一种大熊猫源植物乳酸杆菌及应用制造技术

本申请公开了一种大熊猫源植物乳酸杆菌及应用，该菌株于2016年05月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2016245。本发明专利技术提供的大熊猫源植物乳酸杆菌可提高血清IgA、IgM、IgG免疫球蛋白抗体水平，抑制产肠毒素大肠杆菌感染诱导的淋巴细胞百分比降低、中性粒细胞百分比升高；显著下调炎症相关因子IL‑1β、IL‑8、IL‑6、TLR4和MyD88mRNA表达水平，缓解产肠毒素大肠杆菌引起的肠道急性炎症反应。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于生物
，具体地说，涉及一种大熊猫源植物乳酸杆菌及应用。
技术介绍
在过去的几十年里，人们致力于大熊猫营养和繁殖技术的改进，忽略了传染性胃肠道疾病的预防和控制。产肠毒素大肠杆菌(EnterotoxigenicEscherichiacoli，ETEC)是圈养大熊猫胃肠道疾病常见病原菌之一，该菌引起的旅行者、畜禽和发展中国家婴儿分泌性细菌腹泻具有较高的发病率和死亡率。目前，ETEC感染及其相关性腹泻的控制在很大程度上依赖于抗生素，然而耐药菌株和多重耐药性的出现，对公共卫生具有潜在的威胁。寻求经济上切实可行的抗生素类替代品如有机酸、益生菌或益生元用于控制胃肠道感染性疾病是当前的研究热点。益生菌是活的微生物(通常是细菌或酵母)，当摄入足够量时对宿主健康发挥有益作用。乳酸菌是应用最为广泛的益生菌种之一，因其悠久的发酵起始物地位及其发酵制品的广泛消费而通常被认为是安全的。自1908年梅契尼柯夫(ElieMetchnikoff)提出，发酵酸奶有助于维持肠道菌群稳态，抑制腐败的假设以来。越来越多的研究表明，益生乳酸菌可以通过减少病原菌定植，改善肠道屏障功能，维持肠道共生微生物菌群平衡，增强机体免疫力等作用机制抵御部分胃肠道致病菌感染，包括沙门氏菌、产气荚膜梭菌、李斯特杆菌和致泻性大肠杆菌。然而，益生菌粘附具有宿主物种特异性，使用异源益生菌可能仅仅发挥短暂免疫保护作用。大熊猫作为中国特有的濒危珍稀物种，专用益生菌的开发局限于体外菌种生物特性研究。
技术实现思路
有鉴于此，本申请针对上述的问题，提供了一种大熊猫源植物乳酸杆菌及应用。为了解决上述技术问题，本申请公开了一种大熊猫源植物乳酸杆菌，该菌种为大熊猫源植物乳酸杆菌BSGP201683，Lactobacillusplantarum，该菌株于2016年05月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2016245。本申请还公开了上述的大熊猫源植物乳酸杆菌在大熊猫传染性胃肠道疾病的预防和控制中的应用。进一步地，传染性胃肠道疾病为肠道急性炎症。本申请还公开了上述的大熊猫源植物乳酸杆菌在制备缓解肠道急性炎症药物中的应用。进一步地，肠道急性炎症是由产肠毒素大肠杆菌引起的。进一步地，大熊猫源植物乳酸杆菌能够耐受pH2.03小时、2％猪胆盐4小时。进一步地，大熊猫源植物乳酸杆菌通过提高血清IgA、IgM、IgG免疫球蛋白抗体水平，抑制产肠毒素大肠杆菌感染诱导的淋巴细胞百分比降低、中性粒细胞百分比升高；显著下调炎症相关因子IL-1β、IL-8、IL-6、TLR4和MyD88mRNA表达水平，进一步缓解产肠毒素大肠杆菌引起的肠道急性炎症反应。与现有技术相比，本申请可以获得包括以下技术效果：1)本专利技术提供1株从健康大熊猫粪样中分离得到植物乳酸杆菌，保藏编号：CCTCCNo.2016245。2)本专利技术提供的大熊猫源植物乳酸杆菌BSGP201683可耐受pH2.03小时、2％猪胆盐4小时，对病原菌产肠毒素大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌直径分别达22.48mm、20.10mm和17.90mm。3)本专利技术提供的大熊猫源植物乳酸杆菌可改善肠道紧密连接相关蛋白表达，保护产肠毒素大肠杆菌感染诱导的肠道损伤。4)本专利技术提供的大熊猫源植物乳酸杆菌可提高血清IgA、IgM、IgG免疫球蛋白抗体水平，抑制产肠毒素大肠杆菌感染诱导的淋巴细胞百分比降低、中性粒细胞百分比升高；显著下调炎症相关因子IL-1β、IL-8、IL-6、TLR4和MyD88mRNA表达水平，缓解产肠毒素大肠杆菌引起的肠道急性炎症反应。5)本专利技术提供的大熊猫源植物乳酸杆菌可增加结肠乳酸杆菌、双歧杆菌数量，降低拟杆菌、肠杆菌丰度，且显著降低产肠毒素大肠杆菌感染模型结肠肠杆菌和不耐热肠毒素基因含量。