转移的方法，其包括向个体投与本专利技术的抗-EGFL6抗体。在一些实施例中，上文所鉴别组合物及治疗方法中的每一者可另外包含其他抗肿瘤药物及投与一或多种其他抗肿瘤药物。本专利技术进一步提供检测或诊断个体中的癌症或升高的未来癌症发生风险或预测癌症的转移或预后的方法，其包括使来自个体的生物样本与本专利技术的抗-EGFL6抗体接触，量化样本中的EGFL6抗原与抗体的结合，及比较该结合与代表抗-EGFL6抗体与来自未患有癌症的对照个体的样本中所测定EGFL6抗原间的结合的参考值。本专利技术进一步提供监测已经诊断患有癌症的个体中的癌症进展的方法。本专利技术进一步提供用于检测或诊断个体中的癌症或升高的未来癌症发生风险或预测癌症的转移或预后或监测癌症进展的套组，其包括本专利技术的抗-EGFL6抗体。附图说明图1展示使用ELISA测得的抗-EGFL6抗体的结合活性。图2A及2B展示在西方印渍(Westernblotting)中藉由E5scFv(A)及S12scFv(B)鉴别的全长EGFL6蛋白及EGFL6-F396截短片段。图3展示藉由西方印渍量测的EGFL6在各种癌细胞系中的蛋白质表现。图4(A)及(B)展示，单链抗体Ab4、Ab5(E5)及Ab10可有效抑制癌细胞迁移(A)，且抗-EGFL6单链抗体与经太平洋紫杉醇(Paclitaxel)治疗的对照组相比可有效地抑制肿瘤囊的形成(B)。图5展示经抗-EGFL6单链抗体E5及S12治疗的裸小鼠的基质胶束中的血红蛋白含量。图6(A)及(B)展示，人类化IgG抗体S12及/或E5能够抑制结肠直肠癌细胞HCT-116(A)及非小细胞肺癌A549(B)中的肿瘤生长。图7(A)及(B)展示，人类化IgG抗体E5能够抑制三阴性乳癌细胞MDA-MB-231(A)及神经胶母细胞瘤癌细胞U87(B)中的肿瘤生长。...

【技术保护点】
1.一种经分离抗-EGFL6抗体或其抗原结合部分，其包括以下中的至少一者：由SEQ IDNO:1或2的胺基酸残基组成的轻链CDR1(L-CDR1)；由SEQ ID NO:3或4的胺基酸残基组成的轻链CDR2(L-CDR2)；及由SEQ ID NO:5或6的胺基酸残基组成的轻链CDR3(L-CDR3)；及以下中的至少一者：包括SEQ ID NO:7或8的胺基酸残基的重链互补决定区1(H-CDR1)；包括SEQID NO:9或10的胺基酸残基的重链CDR2(H-CDR2)；及包括SEQ ID NO:11或12的胺基酸残基的重链CDR3(H-CDR3)；从而由所述经分离抗体或其抗原结合部分与EGFL6结合。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171001 US 62/566,5091.一种经分离抗-EGFL6抗体或其抗原结合部分，其包括以下中的至少一者：由SEQIDNO:1或2的胺基酸残基组成的轻链CDR1(L-CDR1)；由SEQIDNO:3或4的胺基酸残基组成的轻链CDR2(L-CDR2)；及由SEQIDNO:5或6的胺基酸残基组成的轻链CDR3(L-CDR3)；及以下中的至少一者：包括SEQIDNO:7或8的胺基酸残基的重链互补决定区1(H-CDR1)；包括SEQIDNO:9或10的胺基酸残基的重链CDR2(H-CDR2)；及包括SEQIDNO:11或12的胺基酸残基的重链CDR3(H-CDR3)；从而由所述经分离抗体或其抗原结合部分与EGFL6结合。


2.根据权利要求1所述的抗-EGFL6抗体或其抗原结合部分，其系单株抗体、嵌合抗体、人类化抗体或人类抗体。


3.根据权利要求1所述的抗-EGFL6抗体或其抗原结合部分，其系单链Fv(scFv)、IgG、Fab、(Fab)2或(scFv')2。


4.一种轻链，其包括具有选自由SEQIDNO:13或14组成的群的序列的胺基酸序列。


5.一种轻链，其包括具有如SEQIDNO:13中所陈述序列的胺基酸序列，其中L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3分别经SEQIDNO:2、SEQIDNO:4及SEQIDNO:6置换。


6.一种轻链，其包括具有如SEQIDNO:14中所陈述序列的胺基酸序列，其中L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3分别经SEQIDNO:1、SEQIDNO:3及SEQIDNO:5置换。


7.一种重链，其包括具有如SEQIDNO:15或16所示序列的胺基酸序列。


8.一种重链，其包括具有如SEQIDNO:15所示序列的胺基酸序列，其中H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3分别经SEQIDNO:8、SEQIDNO:10及SEQIDNO:12置换。


9.一种重链，其包括具有如SEQIDNO:16所示序列的胺基酸序列，其中H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3分别经SEQIDNO:7、SEQIDNO:9及SEQIDNO:11置换。


10.一种经分离抗体，其包括具有如选自由SEQIDNO:13及14组成的群的序列所示胺基酸序列的轻链；及(ii)具有如选自由SEQIDNO:15及16组成的群的序列所示胺基酸序列的重链。


11.根据权利要求10所述的经分离抗体，其包括具有如SEQIDNO:13所示胺基酸序列的轻链及具有如SEQIDNO:15所示胺基酸序列的重链。


12.根据权利要求10所述的经分离抗体，其包括具有如SEQIDNO:14所示胺基酸序列的轻链及具有如SEQIDNO:16所示胺基酸序列的重链。


13.根据权利要求10所述的经分离抗体，其包括具有如SEQIDNO:13所示胺基酸序列的轻链及具有如SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雨青，潘秀玲，皇甫维君，黄翠琴，魏柏立，黄瀚立，郑淳淳，黄振侨，蔡耿彰，叶坤土，
申请(专利权)人：台北医学大学，彰化基督教医疗财团法人彰化基督教医院，蔡耿彰，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71