一种高通量快速测定稻米酶解量的方法技术

本发明专利技术提供一种高通量快速测定稻米酶解量的方法，至少包括如下步骤：(1)预处理：将米粉和乙酸钠缓冲液置于96孔深孔板中，预热后进行离心；所述米粉是指粉状稻米；(2)体外消化反应：使用多通道移液器将消化缓冲液加入到步骤(1)的96孔深孔板中，计时并搅拌，每隔一定时间进行取样，将样本置于96孔PCR板中，向96孔PCR板中加入酒精结束反应，获得各时间点的反应样本；(3)酶解量测定。本发明专利技术具有操作简单，成本较低，可快速高效地模拟米饭体内的消化情况，从而获得稻米体内的消化特性。

【技术实现步骤摘要】
一种高通量快速测定稻米酶解量的方法
本专利技术属于医疗卫生、食品健康领域，涉及一种高通量快速测定稻米酶解量的方法。
技术介绍
水稻(OryzasativaL.)作为世界最重要的粮食作物之一,为人类活动提供大量的能量，但是糖尿病人过量摄入可能会导致生命危险，此外，普通人过量摄入淀粉也会导致肥胖从而引起其他并发症。通过提高稻米中的抗性淀粉含量可有效地降低糖尿病人过量食用产生的风险，同时抗性淀粉作为一种膳食纤维可以改善肠道中益生菌具有保健作用。抗性淀粉(ResistantStarch,Rs)是指在健康者小肠中不被吸收的淀粉及淀粉的降解物。提高稻米中的慢消化淀粉和抗性淀粉的含量对改善水稻的营养品质从而满足当下人们需求显得尤为重要。育种家们一直致力于培育具抗性淀粉含量高的水稻品种。虽然已经取得了一些进展，但是，没有突破性的进展，其中原因之一是表型分析。抗性淀粉测量方法过程繁琐、效率低、可控性差、成本高。这一直制约着培育高抗性淀粉含量的水稻新品种的发展。目前测量消化的方法主要分为体内测定法和体外测定法体内测定方法以人体为试验对象，成本较高，对人体也有一定影响，作为常规测定方法不方便也不现实。目前，国内外研究人员主要注重体外测定方法的研究，其基本原理大多使用酶模拟体内环境水解淀粉，测定稻米的酶解量。文献报道的测定方法主要有：Englyst法、Guraya法以及它们的改进法。前人在稻米消化方法上已经取得了非常大的进步但是还存在一些不足之处，难予实现大批量动态的测量，成本较高，实验繁琐等。
技术实现思路
<br>为克服目前在稻米消化特性分析方面的不足，本专利技术提供了一种高通量快速测定稻米酶解量方法，它具有操作简单、耗时少、高通量和成本低廉等优势。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：一种高通量快速测定稻米酶解量的方法，所述方法至少包括如下步骤：(1)预处理：将米粉和乙酸钠缓冲液置于96孔深孔板中，预热后进行离心；所述米粉是指粉状稻米；(2)体外消化反应：使用多通道移液器将消化缓冲液加入到步骤(1)的96孔深孔板中，计时并搅拌，每隔一定时间进行取样，将样本置于96孔PCR板中，向96孔PCR板中加入酒精结束反应，获得各时间点的反应样本；(3)米粉的酶解量测定：使用多通道移液器将各时间点的反应样本移至96孔酶标板中，测定各时间点的反应样本的葡萄糖浓度，根据公式(I)获得每次取样时的稻米酶解量；酶解量＝葡萄糖浓度*0.9/样本质量*100％(I)。本专利技术还提供前述的高通量快速测定稻米酶解量的方法用于模拟稻米体内的消化情况中的用途。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术具有操作简单，成本较低，可快速高效地模拟米饭体内的消化情况，从而获得稻米体内的消化特性。现有技术中的消化方法是参照megazyme公司试剂盒方法操作的，本专利技术所述的方法与现有方法在消化的方式，反应的体系，反应的容器，终止反应的方法等都存在差异。本专利技术为快速分析稻米消化特性提供了有效的技术支持，能够显著提高筛选有利人体健康稻米的效率。附图说明图1为12种水稻品种消化特性分析图(A为原米粉，B为糊化米粉，C为回生米粉)。图2为12种水稻品种的稻米理化品质(a为表观直链淀粉含量，b含水量，c蛋白质含量，d胶稠度)。图3为12种水稻品种的米粉的RVA图谱。图4为12种水稻品种的米粉的DSC图谱。具体实施方式在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术、基因突变技术及相关领域的常规技术。本专利技术一实施例的高通量快速测定稻米酶解量的方法，至少包括如下步骤：(1)预处理：将米粉和乙酸钠缓冲液置于96孔深孔板中，预热后进行离心；所述米粉是指粉状稻米；(2)体外消化反应：使用多通道移液器将消化缓冲液加入到步骤(1)的96孔深孔板中，计时并搅拌，每隔一定时间进行取样，将样本置于96孔PCR板中，向96孔PCR板中加入酒精结束反应，获得各时间点的反应样本；(3)米粉的酶解量测定：使用多通道移液器将各时间点的反应样本移至96孔酶标板中，测定各时间点的反应样本的葡萄糖浓度，根据公式(I)获得每次取样时的稻米酶解量；酶解量＝葡萄糖浓度*0.9/样本质量*100％(I)。利用96深孔板配合多通道移液器，可方便快速的取样并测量，达到高通量的目的。在一种实施方式中，可使用规格为2.2ml*96孔的深孔板，例如可以为长12.5CM*宽8.5CM*高4.3CM。可选的，所述多通道移液器为12通道移液器。步骤(1)中，预热时，使用磁力搅拌器对米粉和乙酸钠缓冲液进行搅拌。目前普遍的模拟体外消化使用的是控温的水平摇床来实现的，磁力搅拌器配合深孔板的使用能够大大提高实验效率。可选的，步骤(1)中，所述米粉选自原米粉，糊化米粉或回生米粉。步骤(1)中，需确保离心后固体颗粒完全离心沉淀下去，以确保在加入消化缓冲液时就开始反应，同时加入缓冲液时要缓慢排出，防止将底部的沉淀吹打起来。不同状态下的米粉制备方法：原米粉的制备方法为：将精米碾磨成粉，通过孔径为0.15mm(100目)筛，烘干平衡。糊化米粉的制备方法为：将原米粉置于96孔深孔板中，然后放入带有磁力搅拌功能的水浴锅中，使用96孔深孔板的乳胶密封盖将其密封。加热蒸煮，同时不断搅拌。结束之后，将96孔深孔板取出，降温至37℃。回生米粉的制备方法为：将糊化米粉放入4℃冰箱7天。在一种实施方式中，步骤(2)中，搅拌方式为磁力搅拌。步骤(1)或步骤(2)中，所述磁力搅拌器的转速600rpm。保证搅拌效果。本专利技术中使用的磁力搅拌器的磁力转子在消化过程中需一直保持转动，以保证消化过程的一致性和测定结果的可重复性。步骤(2)中，所述体外消化反应于37℃水浴环境中进行。模拟体内环境。优选的，步骤(2)中，取样时，将96孔深孔板从水浴环境中取出，离心，吸取定量样本后，加入等量的乙酸钠缓冲液于96本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量快速测定稻米酶解量的方法，其特征在于，所述方法至少包括如下步骤：/n(1)预处理：将米粉和乙酸钠缓冲液置于96孔深孔板中，预热后进行离心；所述米粉是指粉状稻米；/n(2)体外消化反应：使用多通道移液器将消化缓冲液加入到步骤(1)的96孔深孔板中，计时并搅拌，每隔一定时间进行取样，将样本置于96孔PCR板中，向96孔PCR板中加入酒精结束反应，获得各时间点的反应样本；/n(3)酶解量测定：使用多通道移液器将各时间点的反应样本移至96孔酶标板中，测定各时间点的反应样本的葡萄糖浓度，根据公式(I)获得每次取样时的稻米的酶解量；/n酶解量＝葡萄糖浓度*0.9/样本质量*100％ (I)。/n

