一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法技术

本发明专利技术属于核酸检测技术领域，具体涉及一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法，用于检测目标样本中核酸分子的数目，将目标样本处理得到DNA单链样品，稀释后滴加到检测基板上进行捕获杂交，完成后，冲洗检测基板，将荧光探针稀释后滴加到前述检测基板，完成后冲洗检测基板；将冲洗后的检测基板置于荧光显微镜下，对荧光探针数目进行计数，所得数目即为目标样本中核酸分子的数目。本发明专利技术相比现有技术具有以下优点：根据目标核酸片段设计对应的捕获核酸片段和标记核酸片段，能够实现对含有不同目标核酸片段的目标样本中核酸分子数量进行检测，适用范围广、准确度高，可以通过肉眼观测到核酸分子并进行定量。

【技术实现步骤摘要】
一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法
本专利技术属于核酸检测
，具体涉及一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法。
技术介绍
核酸主要包括脱氧核糖核酸和核糖核酸两大类，是重要的生物大分子，是遗传信息的载体，是分子生物学和生命科学研究的重要内容，核酸的组成、排列顺序、结构特征及其生物学功能是核酸的最重要研究内容，但对于核酸的定量测定，仍是科研工作者关注和研究的课题之一，其测定对研究核酸的生化反应，发展核酸医药制品以及对疾病的诊断和防治具有不可估量的意义；核酸的定量测定方法有很多，如色谱法、分光光度法、荧光光度法、显微光度法、免疫分析法以及共振瑞利散射法等，其中荧光光度法使定量测定核酸的常用方法，但由于核酸的荧光量子产率很低，因此需要借助荧光探针间接测定；在面对疑似感染者时，快速且准确的做出诊断并有效隔离感染者，对疫情防控起到至关重要的作用。在抗疫战斗中，核酸检测成为了确诊病例的金标准，成为了防疫工作中最强有力的武器；但是无论是传统的荧光定量PCR还是高端的数字PCR或恒温PCR技术，这些核酸检测技术都需要对目标核酸片段进行扩增后才能进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法，用于检测目标样本中核酸分子的数目，其特征在于，包括由标记核酸片段修饰上转换荧光纳米颗粒所得的荧光探针、由捕获核酸片段修饰的检测基板以及目标样品；所述目标样品中包含目标核酸片段，所述捕获核酸片段可以与目标核酸片段上一部分进行配对杂交，所述标记核酸片段可以与目标核酸片段上不能与捕获核酸片段配对杂交的部分配对杂交；/n检测方法包括以下步骤：/n（1）将目标样品用PB缓冲液进行稀释，得到相应浓度的实验标准品，将实验标准品均匀滴加到检测基板上，目标样品与检测基板上捕获核酸片段结合后，冲洗检测基板，洗去未结合的目标样品；/n所述目标样品的制备方法为：将需要检测...

【技术特征摘要】
1.一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法，用于检测目标样本中核酸分子的数目，其特征在于，包括由标记核酸片段修饰上转换荧光纳米颗粒所得的荧光探针、由捕获核酸片段修饰的检测基板以及目标样品；所述目标样品中包含目标核酸片段，所述捕获核酸片段可以与目标核酸片段上一部分进行配对杂交，所述标记核酸片段可以与目标核酸片段上不能与捕获核酸片段配对杂交的部分配对杂交；
检测方法包括以下步骤：
（1）将目标样品用PB缓冲液进行稀释，得到相应浓度的实验标准品，将实验标准品均匀滴加到检测基板上，目标样品与检测基板上捕获核酸片段结合后，冲洗检测基板，洗去未结合的目标样品；
所述目标样品的制备方法为：将需要检测的目标样本进行核酸抽提得到目标核酸片段，使目标核酸片段解离成DNA单链样品，所述DNA单链样品为目标样品；
（2）将荧光探针用PB缓冲液进行稀释，得到荧光探针稀释液，将荧光探针稀释液均匀滴加到步骤（1）处理后的检测基板表面进行杂交，冲洗检测基板，洗去未结合的荧光探针；
（3）将步骤（2）处理后的检测基板置于荧光显微镜下，使用近红外光作为激发光源，可见光波段作为检测波段，对整个检测基板进行荧光成像，对荧光探针数目进行计数，所得数目即为目标样本中核酸分子的数目。


2.如权利要求1所述一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法，其特征在于，所述荧光探针是以NaYF4、NaGdF4、CaF2、LiYF4、NaLuF4、LiLuF4、KMnF3或Y2O3为发光基质，与敏化剂和激活剂共掺杂后得到上转换荧光纳米颗粒UCNPs，然后对UCNPs颗粒表面经羧基化修饰得到羧基化修饰纳米颗粒UCNP@PEG-COOH，将标记核酸片段氨基化处理后修饰UCNP@PEG-COOH得到荧光探针。


3.如权利要求2所述一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法，其特征在于，所述荧光探针的制备方法包括：
（1）上转换荧光纳米颗粒制备
取1mmol的RECl3溶液、6mL油酸和15mL十八烯混合加入100mL三颈圆底烧瓶中，在氩气流保护下搅拌加热至160℃并维持20min，得到澄清的一次混合溶液；RECl3溶液中RE3+包括Y3+、敏化剂、激活剂；
将一次混合溶液冷却至50℃，加入10mL含有4mmol氟化铵和2.5mmol氢氧化钠的甲醇溶液，随后升温至150℃并维持20min去除甲醇，得到二次混合溶液；
然后将二次混合溶液加热至310℃并维持90min，向反应体系中热注射含有三氟乙酸钠和三氟乙酸钇的油酸/十八烯溶液，其中油酸和十八烯的体积比为1:1，310℃下维持60min，反应结束后将液体冷却至室温，用乙醇和环己烷离心洗涤，在温度为52-58℃的条件下干燥得到UCNPs；
（2）羧基化修饰纳米颗粒制备
将1mL浓度为10mM的UCNPs环己烷溶液加入1mL浓度为0.3mol/L的盐酸溶液中，超声10min后搅拌3h，得到混合溶液，然后对混合溶液高速离心后舍去上清液，得到沉淀一，对所得沉淀一水洗5-8次，得到酸洗UCNPs，将酸洗UCNPs分散到1mL去离子水中得到酸洗UCNPs分散液；
将上述所得酸洗UCNPs分散液与...

【专利技术属性】
技术研发人员：何皓，
申请(专利权)人：深圳市光与生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44