一种快速鉴定向日葵列当抗性基因的方法技术

本发明专利技术涉及植物组织培养和转化以及基因功能鉴定领域，特别地涉及向日葵列当(Orobanche cumana)抗性基因的鉴定。本发明专利技术建立了一种基于向日葵发根转化获得复合体而在体外条件下快速鉴定向日葵列当抗性基因的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定向日葵列当抗性基因的方法
本本专利技术属于生物
，涉及一种基于向日葵发根复合体系在体外条件下快速鉴定向日葵列当抗性基因的方法。
技术介绍
向日葵列当(OrobanchecumanaWallr.)又称毒根草或兔子拐棍，是一年生草本植物，其属双子叶植物中的列当科。它是向日葵特有的非光合根寄生植物，对向日葵的生长发育有负面影响(1)。受感染的植株矮小、瘦弱、花盘直径变小或不能形成花盘，最后导致全株枯死(2)。欧洲和亚洲，列当危害造成的减产超过80％(3)。有几种方法可以或多或少地控制列当，例如可使用不同的作物管理解决方案：土壤暴晒，生物控制，和使用除草剂例如咪唑啉酮与耐除草剂向日葵杂交种组合使用。培育抗性品种控制列当是一项最经济有效，简单易行的防治措施(4)。然而，这是一项长期的工作，因为当最新的一个小种的抗性被发现时，列当会进化出一个更具毒力的小种，抗性就会随之逐步减弱或消失。因此，为了加速向日葵列当抗性品种的育种进程和提高抗列当育种效率，现代作物分子育种成为抗列当向日葵育种的关键技术之一。许多遗传作图研究已经分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速鉴定向日葵列当抗性基因的方法，其包括以下步骤：/n(1)向日葵复合植物的获得：/n(1.1)种子消毒与萌发/n选择饱满的向日葵种子用于进行消毒；/n将消毒后的种子播种于含有培养基的培养皿中，并置于适宜于种子萌发的环境中萌发培养；/n(1.2)外植体分离/n选取萌发好的种子，切除接近根一端的一段下胚轴，剩下的种子部分作为外植体用于侵染；/n(1.3)侵染与共培养/n将外植体浸入农杆菌悬浮液中浸染，然后将外植体转移到培养皿中进行共培养；/n(1.4)筛选培养与根诱导培养/n共培养完后，将外植体转移到筛选培养基上培养，并诱导生根，直到获得复合植物；/n(2)向日葵列当抗性鉴定：/n(2....

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定向日葵列当抗性基因的方法，其包括以下步骤：
(1)向日葵复合植物的获得：
(1.1)种子消毒与萌发
选择饱满的向日葵种子用于进行消毒；
将消毒后的种子播种于含有培养基的培养皿中，并置于适宜于种子萌发的环境中萌发培养；
(1.2)外植体分离
选取萌发好的种子，切除接近根一端的一段下胚轴，剩下的种子部分作为外植体用于侵染；
(1.3)侵染与共培养
将外植体浸入农杆菌悬浮液中浸染，然后将外植体转移到培养皿中进行共培养；
(1.4)筛选培养与根诱导培养
共培养完后，将外植体转移到筛选培养基上培养，并诱导生根，直到获得复合植物；
(2)向日葵列当抗性鉴定：
(2.1)向日葵列当种子的消毒和预培养
对向日葵列当种子进行消毒；
对向日葵列当种子进行预培养，其包括在培养皿底部放置灭菌的滤纸，用无菌水完全湿润滤纸，将经过消毒处理的向日葵列当种子尽量均匀地平铺在滤纸上一段时间，然后用于接种向日葵复合植物和野生型向日葵植物；
(2.2)向日葵复合植物的处理
选取具有健康生长点及具有至少3cm健壮发根的植物，小心地将复合植物从培养基中取出，用清水洗掉残留在根上的培养基，直接用于列当接种；
(2.3)野生型对照向日葵种子的消毒和萌发
挑选饱满的向日葵种子用于进行消毒，然后放在发芽纸中萌发7-10天后用于接种；
(2.4)向日葵列当种子接种
取方形培养皿，然后在底盖中填充混合好的基质，在基质上面覆盖灭菌的方形玻璃纤维滤纸，并用蒸馏水将玻璃纤维滤纸润湿；再将含有预培养的列当的滤纸片覆盖在玻璃纤维滤纸上；最后将向日葵或者向日葵复合植物的根放置在上面，地上部分朝向平皿开口一侧，将上盖盖上并用医用胶带将培养皿封好后放置在培养箱中培养；
(2.5)GFP表达检测和寄生瘤数量统计
接种一段时间例如3周后，用肉眼观察和统计向日葵列当寄生瘤的数量，并在荧光显微镜下检查向日葵复合植物的发根以确认含有寄生瘤的发根均有GFP蛋白表达。


2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(1.1)中，所述消毒通过下述方式来进行：用75％的酒精进行表面消毒，然后用次氯酸钠溶液浸泡15分钟，最后用超纯水润洗多次。


3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(1.1)中，所述适宜于种子萌发的环境为处于室温且光照/黑暗替换周期为16/8小时的环境。...

【专利技术属性】
技术研发人员：于鲲，文琴，刘清利，陈希，
申请(专利权)人：先正达生物科技中国有限公司，先正达农作物保护股份公司，
类型：发明
国别省市：北京;11