【技术特征摘要】
1.一种高通量快速测定稻米酶解量的方法，其特征在于，所述方法至少包括如下步骤：
(1)预处理：将米粉和乙酸钠缓冲液置于96孔深孔板中，预热后进行离心；所述米粉是指粉状稻米；
(2)体外消化反应：使用多通道移液器将消化缓冲液加入到步骤(1)的96孔深孔板中，计时并搅拌，每隔一定时间进行取样，将样本置于96孔PCR板中，向96孔PCR板中加入酒精结束反应，获得各时间点的反应样本；
(3)酶解量测定：使用多通道移液器将各时间点的反应样本移至96孔酶标板中，测定各时间点的反应样本的葡萄糖浓度，根据公式(I)获得每次取样时的稻米的酶解量；
酶解量＝葡萄糖浓度*0.9/样本质量*100％(I)。


2.如权利要求1所述的高通量快速测定稻米酶解量的方法，其特征在于，步骤(1)中，预热时，使用磁力搅拌器对米粉和乙酸钠缓冲液进行搅拌。


3.如权利要求1所述的高通量快速测定稻米酶解量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述米粉选自原米粉，糊化米粉或回生米粉。


4.如权利要求1所述的高通量快速测定稻米酶解量的方法，其特征在于，步骤(2)中，搅拌方式为磁力搅拌。

【专利技术属性】
技术研发人员：潘立旭，刘巧泉，张昌泉，李钱峰，范晓磊，赵冬生，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32