牛樟芝三萜在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了牛樟芝菌丝体三萜提取物在制备治疗神经退行性疾病尤其是帕金森病药物中的应用。本发明专利技术提供了牛樟芝菌丝体三萜提取物在细胞神经保护方面的功效，为挖掘牛樟芝三萜类提取物在治疗帕金森病方面的药理作用提供一定的参考价值，为研究开发天然新型帕金森病治疗药物提供了依据。

【技术实现步骤摘要】
牛樟芝三萜在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用(一)
本专利技术涉及牛樟芝菌丝体三萜提取物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。(二)
技术介绍
帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)是一种中老年常见的神经退行性疾病，是由于在中脑黑质致密部中的多巴胺(dopamine，DA)能神经元的进行性变性和缺失以及残存的DA能神经元出现α-突触核蛋白(α-synuclein，α-syn)的聚集化所导致的。目前关于PD发生的确切机制尚不明确，但过量活性氧(ROS)引起的氧化损伤、调控DA含量关键蛋白的异常表达和α-syn积聚导致的细胞凋亡被认为是关键机制之一。ROS是导致细胞氧化应激的重要因素，其在许多器官损害引起的细胞损伤中扮演着重要的角色，操控着细胞凋亡。DA是参与运动、认知、情感及内分泌调节的重要神经递质，由DA能神经元合成并储存在囊泡中，通过胞裂外排的方式由神经元释放。如果该递质含量发生改变，就会影响整个多巴胺能神经系统的功能，从而引发相应疾病。酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)是负责催化氨基酸L-酪氨酸转变为二羟基苯丙氨酸(多巴)的限速酶，它和多巴胺转运体(dopaminetransporter，DAT)是DA能神经系统通路中合成和转运DA的重要蛋白质，他们在维持突触间隙中DA含量平衡中发挥着主要作用。如果这些蛋白功能失调，则脑内DA水平就会失衡，从而引起帕金森等神经系统疾病。α-syn的结构在正常、错误折叠及其寡聚化之间维持一种动态平衡，当这种平衡被打破，α-syn原纤维迅速聚集成大分子，形成不可溶性纤维，进一步形成路易小体以避免神经元受到更大的损害，但是α-syn的病理性积聚、沉淀，最终会导致细胞凋亡或死亡。PD的临床表现主要有运动迟缓、静止性震颤、肌肉强直和步态不稳等。目前，临床上用于治疗PD的药物主要有左旋多巴、金刚烷胺、多巴胺受体激动剂和抗胆碱能药等。但这些药物不能减缓PD的发展进程，在治疗的同时又带来很多不良反应，限制了其临床应用。因此，寻找更为有效的治疗PD的药物或者活性成分具有非常重要的现实意义。近年来，从传统药食两用资源中寻求延缓PD发病进程的活性成分已成为研究的热点。牛樟芝(Antrodiacinnamomea，AC)，又名“牛樟菇”、“樟菇”、“樟芝”等，属于真菌界担子菌门(Basidiomycota)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、薄孔菌属(Antrodia)的多年生覃菌类，是一种独特而珍贵的台湾地道的药食两用真菌，素有“森林中的红宝石”之称。牛樟芝具有多种生理活性成分，包括三萜类、多糖类、腺苷、超氧化物歧化酶(SOD)等。而其中的三萜类物质是牛樟芝的主要有效成分之一。目前关于牛樟芝三萜类物质的研究多集中于提取制备方法和工艺的优化，其生理活性的研究较少。现有技术中，牛樟芝三萜类化合物提取制备方法较为成熟，且其具有抗肿瘤、预防酒精性肝损伤生理活性功能，鲜见其神经保护药理活性的报道。在先申请CN106692211B公开了一种牛樟芝菌丝体三萜类提取物的制备方法，该方法的优点是采用超声辅助提取结合溶剂萃取与大孔树脂纯化制备了纯度高达70％～90％的牛樟芝三萜提取物。但采用该方法得到的牛樟芝三萜提取物在神经保护方面的功效尚不清楚。(三)
技术实现思路
