本发明专利技术提供检测样品中分析物的存在或含量的方法，所述方法包括：向多孔表面上加入连接有结合物的颗粒、分析物和被结合物包被的标记颗粒。如果在样品中存在所述分析物，那么在液相中发生免疫反应或化学反应。通过使用所述表面实现从未结合物中分离结合复合体，其中主要在所述多孔表面（例如格栅）的表面上发生二维分离。有趣的是，所公开的表面能够进行分离，其中所述复合体在所述多孔表面（例如格栅）上是二维分布的，而未结合物是三维分布的。因此，所述表面既能进行二维分离又能进行三维分离。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及从多孔表面(例如格栅)上的未结合物中分离形成的免疫复合体或任何生物分子复合体，所述多孔表面包含与所用颗粒兼容的孔或开口。本专利技术公开了用于样品中分析物的检测和定量的异相免疫测定，该测定以二颗粒测定形式进行，其中利用了所述颗粒的尺寸及其不同的性质。在该方法中，使用大颗粒从样品中捕捉分析物，从体液中分离并辨别所述分析物，而小颗粒被用作标记工具。
技术介绍
若干方法使用免疫测定技术来检测和定量标本中的抗原。当前使用两种类型的免疫测定系统。在均相系统中，所述测定在单一相中进行。在异相系统中，所述免疫测定分两步进行。需要额外的步骤从未结合物中分离结合物。通常，固体支持物表面被用作结合相，抗体或抗原通过吸附或化学结合与所述结合相连接。已经开发出了多种固体支持物表面以改善免疫反应的性能和分离步骤的效能。颗粒已经被用作凝集测定中的流动固相以便改善抗体和抗原间免疫反应的效能。在该系统中，可溶性抗原/抗体将与结合在所述颗粒上的特异性抗体/抗原结合，从而在所述颗粒的表面形成不溶性的抗原-抗体免疫复合体沉淀物。在固相免疫测定中，可以通过洗涤固相结合免疫复合体来提高该测定的灵敏度，这使得未结合物的分离更加完全并因此提高信噪比。此外，也已经在提高固体载体表面积的努力中使用了具有多种成分的微粒。本领域技术人员公知基于颗粒的凝集测定。最初的凝集测定利用单一尺寸的颗粒作为聚苯乙烯颗粒，即乳胶颗粒。美国专利第4,279,617号公开了克服凝集测定灵敏度低的方法，尤其是测定少量分析物时，其中使用了两种不同的包被微粒反应物。所述颗粒可以是不同尺寸的。所述方法并不涉及使用过滤处理从凝集物中分离未结合物。现有技术的文献承认存在大量的公开了测定技术的出版物，这些技术依赖多孔部件的使用，例如膜、滤膜或其它基质。美国专利第4,632,901号、EP-B-180638和美国专利第4,727,019号公开了与靶分析物的受体结合的部件以及吸取向第一部件中加入的液体的第二部件。当加入液体样品时，液体流过，部件中的受体与样品中存在的分析物结合。加入样品后，加入分析物的另一标记受体以进行检测。合适的标记是酶、放射性核素或荧光标记。当使用酶标记时，缺点是必须向膜添加显色底物。EP-B-253579公开了上述基于膜的技术的另一实施方案。该实施方案利用被俘获在多孔膜小间隙中的微球以实现将受体或配体固定到多孔膜上的方法。美国专利第4,916,056号、EP-B-389003、美国专利第5,008,080号和美国专利第5,149,622号公开了基于膜的流过测定，其利用上面固定有抗体或抗原的颗粒。颗粒的大小并不重要，虽然优选颗粒大小低于纤维基质的平均孔径。三维膜通常用于从未结合物中分离免疫复合体。美国专利第5,501,949号公开了使用磨碎的颗粒作为固相用于第一结合成分(物质)的免疫测定。使用信号生成物质标记可溶的第二结合成分。与使用标记有颗粒结合标记的结合成分相比，该方法中使用的可溶的非颗粒结合的标记结合成分具有更低的特异活性。这导致测定灵敏度降低。该方法使用三维膜来过滤免疫复合体并分离未结合物。美国专利第4,853,335号公开了免疫测定，其中向多孔膜上加入生物样品、胶体金标记的配体或抗配体(anti-ligand)、以及使用配体或抗配体包被的固相俘获颗粒。根据颜色目测检查膜上俘获的颗粒。英国专利申请第2123146号描述了在双通道光电细胞计数器中或荧光显微镜中完成的测定方法。该公开涉及具有不同的可检测性质的第一和第二微粒，所述不同的可检测性质通过所述测定方法表现出来。所述申请并没有公开使用过滤法从凝集物中分离未结合物。生物液体与颗粒混合，随后测量其不同的性质。美国专利第5,565,366号包括一种方法，其中通过使样品与有色颗粒接触形成测试混合物，所述有色颗粒的表面带有对配体特异的受体。当所述测试混合物通过具有孔径大于颗粒但小于集合物的滤膜时，集合物从滤液中被除去，并分析滤膜/滤液的颜色。