用于诊断视网膜血管病的包含醛缩酶的组合物以及应用它诊断的方法技术

公开了一种用于诊断视网膜血管病的包含醛缩酶蛋白质的组合物。此外，本发明专利技术还公开了一种用于诊断视网膜血管病的包含所述蛋白质的试剂盒，以及一种诊断视网膜血管病的方法，它包括，将血样与醛缩酶蛋白质接触，并且定量分析形成的抗原－抗体复合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于诊断视网膜血管病的包含醛缩酶蛋白质的组合物，包含所述蛋白质的试剂盒，以及诊断视网膜血管病的方法，该方法包括，将血样与醛缩酶蛋白质接触，并且定量分析形成的抗原-抗体复合物。
技术介绍
糖尿病是一种在微血管系统中引起损伤的复杂的代谢病。该疾病造成全身组织宽范围的障碍，而且是尤其影响眼睛的最重要的系统病(TH Lee和YG Choi，Diabetic Vascular Complications(糖尿病性血管并发症)，1993，Korea Medical Book Publisher，Seoul，Korea)。其中，糖尿病性视网膜病是最严重的并发症之一，而且正随着因生活标准的改善和医疗技术的进步导致的预期寿命的延长而变成日益重要的社会问题(Klein R.等，Arch Ophthalmol.，102，520-532，1984)。有两类糖尿病性视网膜病非增生的糖尿病性视网膜病(NPDR)，其中，视网膜中由血管病引起的损伤都在视网膜内；以及增生的糖尿病性视网膜病(PDR)，其中，视网膜上生长的新血管渗透玻璃体(Green，见Spencer WH，ed.，Ophthalmic Pathologyanatlas and textbook.4thed.，PhiladelphiaWB Saunder；1124-1129，1996)。糖尿病性视网膜病视力缺损是由玻璃体出血和黄斑区中的牵引性视网膜脱离以及黄斑变性引起的，已知手术和激光治疗是有效的(Diabetic RetinopathyStudy Report Number 14，Int Ophthalmol Clin.，27，239-253，1987)。当在适当时期进行该处理时，能以最小的副作用预防视力丧失。因此，重要的是频繁地进行糖尿病性视网膜病的诊断以便确定外科手术的适当时间。糖尿病性视网膜病是通过眼底摄影术检查眼底的特征性结构变化而诊断的，这通常是在眼科医院进行的。对于患有糖尿病而没有意识到视觉异常或者没有接受定期眼科检查的患者诊断早期糖尿病性视网膜病是困难的。所以，当病况进展过度而不能预防时，糖尿病患者通常接受手术治疗。这样，需要寻找一种在其早期准确地诊断糖尿病性视网膜病的方法，但还没有报导过合适的方法。基于该背景，本专利技术人发现了，在糖尿病性视网膜病患者中由于视网膜蛋白质暴露于免疫系统中而形成了自身抗体，但在正常情况下由于眼血管中存在血眼屏障，视网膜蛋白质没有暴露于免疫系统中。本专利技术人筛选了产生自身抗体的视网膜蛋白质，发现了可通过检测患者中醛缩酶蛋白质的自身抗体以高可靠性诊断视网膜血管病。专利技术公开因此，本专利技术一个目的是提供一种诊断视网膜血管病的组合物，它包含醛缩酶蛋白质。本专利技术另一个目的是提供一种用于视网膜血管病的诊断盒，它包含醛缩酶蛋白质。本专利技术的进一步目的是提供一种诊断视网膜血管病的方法，它包括，将生物样品与醛缩酶蛋白质接触，并且检测形成的抗原-自身抗体复合物。附图简述结合到本说明书中并且占本说明书一部分的附图阐述了本专利技术优选的实施方案，而且可与下列优选实施方案的详细描述一起描述了本专利技术的原理。附图说明图1示出了应用人视网膜蛋白质的细胞溶胶部分和膜部分通过蛋白质印迹分析，筛选从正常受试验者、糖尿病患者、患有非增生的糖尿病性视网膜病的患者和患有增生的糖尿病性视网膜病的患者中获得的血清样品的结果。图2示出了人视网膜蛋白质的二维(2-D)电泳结果。