胚泡着床相关因子及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种胚泡着床相关因子ＥＭＯ－２。ＥＭＯ－２因子具有促进胚泡着床的功能，而ＥＭＯ－２的反义核酸及其多肽抗体可抑制胚泡着床。本发明专利技术还公开了利用这种ＥＭＯ－２因子筛选促进或抑制胚泡着床的化合物的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和医学领域，具体地说，本专利技术涉及胚泡着床相关因子EMO-2在促进胚泡着床等方面的用途。
技术介绍
胚胎着床是哺乳动物生殖过程中所特有的一个重要步骤。因着床过程完成后才算真正怀孕，所以针对胚胎着床过程进行生育调控，不存在伦理问题，是一个理想的生育调控药具作用环节。此外，随着卵母细胞的体外培养和成熟、体外受精、受精卵的体外培养和发育等技术不断提高，移植后胚胎能否顺利着床，目前已成为影响人工辅助生育技术(ART/IVF)成功率的关键。胚胎相对于母体来说，是一个半异体组织，易受母体排斥，只能在一个特定的时间段内(即″着床窗″)才能被母体子宫内膜组织接纳。胚胎着床过程的完成有赖于母体子宫与胚胎的同步发育、母体子宫内膜容受性和″着床窗″的形成、以及母体子宫组织局部免疫耐受性的形成，涉及细胞的增殖和分化、局部免疫功能的调节。雌、孕激素在着床中的作用已很明确，现有的笛体类避孕药就是基于它们在生殖过程中的作用发展起来的。但是，由于雌、孕激素是内分泌激素，其作用是全身性的，因此还不是最理想的生育调控因子。近年来，在胚胎着床期间子宫组织局部发挥作用的非激素类因子越来越得到人们的重视，已成为生殖生物学研究领域的一个热点。由于种种原因，人们对与胚泡着床有关的因子还知之甚少，因此本领域迫切需要开发新的胚泡着床相关因子。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的胚泡着床相关EMO-2因子及其用途。在本专利技术的第一方面，提供了EMO-2基因(及其编码蛋白)的用途，它被用作促进胚泡着床的促进剂。本专利技术还提供了EMO-2基因(及其编码蛋白)的另一用途，它被用于制备促进胚泡着床的药物。在本专利技术的第二方面，提供了EMO-2拮抗剂的用途，它被用作体外抑制胚泡着床的抑制剂。本专利技术还提供了EMO-2拮抗剂的另一用途，它被用于制备抑制胚泡着床的药物。在另一优选例中，所述的药物为避孕药。在另一优选例中，所述的拮抗剂是EMO-2的反义核酸或抗EMO-2多肽的抗体。在本专利技术的第三方面，提供了EMO-2激动剂的用途，它被用作体外促进胚泡着床的促进剂。本专利技术还提供了一种EMO-2激动剂的另一用途，它被用于制备促进胚泡着床的药物。在本专利技术的第四方面，提供了一种确定测试化合物是否是EMO-2的拮抗剂或激动剂的方法，它包括步骤(a)将测试化合物和EMO-2多肽加入体外培养的胚泡作为测试组，并将EMO-2多肽加入体外培养的胚泡作为对照组；(b)观察测试组和对照组胚泡着床情况，如果测试组的胚泡着床数量大于对照组，则表示测试化合物是EMO-2的激动剂；如果测试组的胚泡着床数量小于对照组，则表示测试化合物是EMO-2的拮抗剂。在本专利技术的第五方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量(如0.001-99.9wt％)的EMO-2多肽、其激动剂或其拮抗剂以及药学上可接受的载体。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本专利技术范围。图1显示了小鼠EMO-2多肽的全长氨基酸序列。图2A和2B显示了EMO-2的反义核酸在体外可有效抑制胚泡发育。具体实施例方式本专利技术人通过深入研究发现，EMO-2基因在着床后小鼠胚胎中的表达水平明显高于着床前。研究表明，反义核酸可通过阻断EMO-2 mRNA的翻译过程，在体外可以有效地抑制胚泡从透明带中孵化出来，在体内则能明显地降低正常着床的胚胎数。这说明EMO-2基因在胚胎着床过程中起着重要的促进作用。在本专利技术中，术语“EMO-2蛋白”、“EMO-2多肽”、“EMO-2因子”或“胚泡着床相关蛋白EMO-2”等可互换使用，都指具有胚泡着床相关因子EMO-2氨基酸序列(SEQ ID NO2)的蛋白或多肽。它们可含有或不含起始的甲硫氨酸。此外，这些术语还包括在其他哺乳动物(如人、狗、牛、羊、猴)中的具有促进胚泡着床功能的同系物或同源蛋白。小鼠的Emo-2的cDNA基因登录号是556728，AY372183，全长5700bp(SEQ IDNO1)，ORF位于78-1439位，编码一个全长为454个氨基酸的蛋白(SEQ ID NO2和图1)。应理解，由于鼠等哺乳动物的EMO-2蛋白的核酸序列和氨基酸序列都是已知的，可以用本领域常规的DNA重组技术而获得其蛋白。一类特别优选的蛋白是EMO-2类似物，即在其他哺乳动物(如牛、羊、兔、狗、猴、人等)中EMO-2的同源蛋白。这些其他物种的同源蛋白的编码序列，可根据EMO-2的序列，通过杂交或扩增的方法而获得，进而通过常规重组方法获得这些同源蛋白。如本文所用，“分离的EMO-2蛋白或多肽”是指EMO-2多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化EMO-2多肽。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括EMO-2多肽的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的天然EMO-2因子相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与抗原IgG片段的形成的融合蛋白)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。在本专利技术中，术语“EMO-2多肽”指具有促进胚泡着床等EMO-2因子活性的SEQ ID NO2序列的多肽。该术语还包括具有与EMO-2因子相同功能的、SEQ ID NO2序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或多个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括EMO-2因子的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式包括同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与EMO-2DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗EMO-2多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本专利技术还提供了其他多肽，如包含EMO-2多肽或其片段的融合蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＥＭＯ－２基因的用途，其特征在于，它被用作促进胚泡着床的促进剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘承权，袁瑶，王健，王忠兴，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]