一种细胞核染色检测羊肚菌菌丝核浓缩的方法技术

一种细胞核染色检测羊肚菌菌丝核浓缩的方法，步骤：使用含有PDA培养基的无菌平皿进行菌丝培养；将培养基上爬满有羊肚菌菌丝的盖玻片取出且分成对照组和实验组；将对照组和实验组盖玻片浸泡于溶剂中，浸泡结束后对盖玻片洗涤，洗涤结束后向盖玻片上滴加固定液；用缓冲液洗涤由固定液固定的羊肚菌菌丝，将对照组和实验组盖玻片放入洁净染色盒，向染色盒中加入染色固定液；用缓冲液洗涤染色完成的羊肚菌菌丝，用滤纸吸干盖玻片上的残留缓冲液，向盖玻片中央滴加抗荧光淬灭封片液，使羊肚菌菌丝与抗荧光淬灭封片液接触，制作对照组和实验组的玻片样品。有助于对羊肚菌的生长、发育、繁殖、衰老及栽培过程中的长势和产量等因素的了解，利于预判。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞核染色检测羊肚菌菌丝核浓缩的方法
本专利技术属于食用菌菌丝细胞检测
，具体涉及一种细胞核染色检测羊肚菌菌丝核浓缩的方法。
技术介绍
前述的羊肚菌（Morchellaspp.）又名美味羊肚菌，俗称羊雀菌、包谷菌等等。由于菌盖表面凹凸不平并且形状如羊肚，因而称之为羊肚菌，羊肚菌也被收录于李时珍的《本草纲目》一书中。羊肚菌是一种较为珍贵的天然补品，含有丰富的蛋白质、多种维生素及二十余种氨基酸、味道鲜美、营养丰富。羊肚菌与冬虫夏草的功用趋于相同，是一种不含任何激素，无任何副作用的天然滋补品。尤其是经现代医学研究表明：羊肚菌有降血脂、调节免疫功能、抗衰老、抗疲劳、抗病毒、抗辐射、抗肿瘤以及减轻癌症患者放化疗引起的毒副作用，等等。如业界所知，细胞核浓缩是细胞凋亡形态特征之一，细胞凋亡表现出的特征呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，并且细胞表面有“出芽”现象。在光学显微镜下可观察到凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化、核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。HE染色法（hematoxylin-eosinstaini本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞核染色检测羊肚菌菌丝核浓缩的方法，其特征在于包括以下步骤：/nA)羊肚菌菌丝培养，使用含有PDA培养基的无菌平皿进行菌丝培养，先用打孔器在长满羊肚菌菌丝的培养基边缘处打孔，接种至所述培养基的中央，接着在培养基上斜插四枚离平皿中央距离相等的盖玻片，恒温培养，使羊肚菌菌丝爬满于所述的盖玻片；/nB)羊肚菌菌丝处理，先将步骤A）中所述培养基上爬满有羊肚菌菌丝的盖玻片全部取出并且分成对照组和实验组，对照组经不同处理后继续恒温培养，而对实验组经不同处理后进行高温胁迫，并且控制高温胁迫的温度和胁迫时间，所述的对照组以及实验组不同处理各包括加外源抑制剂和不加外源抑制剂，得到对照组和实验组盖玻片；...

【技术特征摘要】
1.一种细胞核染色检测羊肚菌菌丝核浓缩的方法，其特征在于包括以下步骤：
A)羊肚菌菌丝培养，使用含有PDA培养基的无菌平皿进行菌丝培养，先用打孔器在长满羊肚菌菌丝的培养基边缘处打孔，接种至所述培养基的中央，接着在培养基上斜插四枚离平皿中央距离相等的盖玻片，恒温培养，使羊肚菌菌丝爬满于所述的盖玻片；
B)羊肚菌菌丝处理，先将步骤A）中所述培养基上爬满有羊肚菌菌丝的盖玻片全部取出并且分成对照组和实验组，对照组经不同处理后继续恒温培养，而对实验组经不同处理后进行高温胁迫，并且控制高温胁迫的温度和胁迫时间，所述的对照组以及实验组不同处理各包括加外源抑制剂和不加外源抑制剂，得到对照组和实验组盖玻片；
C)羊肚菌菌丝固定，将由步骤B)得到的对照组和实验组盖玻片浸泡于溶剂中，浸泡结束后用缓冲液对所述的盖玻片洗涤，洗涤结束后向盖玻片上滴加用于对羊肚菌菌丝固定的固定液并且控制固定液的滴加量以及控制固定液对羊肚菌菌丝的固定时间；
D)羊肚菌菌丝染色，用缓冲液洗涤步骤C）所述的由固定液固定的羊肚菌菌丝，并且将所述的对照组和实验组盖玻片分别放入洁净染色盒，向染色盒中加入染色固定液并使对照组和实验组盖玻片浸没于染色固定液，控制加入的染色固定液的量以及控制染色时间，得到染色完成的羊肚菌菌丝；
E)羊肚菌菌丝细胞核浓缩检测，用缓冲液洗涤步骤D）染色完成的羊肚菌菌丝，并用滤纸吸干盖玻片上的残留的缓冲液，向盖玻片中央滴加抗荧光淬灭封片液，使羊肚菌菌丝充分与所述抗荧光淬灭封片液接触，制作对照组和实验组的玻片样品，置于荧光显微镜并在346nm-460nm激发波长下观察，根据对照组和实验组细胞核激发光的数量和强弱统计羊肚菌菌丝细胞核浓缩情况。


2.根据权利要求1所述的一种细胞核染色检测羊肚菌菌丝核浓缩的方法，其特征在于步骤A）中所述的培养基边缘处打孔是围绕PDA培养基的边缘部位的四周以等距离间隔状态打孔，孔的直径为4mm-6mm；所述恒温培养的温...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋驰，肖湘月，张宇晨，俞晓明，冀宏，蔡小龙，陈业虎，吴亮亮，
申请(专利权)人：常熟理工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32