一种加强胞内丙酰辅酶A代谢提高甾药前体生产的方法技术

本发明专利技术属于生物催化技术领域，具体涉及一种通过加强胞内丙酰辅酶A代谢来提高甾药前体生产的方法。本发明专利技术将获取并利用PCCA、PCCB、PCCC、PCCD、MCEE、MTUA和MTUB，构建PCCA、PCCB、PCCC、MCEE、MTUA和MTUB单一或组合加强和PCCD敲除及所有加强形式和敲除的任意组合的甾药前体生产菌株，以加强甾药前体生产菌株内丙酰辅酶A的代谢，解决丙酰辅酶A过量积累对细胞产生毒害作用，导致生产停滞及产物的降解的问题，有助于提高甾醇转化率、产量和生产效率。该方法可有效用于其他工业生产菌株丙酰辅酶A代谢的加强，具有广泛的应用价值，为甾药前体生产成本的降低提供了新方法。

【技术实现步骤摘要】
一种加强胞内丙酰辅酶A代谢提高甾药前体生产的方法
：本专利技术属于生物催化
，具体涉及一种通过加强胞内丙酰辅酶A代谢来提高甾药前体生产能力的方法。
技术介绍
：甾体药物是仅次于抗生素的第二大类药物拥有巨大的市场和发展前景。甾体药物生产用到的主要前体为4-雄甾烯-3,17-二酮(AD)，1,4-雄甾烯-3,17-二酮(ADD)和9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9α-羟基雄烯二酮)。利用AD可以合成大部分的甾体激素类药物。目前，AD的生产方法主要以微生物转化法为主，其中分枝杆菌属微生物是甾药前体的主要生产菌株。分枝杆菌属微生物在将植物甾醇、胆固醇等甾醇类物质转化为甾体药物前体时，主要经过甾醇吸收、初步氧化和脂肪族侧链的降解三个过程。其中，侧链降解过程由三阶段共18步反应组成，代谢途径冗长复杂。在这一过程中NAD+和辅酶A等辅因子被转化为NADH、丙酰辅酶A和乙酰辅酶A。NADH进入氧化磷酸化途径为ATP的合成提供质子动势，乙酰辅酶A可直接进入三羧酸循环参与NADH、FADH2和GTP的合成。辅酶A类物质是分枝杆菌转化甾醇过程中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甾药前体生产菌，其特征在于，是通过在具有甾药前体生产能力的细菌或真菌宿主细胞中表达PCCA、PCCB、PCCC、MCEE、MTUA或MTUB编码基因中至少一个，和/或敲除表达PCCD的基因来构建的。/n

【技术特征摘要】
20190704 CN 20191060004741.一种甾药前体生产菌，其特征在于，是通过在具有甾药前体生产能力的细菌或真菌宿主细胞中表达PCCA、PCCB、PCCC、MCEE、MTUA或MTUB编码基因中至少一个，和/或敲除表达PCCD的基因来构建的。


2.如权利要求1所述的一种甾药前体生产菌，其特征在于，所述甾药前体为雄甾-4-烯-3,17-二酮、9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮、雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮或A环降解物。


3.如权利要求1所述的一种甾药前体生产菌，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌BL21菌株、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis),分枝杆菌(Mycobacteriumsp.)NRRLB-3683、分枝杆菌(Mycobacteriumsp.)NRRLB-3805、耻垢分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatism)、偶发分枝杆菌(Mycobacteriumfortuitum)、微黄分枝杆菌(Mycobacteriumgilvum)、新金分枝杆菌(Mycobacteriumneoaurum)、草分枝杆菌(MycobacteriumPhlei)或鸟分枝杆菌(Mycobacteriumavium)。


4.如权利要求3所述的一种甾药前体生产菌，其特征在于，所述宿主细胞为新金分枝杆菌(Mycobacteriumsp.)MNRM3。

【专利技术属性】
技术研发人员：申雁冰，王敏，周秀玲，张扬，张晓，夏梦雷，骆健美，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12