一种快速测定吊白块的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速测定吊白块的方法，包括如下步骤：（１）在容器中加入纯化的乙酰胆碱酯酶，（２）加入样品液，对照用的加入等量蒸馏水，（３）加酶的底物乙酸萘酯，（４）加水溶性苯胺蓝进行显色，（５）判断结果；该方法利用吊白块分子对鸡或鸭血清中纯化的乙酰胆碱酯酶的抑制作用，使乙酰胆碱酯酶的底物乙酸萘酯不能分解，从而加入水溶性苯胺蓝后显示的颜色深浅不一致，达到判断样品是否含有吊白块的目的；这是一种成本低，操作简便快速，能适于现场特异测定食品中是否含有吊白块的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种吊白块的快速测定方法。
技术介绍
吊白块的化学名称为甲醛次硫酸氢钠，分子式为NaHSO2·CH2O.2H2O，白色结晶，易溶于水，遇酸即分解为甲醛和二氧化硫，具有强烈的还原性、漂白性和防腐力。许多不法商贩正是看中了吊白块中甲醛的防腐作用和亚硫酸氢钠的漂白作用而大量使用，以达到防腐增白，改善劣质米面制品感官的目的。例如冰糖生产过程中加入吊白块可以缩减生产工艺；加入蜜枣，可以改变外观和延长保存时间；加入米粉，可以改善其口感和保鲜时间；在腐竹制作过程中加入，增加韧性等。据资料报道，在米粉中曾检出过318mg/kg吊白块；对馒头、面饼等面制品的检测，也发现吊白块高达561mg/kg。然而，在食品中掺吊白块，不但破坏食品的营养成份，而且食用后可导致消化道粘膜发炎、呕吐、腹泻，急性中毒可导致休克致死，对人的肾脏和神经系统也有较大损伤，甚至具有致癌作用，吊白块的LD50大鼠为2g/kg，人体摄入10g即可致死亡，因此，在食品中严禁加入吊白块。目前测定吊白块的方法有变色酸法、乙酰丙酮法、盐酸苯肼比色法、酚试剂法、示波极谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等，但这些方法不能满足用于现场简单快速测定的需要。为此，国内有利用上述化学分析吊白块的检测原理设计的快速检测吊白块的专利方法，如“一种一次性速测包(ZL 02240397.3)”，“多功能现场比色测定仪(ZL 02234891.3)”，但这2个专利不是特异设计测定吊白块的，因此，对吊白块测定的特异性不强。我们经多年试验研究，利用吊白块分子中的甲醛能与蛋白质的-NH2，-SH，-OH，-COOH等基团作用，生成次甲基衍生物，破坏酶的活性，酶的底物不能水解，加入显色剂后出现颜色深浅的变化，从而建立一种快速、特异和简便的吊白块测定方法。
技术实现思路
本专利技术以鸡或鸭血清中的乙酰胆碱酯酶为原料，通过吊白块分子对酯酶的抑制作用，使酯酶的底物乙酸萘酯不能分解，从而加入水溶性苯胺蓝后的颜色变浅。最后通过颜色的深浅达到判断样品中是否含有吊白块的目的。本方法所需成本低，操作简便，能适于现场对食品中的吊白块快速测定。本专利技术是如下实现的本专利技术所述的包括如下步骤(1)在容器中加入纯化的乙酰胆碱酯酶；(2)加入样品液，对照用的加入等量蒸馏水；(3)加酶的底物乙酸萘酯；(4)加水溶性苯胺蓝进行显色；(5)判断结果。上述步骤(1)中加入的乙酰胆碱酯酶的浓度为0.25mg/mL，加入量为30～40μL。上述步骤(2)样品液的加入量为300～400μL，对照用的加入等量蒸馏水300～400μL。上述步骤(3)酶的底物为无水酒精配置的4.5mg/mL乙酸萘酯，加入量为40～45μL。上述步骤(4)水溶性苯胺蓝的浓度为0.001g/mL，加入量为50～60μL。乙酰胆碱酯酶的纯化方法为鸡或鸭的新鲜血液室温下凝固后，于0～4℃下放置过夜，取其上清液，所得上清液在16000r.p.m，0～4℃下离心5min，其上清液即为乙酰胆碱酯酶粗酶。然后将装有乙酰胆碱酯酶粗酶的三角瓶放入冰水中，往粗酶液中缓慢搅拌加入硫酸铵，使酶液中硫酸铵的饱和度在50％～60％的范围内；所得溶液于16000r.p.m，0～4℃下离心10min，保留沉淀；沉淀再用蒸馏水溶解，并装入分子量1万的透析袋，于4℃冰箱内透析48小时，其间换液8次，然后将透析后所得的酶液冷冻干燥即为纯化的乙酰胆碱酯酶。