耐盐基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种耐盐基因及其应用，具体的涉及耐盐基因LOC8076251和/或LOC8056787，其在耐盐过程或者耐盐株中高表达。可以将LOC8076251和/或LOC8056787应用于植物的培育中，选育出具有耐盐胁迫能力的植物品种。

【技术实现步骤摘要】
耐盐基因及其应用
本专利技术属于生物
，涉及耐盐基因及其应用。
技术介绍
2009年，美国能源部联合基因组研究所的科学家们利用全基因组鸟枪测序法完成了对高粱全基因组的测序及分析，结果显示，高粱基因组大约有3万个基因，7.3亿个核苷酸。高粱全基因组测序的完成对高粱后续各项研究的进展提供了坚实的基础。随着三代测序技术的到来，三代全长转录组的应用在植物研究领域带来了更广阔的前景。SalahE.Abdel-Ghany等通过对高粱转录组的二代测序和三代测序数据进行比较分析，结果表明三代测序在识别全长亚型，多聚腺苷酸化等方面具有二代测序无可比拟的优势。本研究使用OxfordNanoporeTechnologies三代全长转录组测序方法对高粱苗期耐盐品种和敏盐品种进行测序比较分析，旨在探究两个品种耐盐机制的异同，发掘耐盐性关键基因，为后续高粱耐盐机制的深入研究奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与高粱耐盐相关的分子标志物，可以为高粱品种的筛选、推广种植以及改良提供理论依据和新的手段。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下的技术方案：本专利技术第一方面提供了一种与高粱耐盐相关的分子标志物，所述分子标志物选自：LOC8076251和/或LOC8056787。本专利技术第二方面提供了一种预测或辅助预测高粱耐盐的方法，通过检测样品中本专利技术第一方面所述的分子标志物的表达水平来预测或辅助预测植物的耐盐性。进一步，通过northernblotting、实时荧光定量PCR、原位杂交、基因芯片、高通量测序技术、蛋白免疫技术检测样品中本专利技术第一方面所述的分子标志物的表达水平。进一步，通过实时荧光定量PCR检测样品中本专利技术第一方面所述的分子标志物的表达水平。本专利技术第三方面提供了本专利技术第二方面所述的方法在筛选耐盐高粱中的应用。本专利技术第四方面提供了本专利技术第二方面所述的方法在高粱育种中的应用。本专利技术第五方面提供了一种检测本专利技术第一方面所述的分子标志物的试剂，所述试剂能够检测LOC8076251或LOC8056787的水平。本专利技术的第六方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第五方面所述的试剂。本专利技术第七方面提供了本专利技术第五方面所述的试剂或本专利技术第六方面所述的试剂盒在预测或辅助预测高粱耐盐中的应用；和/或在筛选耐盐高粱中的应用。本专利技术第八方面提供了一种提高高粱耐盐性的方法，所述方法包括：增加本专利技术第一方面所述的分子标志物的表达。本专利技术的优点和有益效果：本专利技术首次发现了LOC8076251或LOC8056787与植物耐盐相关，对于研究植物抗逆的遗传本质及提高植物耐盐具有重要的意义。附图说明图1是分子标志物LOC8076251和LOC8056787在敏盐株和耐盐株中的表达情况图；其中，A是LOC8076251；图B是LOC8056787；图2是LOC8076251和LOC8056787在盐胁迫中的表达情况图；其中，图A是LOC8076251，图B是LOC8056787。具体实施方式本专利技术通过对敏盐高粱和耐盐高粱进行转录组测序，利用遗传学手段来寻找耐盐和敏盐基因表达谱的差异，并同时通过盐胁迫试验检测盐响应的基因，挖掘耐盐的功能基因，解析其复杂的分子机理奠定理论基础，同时为耐盐高粱的鉴定以及育种提供重要的手段。在本专利技术中，可以利用本领域内已知的任何方法对分子标志物进行检测，包括但不限于northernblotting、实时荧光定量PCR、原位杂交、基因芯片、高通量测序技术、蛋白免疫技术。Northernblot是最为经典的核酸杂交技术，被广泛用于基因的表达检测，也是唯一能可视化检测基因表达的方法。实时荧光定量PCR是目前最常用的定量检测特定基因表达的方法，此方法是在反应体系中加入荧光基团，利用信号的积累检测PCR进程，通过标准曲线及CT值来计算模板浓度，从而达到定量的目的。原位杂交是指将核酸探针标记后，与组织或细胞中的核酸杂交，将已知序列的基因在组织、细胞或亚细胞定位的一种检测技术。该方法可以更直观地探测基因在组织或细胞中的时空表达模式。本领域技术人员应当理解，检测基因的手段或方法不是本专利技术的重要方面，只要可以确定本专利技术所述的分子标志物表达水平即可。应当知道，本专利技术的分子标志物包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显示完整分子标志物核酸分子相同的功能，它们可能通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。本领域技术人员熟知，在不影响分子标志物功能的条件下，对分子标志物进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。本专利技术的基因核酸分子可以以单链或双链的形式存在，本专利技术的核酸分子可以是RNA、DNA、PNA、LNA的形式。本专利技术的分子标志物可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表达分子标志物的DNA片段的载体转染细胞获得。所述载体包括病毒载体、真核表达载体。病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEFBos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pBin438、pCAMBIA1301等。本专利技术提供了一种提高高粱耐盐性的方法，所述方法包括：增加植物中本专利技术所述的分子标志物的表达。在得知了本专利技术所述的分子标志物的用途后，可以采用本领域人员熟知的多种方法来调节所述的分子标志物的表达。比如可通过本领域人员已知的途径将携带分子标志物基因的表达单位(比如表达载体或病毒等)递送到靶点上，并使之表达。作为本专利技术的一种实施方式，将本专利技术所述的分子标志物通过常规的方法克隆到适当的载体中，将所述的带有外源基因的重组载体导入到可表达所述分子标志物的植物。优选的，提供了一种制备转基因植物的方法，包括：(1)将外源的分子标志物的多核苷酸转入植物细胞、组织、器官或组织，获得转化入分子标志物多核苷酸的植物细胞、组织、器官或种子；和(2)将步骤(1)获得的转入了外源分子标志物多核苷酸的植物细胞、组织、器官或种子再生成植物植株。其它增加分子标志物其同源基因表达的方法是本领域周知的。例如，可通过用强启动子驱动从而增强分子标志物基因或其同源基因的表达。或者通过增强子来增强该分子标志物基因的表达。此外，本专利技术还涉及利用分子标志物作为一种基因转化植株后代的追踪标记。本专利技术还涉及利用分子标志物作为一种分子标记，通过检测植物中分子标志物的表达情况，鉴定植物的耐盐能力。下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与高粱耐盐相关的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物选自：LOC8076251和/或LOC8056787。/n

【技术特征摘要】
1.一种与高粱耐盐相关的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物选自：LOC8076251和/或LOC8056787。


2.一种预测或辅助预测高粱耐盐的方法，其特征在于，通过检测样品中权利要求1所述的分子标志物的表达水平来预测或辅助预测植物的耐盐性。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过northernblotting、实时荧光定量PCR、原位杂交、基因芯片、高通量测序技术、蛋白免疫技术检测样品中权利要求1所述的分子标志物的表达水平。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，通过实时荧光定量PCR检测样品中权利要求1所述的分子标志物的表达水平。

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【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏轩，李海，宝力格，陆平，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11