免疫浊度测定法及测定装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供不需要稀释等操作，可扩大浓度测定范围的免疫浊度测定法。该方法观察浊度变化的过渡现象，测出浊度的极大值或极小值，然后从表示这些极大值或极小值的时间、浊度及极大值和／或极小值来判定被测液的浓度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及测定被测液中溶解的抗原、特别是尿中白蛋白浓度的免疫浊度测定法及其测定装置。
技术介绍
以往的抗原测定方法有在被测液所含的抗原中混合特异结合的抗体，通过抗原抗体反应使其生成抗原抗体复合物，致使上述被测液混浊，然后从其浊度求出抗原浓度的方法。此种方法的浊度可采用光照射上述被测液，然后通过测定溶液中产生的散射光或透过溶液的透射光来获得。但浊度变大的话，散射光强度也变大，而透射光强度却变小。如附图说明图17所示，这种测定方法中，与抗原的摩尔浓度相比，抗体的摩尔浓度在很大的范围内几乎是相等的，即可从抗体过剩区域A～B到当量区C进行测定。在图17的A～B区内，浊度随抗原浓度的增加而增加，而在C区内，浊度对应于抗原浓度的变化量小。同时，在抗原过剩区D，浊度随着抗原浓度的增加而降低(前区现象)。因此，要测定抗原浓度，须在图17的A～B区域内作检测线，根据检测线，从浊度测定值算出抗原浓度。如上所述，因为抗原浓度要从抗体过剩区A～B到当量区C进行测定，所以以往测定需要加大抗体浓度。这样有时低浓度区内的灵敏度就被牺牲了。另外，实际上为了确认抗原浓度不在抗原过剩区D区，即为了确认不是图17中的D区时，就要进行稀释被测液或者追加添加抗体的操作。被测液中的抗原浓度处在D区内时，从浊度测定值可计算出两个浓度值。为此有必要确认抗原浓度不处在D区内(如专利文献1及2)。专利文献1特开2004-045 384号公报专利文献2国际公开第02/052265号单行本
技术实现思路
本专利技术的目的就是要解决免疫浊度测定法中的上述问题，在不牺牲低浓度区的灵敏度的情况下，扩大被测液的可测浓度范围。同时提供不需要为确认抗原浓度不处在抗原过剩区，即不处在图17中的D区而进行的稀释被测液或追加添加抗体的操作的免疫浊度测定法。本专利技术所涉及的免疫浊度测定法，首先在含有待分析物抗原的被测液中混合含有可与上述待分析物产生特异结合反应的抗体的试剂，来获得混合液。这时因特异结合反应而生成抗原抗体复合物，由于此导致上述被测液的浊度提高。然后，对所得上述混合液的浊度进行离散地多次或连续测定，找出所得浊度测定值与混合后经过时间之间的关系。再根据上述关系测定出上述测定值的极大值或极小值Speak，求出显示上述Speak的经过时间Tpeak。通过上述步骤分析上述浊度的变化，并根据该变化确认上述被检测液中是否发生前区现象，根据前区现象的有无就能够决定上述待分析物的浓度。优选的是在上述步骤(2)用散射光测定上述浊度，在上述步骤(4)检测出极大值。另外，优选从上述Speak与上述Tpeak的关系判定上述待分析物浓度。优选从上述混合后经过时间T的时刻的上述光学特性的测定值S(T)与上述经过时间Tpeak间的关系来决定上述待分析物的浓度。但这种情况下优选满足T＞Tpeak。优选计算出上述混合后经过时间T的时刻的上述光学特性测定值S(T)的微分值dS(T)/dT，以上述微分值的极性反转时刻为上述Tpeak，以这一时刻的测定值S(T)为Speak，由此在测出Speak的同时，求出显示上述Speak的上述Tpeak。优选当上述Tpeak低于或等于规定值T0时，判定上述被测液中上述待分析物的浓度高于或等于规定值C0。优选上述待分析物是人血清白蛋白。优选上述抗体是单克隆抗体，上述试剂中含两种或两种以上上述单克隆抗体，上述两种或两种以上单克隆抗体分别与人血清白蛋白的不同部位产生特异结合反应。优选上述被测液是尿。本专利技术还涉及实施上述免疫浊度测定法的免疫浊度测定装置。本免疫浊度测定装置具备照射上述被测液的光源、盛装上述被测液并使上述光透过上述被测液的样品池、检测透过上述被测液的透射光的光学传感器1和/或检测上述光在上述被测液中传输时产生的散射光的光学传感器2、在上述样品池中混合上述被测液和含有上述抗体的试剂的混合器以及控制上述混合器、并解析上述光学传感器1和/或上述光学传感器2输出信号的计算机。依据上述被测液和上述试剂混合后，上述光学传感器1和/或上述光学传感器2的输出信号测定上述被测液中的抗原浓度。