检测样品时，取2只离心管，在其中分别加入浓度为0.25mg/mL的乙酰胆碱酯酶，加入量为30～40μL，然后在其中1只离心管加入300～400μL蒸馏水用作对照，另1只离心管中加入等量可能含吊白块的样品浸泡液300～400μL，轻轻摇动并反应10min后，加入40～45μL无水酒精配置的乙酸萘酯，再轻轻摇动并反应5min后，加入0.001g/mL蒸馏水配置的苯胺蓝50～60μL进行显色。结果发现对照为深蓝色，样品中吊白块浓度越高，最后的蓝颜色越浅，1000μg/mL的吊白块样品测定结果显示的颜色近视黄色，而100μg/mL和10μg/mL标准吊白块含量的样品测定结果显示的颜色比对照的蓝色明显浅，表明用此方法检测吊白块的最低浓度为10μg/mL。具体实施例方式实例1从市场采集腐竹样品5个，每个样品取10g用10mL蒸馏水浸泡30分钟待测。取6只离心管，在其中分别加入30μL 0.25mg/mL的乙酰胆碱酯酶液，然后在编号为第1号的离心管加入300μL蒸馏水作为对照，另5只离心管分别加入上述可能含吊百块的5个样品浸泡液各300μL，轻轻摇动并反应10min后，6只离心管中分别加入40μL乙酸萘酯，轻轻摇动并反应5min后，6只离心管中分别加入55μL水溶性苯胺蓝进行显色。结果发现编号为腐竹1、腐竹2和腐竹5的样品的吊白块呈阳性，而编号为腐竹3和腐竹4的样品的吊白块含量呈阴性，将同样处理的上述样品浸泡液用乙酰丙酮法测定吊白块含量(参照方法乙酰丙酮法测定米粉中吊白块含量，中国公共卫生，2002，8986)，测定结果为腐竹1吊白块含量为18.6mg/kg，腐竹2吊白块含量为96.6mg/kg，腐竹5吊白块含量为39.8mg/kg，而腐竹3和腐竹4样品的吊白块含量分别为8.3mg/kg和6.5mg/kg，均＜10.0mg/kg，与本专利测定的结果完全相符合。实例2从市场采集米粉样品5个，每个样品取10g用10mL蒸馏水浸泡30分钟待测。取6只离心管，在其中分别加入35μL 0.25mg/mL的乙酰胆碱酯酶液，然后在编号为第1号的离心管加入400μL蒸馏水作为对照，另5只离心管分别加入上述可能含吊百块的5个样品浸泡液各400μL，轻轻摇动并反应10min后，6只离心管中分别加入45μL乙酸萘酯，轻轻摇动并反应5min后，6只离心管中分别加入60μL水溶性苯胺蓝进行显色。结果发现编号为米粉1、米粉3和米粉5的样品的吊白块呈阳性，而编号为米粉2和米粉4的样品的吊白块含量呈阴性，将同样处理的上述样品浸泡液用乙酰丙酮法测定吊白块含量(参照方法乙酰丙酮法测米粉中吊白块含量，中国公共卫生，2002，8986)，测定结果为米粉1吊白块含量为157.0mg/kg，米粉3吊白块含量为13.8mg/kg，米粉5吊白块含量为165.0mg/kg，而米粉2和米粉4样品的吊白块含量7.8mg/kg和5.7mg/kg，均＜10.0mg/kg，与本专利测定的结果完全相符合。以上实施例中从市场采集腐竹和米粉共10个样品，分别用本专利技术的方法和乙酰丙酮法测定是否含吊白块。腐竹和米粉各10g用10mL蒸馏水浸泡30分钟，取浸泡液用本专利技术的方法和乙酰丙酮法同时测定，测定的结果见下表。 具体的测定结果表明用本专利技术的方法与卫生部推荐的乙酰丙酮法测定的10个样品是否含有吊白块的结果的符合率达100％。权利要求1.，其特征在于如下步骤(1)在容器中加入纯化的乙酰胆碱酯酶；(2)加入样品液，对照用的加入等量蒸馏水；(3)加酶的底物乙酸萘酯；(4)加水溶性苯胺蓝进行显色；(5)判断结果。2.根据权利要求1所述的快速测定吊白块的方法，其特征在于上述步骤(1)中加入的乙酰胆碱酯酶的浓度为0.25mg/mL，加入量为30～40μL。3.根据权利要求1所述的快速测定吊白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速测定吊白块的方法，其特征在于如下步骤：（１）在容器中加入纯化的乙酰胆碱酯酶；（２）加入样品液，对照用的加入等量蒸馏水；（３）加酶的底物乙酸萘酯；（４）加水溶性苯胺蓝进行显色；（５）判断结果。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵肃清，蔡燕飞，张焜，方岩雄，黄玉婷，金择焕，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]