一种屎肠球菌及其在水产养殖中的应用制造技术

本发明专利技术涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一株新型屎肠球菌（

【技术实现步骤摘要】
一种屎肠球菌及其在水产养殖中的应用
本专利技术涉及功能微生物筛选
，具体涉及一株屎肠球菌及其在水产养殖中的应用。
技术介绍
1974年Parker首创益生菌一词，最早提出益生菌有利于肠道微生态平衡。目前普遍认为，益生菌的作用主要是改善动物新陈代谢、提高营养物质吸收利用率和免疫力、减少环境污染等。益生菌因具有无毒、无残留、无抗药性、无污染等特点，逐渐被广泛应用。随着水产养殖业的发展和养殖强度的增加，水产动物病害爆发频繁。传统的抗生素药物虽然对治疗疾病有积极效用，但长期使用会产生巨大的负面效应：病原菌产生耐药性，效力下降；药物残留干扰水产动物肠道内有益微生物菌群的生长和繁殖，影响水产动物的健康；残留在水体中的抗生素破坏养殖生态环境，水产品质量下降。自从Kozasa发现分离自土壤的芽抱杆菌可以提高养殖鳗鲡抵御爱德华氏弧菌(Edwardsiellatarda)的能力，有益微生物在水产养殖中的应用研究得到了快速发展。水产益生菌作用的发挥主要是通过调节肠道微生物群落结构，增强养殖生物对营养的吸收利用，进而促进其生长；或通过增强养殖生物非特异性免疫功能，从而提高其健康水平。目前应用于水产养殖上的益生菌种类很多，其中以芽孢杆菌属和酵母菌属的应用最为普遍。例如，2013年Mirbakhsh等在虾苗培养中使用枯草芽孢杆菌SI02和花域枯草芽孢杆菌IS03(B.vallismortisIS03)，提高了幼苗的生长率及成活率。2014年王芸等发现了一种分离自凡纳滨对虾的肠道的解淀粉芽孢杆菌SIP0902，该菌株对包括副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌等7种水产动物致病弧菌均具有较强的拮抗效果。2017年，荣克明等发现了一株酿酒酵母F2，该菌株能够降解氨氮，可在养殖水体中快速转化氨氮成蛋白质，同时产生大量菌体为水生动物提供饵料，维持水产动物肠道微生态平衡，提高水产动物存活率和产量。2019年薛明洋等发现了一种含有甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)对维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、爱德华氏菌、霉实假单胞菌、无乳链球菌均有抑菌效果，可应用于水产动物疾病的治疗。水产用益生菌除了考虑益生菌在肠道内定殖以及定殖的时间外，还应注意其耐酸、耐盐、耐热等特性，这些因素均会影响益生菌的活性及作用效果。所以，筛选的益生菌应具有如下特点：(1)在低pH值和胆汁中可以存活，可在肠内定殖，竞争优势强；(2)易于获得，在体内易繁殖，体外易培养，不与病原菌杂交；(3)产生的抑菌物质对机体本身没有危害；(4)能够提高机体免疫力；(5)经高热加工后，益生菌活性好，稳定性高；(6)不带耐药因子或所含耐药因子少。随着人们对水产品安全和品质的要求不断提高，以及水产养殖疾病问题日益突出，益生菌成了可以替代抗生素及化学药品，防止水产动物病害的最佳选择，所以筛选出适用于水产养殖的优质益生菌是当前急需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株新型屎肠球菌(Enterococcusfaecium)，并提供了其在水产养殖中的应用。所述屎肠球菌筛选自健康鲫鱼的肠道，能够显著抑制病原菌，提高水产动物的免疫力、抗应激能力、促进水产动物生长，提高水产动物繁殖性能，并能调节水质，对水产动物益生作用显著。本专利技术一方面提供了一种屎肠球菌CD01(EnterococcusfaeciumCD01)，于2020年4月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO:M2020088。本专利技术一方面提供了所述屎肠球菌在水产养殖中的应用。本专利技术一方面提供了所述屎肠球菌在水产发酵饲料中的应用。本专利技术还提供了一种微生物制剂，包括上述屎肠球菌。所述微生物制剂进一步包含枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、酿酒酵母、植物乳杆菌、双歧杆菌中的任意一种或两种或多种的组合。