用于免疫分析的微球组合物或组件及免疫分析方法技术

公开了一种用于化学发光免疫分析的微球组合物或组件，它包括各自包被有抗体的感光微球和发光微球，其特征在于所述感光微球的粒径小于发光微球的粒径。还公开了使用本发明专利技术组合物或组件进行免疫分析的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于化学发光免疫分析的微球组合物或微球组件，它具有改进的高发光效率。还涉及使用所述组合物或组件进行免疫分析的方法。
技术介绍
迄今为止，生物体内微量生物活性物质的免疫测定方法已经历了由放射免疫分析(RIA)、荧光免疫分析(FIA)、酶联免疫分析(EIA)，以及化学发光免疫分析等诸阶段。这一衍变过程主要是基于对检测方法的敏感性、准确性、以及操作简捷性需求的不断提高而决定的。正如放射免疫(RIA)分析技术当年从专利技术到应用的推陈出新所经过的历程一样，化学发光免疫定量检测法成为现今取代放射免疫分析的有力分析手段和技术。在国际领域内，化学发光免疫定量检测法已成为临床检验的一个非常重要的新技术和检测手段，并将延展至临床检验的各个领域，这也是临床检验界的一致共识。化学发光免疫分析法是一种利用化学发光物质发射的光波进行检测的方法。化学发光物质作为标记应用于核酸检测与免疫检测中。例如，可通过多种途径将特异结合对中的某一分子与发光物质结合形成发光复合物。该复合物可与样品中被检测物(特异结合对中的另一分子)反应，分配于固相与液相中，且分配比例与检测物的量相关。通过测定固相或液相中发光量，即可得出样品中检测物的相应浓度。具体地说，在均相条件下，将包被有活性分子并且内部带有染料的感光微球(纳米级)以及包被有活性分子并且内部带有发光化合物的发光微球(纳米级)的混合物作为试剂和有可能含有目标分子的检测样品混合。此时包被有活性分子的纳米感光微球和包被有活性分子的纳米发光微球可迅速有效地捕捉目标分子，纳米感光微球、纳米发光微球和目标分子一起形成近距离的夹心复合物。经激发光照射，纳米感光微球中的染料被诱导激活并释放高能态的活性氧离子(单线态氧)。该高能态的活性氧离子被近距离的纳米发光微球俘获，从而传递能量以激活所述发光微球中的发光化合物。发光微球中的发光化合物可于数微秒后在零背景无干扰的情况下释放出高能级红光。用光子计数器测定这些高能级光子并通过电脑将光子数量换算为目标分子浓度，光子数量的多少即精确地反映了目标分子的浓度。因此，感光微球和发光微球的发光效率决定了化学发光免疫分析法的检测灵敏度。为了提高感光微球和/或发光微球的发光效率，本领域一般采用提高感光微球中染料的感光效率和/或发光微球中发光化合物的接受光的效率和发光效率的方法。例如，美国专利5,709,994公开了一种测定目标分子的方法，它包括对可能含有目标分子的组合物进行光辐照的步骤，所述组合物包括非颗粒基质或颗粒基质，所述基质包被有经光辐照会产生单线态氧的光敏剂和可被所述单线态氧活化的化学发光化合物。它还具体公开了所述化学发光化合物选自9-亚烷基-N-甲基吖啶、烯醇醚和烯胺，所述光敏剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟啉、酞菁和叶绿素。美国专利5,780,646公开了一种发光组合物，它包括(a)一种至少六配位的金属鳌合物和(b)一种具有两个芳基的带双键的化合物。虽然采用本领域所述方法可极大地提高化学发光免疫分析法的检测灵敏度，但是仍需要开发一种能在现有技术基础上进一步提高发光效率的方法。专利技术的内容本专利技术的目的是提供一种用于化学发光免疫分析的微球组合物，它具有高的检测灵敏度。本专利技术的另一个目的是提供一种用于化学发光免疫分析的微球组件，它具有高的检测灵敏度。本专利技术的再一个目的是提供一种化学发光免疫分析法，它具有高的检测灵敏度。本专利技术人经过大量研究发现，使感光微球的粒径小于发光微球的粒径可有效地提高化学发光的发光效率。本专利技术就是在该发现的基础上完成的。因此，本专利技术提供一种用于化学发光免疫分析的微球组合物，它包括各自包被有抗体的感光微球和发光微球，其特征在于所述感光微球的粒径小于发光微球的粒径。