当然，实施本申请的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：图1是本申请不同剂量植物乳酸杆菌对小鼠感染前后体重的影响；图2是本申请不同剂量植物乳酸杆菌对小鼠感染前后血液白细胞总数及分类的影响；图3是本申请不同剂量植物乳酸杆菌对小鼠感染前后血清DAO活性和D-乳酸含量的影响；图4是本申请不同剂量植物乳酸杆菌对小鼠感染前后血清IgA、IgM、IgG含量的影响；图5是本申请不同剂量乳酸杆菌对小鼠感染前后空肠紧密连接相关蛋白mRNA表达水平的影响；图6是本申请不同剂量植物乳酸杆菌对小鼠感染前后空肠细胞因子和Toll样受体mRNA表达水平的影响；图7是本申请不同剂量植物乳酸杆菌对小鼠感染前后结肠菌群组成的影响；图8是本申请ETEC感染24h各试验组小鼠结肠不耐热肠毒素基因含量。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本申请的实施方式，藉此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。实施例1菌的分离与鉴定一、菌的分离称取新鲜大熊猫粪球内部粪样10g，加入装有90mL无菌生理盐水三角瓶(带玻璃珠)，振荡混匀20min，10倍系列稀释至10-3样液。取100μL10-3稀释度样液均匀涂布MRS平板，置于37℃恒温培养箱厌氧培养24～48h后，接种环挑取疑似乳酸菌单个菌落在MRS平板上反复划线纯化，直至镜检无杂菌。二、鉴定(一)按照“伯杰细菌鉴定手册”(第八版)和《乳酸细菌分离鉴定及实验方法》(凌代文，东秀珠等编著，北京：中国轻工业出版社，1999.3)中描述的方法，对菌株BSGP201683进行形态特征、培养特性和生理生化特性鉴定，具体结果如下：菌体的形态和生理生化特性：在MRS培养基，37℃培养2天，菌体杆状，直径约为0.9-1.2μm×3.0-8.0μm；菌落奶白色，圆形，凸起，边缘整齐。生理生化特征：过氧化氢酶：-；明胶水解：-；硝酸盐还原：-；七叶灵水解：+；Tween80水解：-；吲哚实验：-；脲酶：-；H2S生成：-；VP实验：-；厌氧生长：+；6.5％NaCl：+；15℃：+；45℃：+；pH4.5：+；果糖：+；葡萄糖：+；乳糖：+；纤维二糖：+；七叶苷：+；麦芽糖：+；甘露醇：+；葡萄糖酸盐：+；蔗糖：-；山梨醇：-；阿拉伯糖：-；木糖：-。(二)16SrDNA试验提取BSGP201683的总DNA，以其为模板，利用细菌16SrDNA通用引物(27F，1492R)进行PCR扩增，得到长度约为1.5kb的扩增产物，将扩增产物回收并进行测序，测得的序列如SEQIDNo.1所示。根据Gen-Bank序列同源性比较，菌株BSGP201683与LactobacillusplantarumKLAB10(GenBank登录号KM497503.1)同源性为99％，判定该菌为植物乳酸杆菌(Lactobacillusplantarum)。基于以上特征，将菌株BSGP201683鉴定为Lactobacillusplantarum。该菌株已于2016年5月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCCNO：M2016245，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学保藏中心，邮编430072)，保藏号为CCTC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大熊猫源植物乳酸杆菌，其特征在于，该菌株于2016年05月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2016245。

【技术特征摘要】
1.一种大熊猫源植物乳酸杆菌，其特征在于，该菌株于2016年05月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2016245。2.权利要求1所述的大熊猫源植物乳酸杆菌在大熊猫传染性胃肠道疾病的预防和控制中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述传染性胃肠道疾病为肠道急性炎症。4.权利要求1所述的大熊猫源植物乳酸杆菌在制备缓解肠道急性炎症药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肠道急性炎症是由产肠毒素...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾东，王强，彭芝榕，倪学勤，牛李丽，潘康成，景波，刘倩，赖婧，周毅，
申请(专利权)人：四川农业大学，成都动物园，
类型：发明
国别省市：四川;51