所述微生物制剂中屎肠球菌的活菌量不低于108U/ml。本专利技术还提供了所述微生物制剂在水产养殖中的应用。有益效果本专利技术筛选到的屎肠球菌CD01对灿烂弧菌和副溶血弧菌两种致病菌具有很强的抑制效果；对青霉素、四环素、氯霉素、诺氟沙星敏感，而对庆大霉素表现耐药，对环丙沙星表现中等耐药；对酸碱的耐受性强。所述屎肠球菌CD01可作为饲料添加剂，显著促进养殖动物生长，提高免疫力。与对照组相比，添加了屎肠球菌CD01的益生菌组中鲤鱼苗的增重率、SOD活力、LZM活力、POD活力、AKP活力、分别提高了61.9％、42.0％、64.3％、14.3％，同时应对副溶血弧菌攻毒试验的成活率提高了26.2％。所述屎肠球菌CD01还可以应用于发酵饲料的生产。与对照组相比，饲喂屎肠球菌CD01发酵饲料的实验组对虾增重率和特定生长率分别提高了16.0％、24.2％，饵料系数降低了14.0％；而实验组对虾血液中超氧化物歧化酶、溶菌酶、过氧化物酶活力分别提高了31.9％、279.8％、21.7％，总抗氧化力提高了1.47倍。效果非常显著。本专利技术筛选到的屎肠球菌CD01生长性能优秀，抗逆性强，能有效抑制病原菌，促进养殖动物生长，并且能够提高水产动物免疫力，提高全周期存活率，有助于提高养殖户的经济效益，在水产养殖中应用前景广阔。具体实施方式本专利技术实施例中选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本专利技术技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本专利技术实施例的具体记载。其中实施例中选用的培养基，具体配方如下：MRS培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，酵母粉5g，吐温-80lml，磷酸二氢钾2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.15g，蒸馏水1000ml，pH6.2-6.4，加入15-20g的琼脂以配制固体培养基，115℃灭菌20min。营养肉汤培养基(1L)：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g。将以上成分加入蒸馏水中，定容到1000mL，加热溶解，调节pH为7.3±0.2；分装后121℃高压灭菌20min。(注：固体培养基在此基础上加1.5％琼脂粉)。2216E海水培养基：蛋白陈5g，酵母浸出物1g，磷酸铁0.01g，海水1000ml，pH7.6-7.8，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。TSB培养基：胰蛋白胨大豆肉汤30g，氯化钠15g，蒸馏水1000ml，pH7.4-7.6，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术。实施例1菌株的分离、筛选与鉴定1、样品采集于青岛市胶州市九龙镇中河道的鲫鱼。2、筛选方法将鲫鱼体表用无菌水冲洗后进行解剖，取出肠道，去除肠系膜等附着物，剪取有肠道内容物的肠道，然后加入2mL预冷的无菌生理盐水，充分匀浆，离心，取上清液10倍系列稀释。取原液、10-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种屎肠球菌，其特征在于，所述的屎肠球菌的保藏编号为CCTCC NO: M 2020088。/n

【技术特征摘要】
1.一种屎肠球菌，其特征在于，所述的屎肠球菌的保藏编号为CCTCCNO:M2020088。


2.权利要求1所述的屎肠球菌在水产养殖中的应用。


3.权利要求1所述的屎肠球菌在水产发酵饲料中的应用。


4.一种微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂包含权利要求1所述的屎肠球菌。


5.如权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘广，倪梦丽，周怡，魏万权，王磊，郭本月，
申请(专利权)人：青岛玛斯特生物技术有限公司，青岛冠泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37