本专利技术还提供一种用于化学发光免疫分析的微球组件，它包括包被有抗体的感光微球包装和包被有抗体的发光微球包装，其特征在于所述感光微球的粒径小于发光微球的粒径。本专利技术还提供一种化学发光免疫分析方法，它包括向被分析试样中依次加入上述微球组件中的感光微球和发光微球，或者加入本专利技术微球组合物。附图说明图1是光激化学发光免疫分析系统(LICA)检测原理图，其中图1a是包被第一抗体并含有光敏试剂的光敏微球的示意图；图1b是加入检测试样后被检测抗原与第一抗体结合的示意图；图1c是加入包被有第二抗体并含有发光组合物的微球的示意图；图1d是光致发光的示意图。具体实施例方式在本专利技术中，术语“粒径”是指微球的平均直径。它是用常规粒径仪测定的。图1是本专利技术光激化学发光免疫分析系统(LICA)检测原理图。如图1a所示，纳米级的感光微球10中带有光敏剂，该微球表面包被有第一抗体1。如图1b所示，当将包被有第一抗体1并含有光敏剂的纳米微球加入含被检测抗原2的试样中以后，第一抗体1会与抗原2相结合。如图1c所示，发光微球20是含有发光组合物的纳米微球，它表面包被有第二抗体3。当将所述发光微球20加入上述试样中以后，该发光微球上包被的第二抗体3也会与已经与第一抗体1结合的抗原2相结合，形成夹合体。如图1d所示，当用激光辐照光敏微球以后，感光微球中的光敏剂会放出单线态氧，该单线态氧被发光微球中的发光组合物俘获后，会激发发光组合物中的发光化合物，发出特定波长的光线。通过检测该波长的光线就可测定抗原的量。下面结合附图更详细地说明本专利技术。一.微球基质用作本专利技术感光微球10和发光微球20的纳米级微球基质是本领域已知的微球基质。用作感光微球的基质和用作发光微球的基质(下面统称为微球基质)无特别的限制，它们可相同或不相同，只要感光微球的粒径小于发光微球的粒径即可。例如，所述微球基质可以是羧基改性的乳胶颗粒、醛基改性的乳胶颗粒或者环氧基或羟基改性的乳胶颗粒。这种颗粒的详细情况可参见美国专利5,780,646和5,709,994(该文献在此全文引为参考)。所述微球基质可从市场上购得，例如购自上海朋远泰生物技术有限公司的WQ系列微球产品或者购自美国Bangs Laboratories，Inc。本专利技术微球基质也可通过单体聚合的方法得到。常用的方法有乳液聚合或微乳液聚合。在本专利技术的一个较好实例中，所述微球基质是由具有通式(I)的乙烯基芳香单体 与具体通式(II)的丙烯酸酯单体 通过乳液聚合制得。上述通式中，R1是选自下式的芳基，其中X是H，1-5个碳原子的直链或支链烷基，所述烷基可被氯原子所取代 或者 R2是具有1-6个碳原子的直链或支链烷基取代基，或者具有如下结构的取代基 或者 Y是H或者甲基，所述乳液聚合的聚合条件是本领域众所周知的。例如，在所述乳液聚合中使用的表面活性剂可以是离子型表面活性剂或非离子型表面活性剂或其混合物，常见的有十二烷基磺酸钠(SDS)，吐温-20以及Triton X-100等。二.感光微球如上所述，用作本专利技术感光微球10的纳米级微球基质是本领域已知的微球基质。其粒径应小于发光微球的粒径。在本专利技术的一个较好实例中，所述感光微球的粒径为20-400nm，较好为40-250nm，更好为80-120nm。用于感光微球中的光敏剂无特别的限制，它可以是本领域已知的光敏剂，其非限定性例子有例如美国专利5,709,994公开的亚甲基蓝、玫瑰红、卟啉、酞菁和叶绿素。在感光微球中光敏剂的载带量无特别的限制，它可以是本领域常用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于化学发光免疫分析的微球组合物，它包括各自包被有抗体的感光微球和发光微球，其特征在于所述感光微球的粒径小于发光微球的粒径。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何元，
申请(专利权)人：博阳生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]