图3a示出了已被分割成四片的图2的2-D电泳凝胶的蛋白质印迹法的结果，应用健康男性受试验者的血清；图3b示出了已被分割成四片的图2的2-D电泳凝胶的蛋白质印迹法的结果，应用患有非增生的糖尿病性视网膜病的患者的血清；图3c示出了已被分割成四片的图2的2-D电泳凝胶的蛋白质印迹法的结果，应用患有增生的糖尿病性视网膜病的患者的血清；图4示出了应用肌酸激酶B，通过酶联免疫吸附测定法分析来自正常受试验者、糖尿病患者、患有非增生的糖尿病性视网膜病的患者和患有增生的糖尿病性视网膜病的患者的血清而诊断糖尿病性视网膜病的结果；图5示出了应用醛缩酶，通过酶联免疫吸附测定法分析来自正常受试验者、糖尿病患者、患有非增生的糖尿病性视网膜病的患者和患有增生的糖尿病性视网膜病的患者的血清而诊断糖尿病性视网膜病的结果；以及图6示出了应用醛缩酶，通过酶联免疫吸附测定法分析来自例如通过外科手术成功地治疗的糖尿病性视网膜病患者、以及患有进行性糖尿病性视网膜病的患者的血清而诊断糖尿病性视网膜病的结果。实施本专利技术的最佳方式一方面，本专利技术提供了一种诊断视网膜血管病的组合物，它包含醛缩酶。如本文应用的术语“诊断”表示检测致病状态的存在或性质。就本专利技术的目的来说，“诊断”表示检测视网膜血管病。如本文应用的术语“视网膜血管病”表示其中视网膜蛋白质暴露于眼血管的所有疾病。视网膜血管病(其中，在血液内产生针对视网膜蛋白质的自身抗体)可通过检测这类自身抗体的产生而诊断。在本专利技术中，视网膜血管病是通过检测针对醛缩酶蛋白质的自身抗体的形成来诊断的。所以，就本专利技术的目的来说，视网膜血管病包括产生针对醛缩酶的自身抗体的所有视网膜血管病。视网膜血管病的非限制性实例包括糖尿病性视网膜病、与年龄相关的黄斑变性和视网膜水肿。最优选的实例是糖尿病性视网膜病。抵抗醛缩酶C的自身抗体的检测能有效地诊断非增生的和增生的糖尿病性视网膜病这两者。如本文应用的术语“自身抗体”表示这种抗体与免疫系统内抵抗外源性抗原而产生的抗体不同，它是抵抗内源性或天然的底物而产生的。就本专利技术的目的来说，自身抗体表示视网膜血管病中抵抗暴露的视网膜蛋白质而产生的自身抗体。下表2中描述了产生自身抗体的视网膜蛋白质。这些自身抗体通常是不可检测的或者至多以可忽视的水平在正常个体或糖尿病患者中检测到，但在例如糖尿病性视网膜病这样的视网膜血管疾病中增大到显著的水平。本专利技术人通过一维和二维蛋白质印迹法发现了，表2中列出的视网膜蛋白质是发生诸如糖尿病性视网膜病这样的疾病时产生自身抗体的蛋白质，而且发现了，可通过检测针对这些蛋白质的自身抗体而成功地诊断视网膜血管病。当应用表2中列出的蛋白质通过酶联免疫吸附测定法分析糖尿病患者的血样时，能通过检测抗醛缩酶C的自身抗体有意义地诊断视网膜血管病。如本文应用的术语“意义”表示这样的诊断结果，它们具有得自准确结果的高有效性，以及在重复测定时提供恒定结果的高可靠性。将醛缩酶蛋白质用作抗原以便检测包括血浆、血清和血液的生物样品中存在的抗醛缩酶C的自身抗体。醛缩酶，本文应用的作为本专利技术中与抗醛缩酶C的自身抗体的免疫复合物的抗原，包括醛缩酶A、醛缩酶B和醛缩酶C。有三种醛缩酶同工酶，即，醛缩酶A、B和C，而且这些同工酶表现不同的组织分布。醛缩酶A主要在肌肉和红细胞内被表达，醛缩酶B主要在肝、肾和小肠内被表达，而醛缩酶C则主要在脑和神经组织内被表达。醛缩酶A、B和C之间的氨基酸序列存在很高的同源性，而且已知在它们的总体折叠和活性部位结构中，同工酶A、B和C的结构几乎是相同的(Arakaki等，Protein Sci.，2004年12月，13(12)3077～3084)。还有，已知动物种类(例如人、大鼠、小鼠等)之间醛缩酶是高度同源的。考虑到所述复合物中的抗原和抗体之间的相互作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断视网膜血管病的组合物，它包含醛缩酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵良济，安宝暎，俞元一，权五雄，
申请(专利权)人：健一药品株式会社，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]