另外，本专利技术涉及的免疫浊度测定装置具备照射上述被测液的光源、盛装上述被测液并使上述光透过上述被测液的样品池、检测透过上述被测液的透射光的光学传感器1和/或检测上述光在被测液中传输时产生的散射光的光学传感器2、对上述光学传感器1和/或上述光学传感器2的输出信号进行微分的微分器1和/或微分器2、在上述样品池中混合上述被测液和含有上述抗体的试剂的混合器、控制上述混合器并解析上述光学传感器1、上述光学传感器2及上述微分器1和/或上述微分器的输出信号的计算机。依据上述被测液与上述试剂混合后的上述光学传感器1和/或上述光学传感器2的输出信号、或者上述微分器1和/或微分器2的输出信号测定上述被测液中的抗原浓度。专利技术的效果依据本专利技术，不用稀释等操作就可以扩大被测液中的抗原浓度可测范围，其实用性好，提高了测定和检查的效率并节省人力。附图的简单说明图1 适用本专利技术的免疫浊度测定装置一实施方案的俯视简图。图2 图1所示免疫浊度测定装置的侧视简图。图3 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图4 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图5 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图6 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图7 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图8 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图9 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图10 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图11 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图12 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图13 实施方案1中光学传感器5的输出信号的经时变化图。图14 经过300秒那一点时，以光学传感器5的输出信号为浊度，用纵轴表示，被测液浓度用横轴表示时的曲线。图15 以图5～13中各被测液的浓度为横轴，浊度的极大值(Speak)为纵轴时的曲线。图16 以显示极大值的经过时间(Tpeak)为横轴，以浊度的极大值(Speak)为纵轴时的曲线。图17 抗原浓度与浊度关系的曲线。图18 光学传感器5输出信号的经时变化的曲线。图19 光学传感器5输出信号的经时变化的曲线。图20 光学传感器5输出信号的经时变化的曲线。图21 光学传感器5输出信号的经时变化的曲线。图22 以经过300秒那一点时的光学传感器5的输出信号为浊度，用纵轴表示，被测液的浓度用横轴表示时的曲线。图23 适用本专利技术的免疫浊度测定装置的另一实施方案的俯视简图。图24 表示SC45(虚线)和SC90(实线)随时间变化的曲线。图25 表示Tpeak和浓度关系的曲线。符号说明1 样品池2 注入口3 半导体激光组件(レ一ザモジユ一ル)4 近似平行光(略平行光)5 光学传感器6 混合器7 计算机8 表示液体流束方向的箭头9 液面10 表示液体注入方向的箭头 11 散射光12 微分器实施专利技术的最佳方案首先说明萌发本专利技术的以往的免疫浊度测定方法。介绍采用图1和图2所示装置的免疫浊度测定方法的实施方法。图1为以本文档来自技高网...

【技术保护点】
免疫浊度测定法，其是将含有待分析物抗原的被测液与含有与所述待分析物能进行特异结合反应的抗体的试剂混合，通过检测由所述特异结合反应生成的抗原抗体复合物所产生的与浊度相关的信号，来对所述待分析物进行定性或定量测定的免疫浊度测定法，其特征在于包括：（１）将所述被测液和所述试剂混合获得混合液的步骤；（２）离散地多次或连续测定所获得的前述混合液浊度的步骤；（３）求解所得的浊度测定值与混合后所经过的时间的关系的步骤；以及（４）根据所述关系，检测出的所述测定值的极大值或极小值Ｓ↓［ｐｅａｋ］，求出显示所述Ｓ↓［ｐｅａｋ］的经过时间Ｔ↓［ｐｅａｋ］的步骤。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：河村达朗，汤川系子，龟井明仁，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]