本专利技术的目的是提供牛樟芝菌丝体三萜提取物在制备神经退行性疾病药物中的应用。本专利技术采用的技术方案是：牛樟芝菌丝体三萜提取物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。优选的，所述神经退行性疾病为帕金森病。本专利技术提供了牛樟芝菌丝体三萜类提取物在细胞神经保护方面的功效及其作用机制，为挖掘牛樟芝三萜类提取物在治疗帕金森病方面的药理作用提供一定的参考价值，为研究开发天然新型帕金森病治疗药物提供了依据。具体的，所述牛樟芝菌丝体三萜提取物按如下方法制得：取牛樟芝菌丝体粉末，用60％～80％乙醇水溶液超声提取1～3次，合并提取液，浓缩、冷冻干燥，得到粗提物；粗提物分散于10～20倍质量的水中得到分散液，分散液加入等体积30～60℃石油醚脱脂，所得脱脂液加入乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层减压蒸除溶剂，得到浓缩物；浓缩物加入20％～30％乙醇水溶液中，调节pH2～5，大孔吸附树脂纯化，依次用去离子水、20％～40％乙醇水溶液、60％～90％乙醇水溶液洗脱，收集60％～90％乙醇洗脱液，减压蒸除溶剂，冷冻干燥，即得所述牛樟芝菌丝体三萜提取物，其三萜纯度为70～90％。本专利技术的有意效果主要体现在：本专利技术提供了牛樟芝菌丝体三萜提取物在细胞神经保护方面的功效，为挖掘牛樟芝三萜类提取物在治疗帕金森病方面的药理作用提供一定的参考价值，为研究开发天然新型帕金森病治疗药物提供了依据。(四)附图说明图1为牛樟芝三萜提取物对PC12细胞的神经保护作用机制示意图。(五)具体实施方式为了加深对本专利技术的理解，下面将结合具体实施例对本专利技术做进一步详细描述，该实施例仅用于解释本专利技术，并不对本专利技术的保护范围构成限定。实施例中所用原料和仪器如下：牛樟芝固体栽培菌丝体：由丽水瑞草药用真菌研究所提供；真空干燥箱：德国宾德BinderVD23；FS-1200型超声波细胞破碎器：上海生析仪器公司；离心机：TD5A-WS，配NO.4转子，湖南湘仪离心机仪器有限公司；旋转蒸发仪：R2002B，配循环水泵，上海申生科技有限公司AB-8大孔吸附树脂：安徽三星树脂科技有限公司。实施例1：牛樟芝菌丝体三萜提取物的获得(1)将牛樟芝固体栽培菌丝体(由丽水瑞草药用真菌研究所提供)于50℃真空干燥、粉碎过筛至80目，称取牛樟芝菌丝体粉末50g，以料液质量比1：30加入1500g80wt％乙醇水溶液中进行超声辅助提取，提取功率为100W，时间为40min，5000r/min离心，收集上清液，滤渣重复超声提取2次，合并各次所得上清液，在50℃、真空度0.05Mpa条件下旋转蒸发，浓缩至原体积1/5，之后冷冻干燥，得到牛樟芝三萜粗提物；(2)取步骤(1)所得牛樟芝三萜粗提物，超声分散于300mL纯净水中，得到分散液；然后加入与所得分散液等体积的60℃石油醚进行脱脂，重复脱脂3次，得到脱脂液；接着加入与所得脱脂液等体积的乙酸乙酯进行萃取，重复萃取3次，收集萃取液减压蒸除溶剂，得到浓缩物；(3)将步骤(2)所得浓缩物加入400mL30wt％乙醇水溶液中，原始pH为5.5，用0.1N盐酸水溶液调节pH至2.5，随后进行AB-8大孔吸附树脂柱纯化，玻璃层析柱：2.6×80cm，上样浓度20.4mg/mL，上样体积0.15倍柱体积，上样流速1.0mL/min，先分别用4倍柱体积的去离子和30wt％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的90wt％乙醇水溶液洗脱，收集90wt％乙醇洗脱液，减压蒸除溶剂，冷冻干燥，得产品牛樟芝菌丝体三萜类提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.牛樟芝菌丝体三萜提取物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.牛樟芝菌丝体三萜提取物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述神经退行性疾病为帕金森病。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述牛樟芝菌丝体三萜提取物按如下方法制得：取牛樟芝菌丝体粉末，用60％～80％乙醇水溶液超声提取1～3次，合并提取液，浓缩、冷冻干燥，得到粗提物；粗提物分散...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹仙果，杨开，蔡铭，能静，王龑，孙培龙，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33