该文献公开了对于集合物的形成，与现有技术中使用的较大颗粒相比，使用小的颗粒大小更加有利。然而，使用小颗粒是不利的，因为较小颗粒消耗更多的配体或抗配体。美国专利第6,268,222号公开了一种不同的方法，其中微粒与使用荧光染料标记的纳米颗粒结合。所述颗粒通过其表面官能团相互结合。该专利技术包括核或在其表面具有多个小聚合颗粒的载体颗粒。当使用不同的荧光染料时，通过光源激发可以得到多个荧光发射。通过改变不同纳米球群体的量和比例，可以建立并区分大量的具有独特发射光谱的载体颗粒的分离群体。该方法可以用于样品中多种分析物的多元分析。如上述现有技术的综述所公开，已经单独使用颗粒或与不同应用的三维膜共用使用颗粒以便从样品中分离期望的分析物。然而，由于膜的多孔性，经常存在标记结合物的非特异性结合。因此，当使用三维膜时，由于高背景信号，所以信噪比低。故而，三维膜需要进行大量的洗涤以降低非特异性结合。除了上述公开的方法以外，本领域技术人员还公知诸如利用磁珠的测定方法。上述现有技术文献中公开的方法主要依赖于分析物的目测检测，并且因此对于测量低浓度的分析物来说，并不足够灵敏。此外，标记产生的信号水平并非在各种环境下都足够强。本领域中更加尖端的方法使用电流的变化来指示样品中分析物的存在。例如在美国专利第4,238,757号中，在栅极区域中使用抗体层包被的场效应晶体管以便通过跃迁的电荷浓度的变化来检测抗原-抗体反应。在美国专利第4,219,335号中，加入了标记的反应物，其与分析物-反应物复合体反应或与反应物反应以改变表面的电抗。美国专利第4,233,144号公开了也可以通过电量计免疫测定来测量免疫反应，其中使用电活性物质标记一个免疫反应物。美国专利第4,054,646号公开了一种方法，其中抗原-抗体层被夹在两层传导层之间，并且测量所得层压材料的电容。美国专利第4,072,576号公开了另一类型的测量电容的技术，其利用一对被底物包被并浸在介质中的电极，所述介质含有与底物特异性结合的物质。如美国专利第4,287,300号所述，还可以将检测效应信号的变化与酶免疫测定技术相结合。然而，上述电方法并没有满足对免疫诊断测定所需的简单、迅速、灵敏、廉价并易于使用的方法的需求。美国专利第5,284,748号公开了旨在解决上述缺点的方法，其中在新的免疫诊断方法中使用抗原或抗体标记的胶体金颗粒，任选地使用银进行增强。如此形成的复合体造成基本开放电路的完全或部分完成(闭合)。另一实施方案包括一对空间分离的电导体，尤其是布置在基本上不导电的基质上的导电层。在电导体间存在的空间被定义为路径或通道。形成电路的装置与每一电导体接触，使得通道在回路中形成断开。所述成对物质之间的结合反应完全或部分地桥接所述回路中的断开。一种这样的装置涉及在导电颗粒的表面附着该对物质之一。专利技术概述本专利技术涉及检测样品中分析物的存在或含量的方法。本专利技术使用被第一结合物(即第一结合成分)包被的流动俘获颗粒和被第二结合物(即第二结合成分)包被的可检测的被标记颗粒。两种结合物均是当样品中存在分析物(配体或抗配体)分子时，与该分析物(配体或抗配体)分子结合的特异性配体或抗配体。本专利技术利用所述颗粒并且依赖于多孔表面的使用，所述多孔表面即分离装置。与现有技本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测样品中分析物的存在或含量的方法，所述方法包括： （ａ）向多孔表面施加第一结合成分，所述第一结合成分包含连接有结合物的颗粒，所述结合物与所述分析物特异结合； （ｂ）向所述多孔表面施加所述样品； （ｃ）向所述多孔表面施加第二结合成分，所述第二结合成分包含可检测的被标记颗粒；以及 （ｄ）检测由所述多孔表面上的所述可检测的被标记颗粒产生的信号，所述信号指示所述分析物在所述样品中的存在和／或含量； 其中所述多孔表面允许所述第二结合成分通过所述表面，而不允许所述第一结合成分通过所述表面； 其中所述第一结合成分和所述分析物相互结合以形成第一结合复合体； 其中所述可检测的被标记颗粒与结合物结合，所述结合物与所述第一结合复合体特异结合，以便所述第二结合成分与所述第一结合复合体相互结合以形成第二结合复合体；并且 其中所述第一结合复合体和／或第二结合复合体保留在所述多孔表面上。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡阿尼卢奥托拉，汉努尼库拉，米拉穆尔托弗瑞，
申请(专利权)人：欧雷恩诊断公司，
类型：发明
国别省市：FI[芬兰]
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