一株枯草芽孢杆菌菌株及其在水产养殖中的应用制造技术

本发明专利技术涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体涉及一株新型枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用。所述枯草芽孢杆菌筛选自凡纳滨对虾肠道，保藏编号为CCTCC NO:M 2020091，能够显著抑制病原菌，提高水产动物的免疫力和抗病力，产生蛋白酶及淀粉酶提高饲料消化利用，促进水产动物生长，可广泛应用于水产饲料领域。

【技术实现步骤摘要】
一株枯草芽孢杆菌菌株及其在水产养殖中的应用
本专利技术涉及功能微生物筛选
，具体涉及一株枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用。
技术介绍
我国是渔业大国，水产养殖已经成为我国主要的食品供给来源之一，水产品具有营养价值高，口味鲜美，有益人体等特点，并且随着国民经济的快速发展，生活水平的不断提高，人们对水产品的需求量日益增加，同时水产品贸易国际化发展，促进了我国水产养殖规模的不断扩大。但是，高密度、集约化养殖为主的水产养殖模式产生了许多问题，如水体富营养化、水质恶劣，各种疾病的爆发等，给水产养殖业带来了巨大的经济损失。传统防治疾病的方法主要是使用抗生素，抗生素的应用有效地控制了许多水产疾病的发生，提高了经济效益和社会效益。但是，抗生素的应用也给人类和养殖业带来了许多副作用，并且日益严重，已受到许多方面的关注。抗生素使用易产生耐药性菌株问题，并且存在水产动物体内残留的问题，影响水产品食品安全，因此抗生素替代成为必然。益生菌能够参与动物体内微生物平衡，直接通过增强动物对肠内有害微生物群落的抑制作用，或通过增强非特异性免疫功能来预防疾病，进而间接起到促进动物生长的作用，提高动物饲料的转化率。来源于养殖动物本身及养殖环境的益生菌在改善养殖水环境、抑制病原微生物的生长、改善养殖动物的健康状况、促进动物生长、提高饲料利用率等方面的作用突出。因此，近些年对于益生菌的筛选成为本领域内的研究热点。在生产实践中，益生菌通常作为饲料添加剂直接添加到饲料中或者直接使用到池塘中，益生菌通常通过改善养殖动物消化道菌群平衡、促进养殖动物的生长、提高机体的免疫力及对病原微生物的抵抗能力、提供消化酶提高饲料利用率、改善水质等途径，来发挥益生菌的有效作用，但是并不是所有的益生菌菌株都具有这些方面的有益作用，筛选适用于水产养殖的多功能高效益生菌对水产饲料改进具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株新型枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用。所述枯草芽孢杆菌筛选自凡纳滨对虾肠道，能够显著抑制病原菌，提高水产动物的免疫力和抗病力，产生蛋白酶及淀粉酶提高饲料消化利用，促进水产动物生长，可广泛应用于水产饲料领域。本专利技术一方面提供了一株枯草芽孢杆菌DN02(BacillussubtilisDN02)，已于2020年4月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO:M2020091。本专利技术另一方面提供了一种微生物制剂，包含上述枯草芽孢杆菌。所述微生物制剂还包含地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、屎肠球菌、双歧杆菌中的任意一种或两种或多种的组合。所述微生物制剂中上述枯草芽孢杆菌的活菌量不低于109CFU/g。本专利技术还提供了上述微生物制剂在水体净化中的应用。本专利技术还提供了上述微生物制剂在发酵饲料生产中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术筛选到的枯草芽孢杆菌DN02对金黄色葡萄球菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌四种病原菌均有很强的抑制作用，能有效减少养殖动物病害发生的几率；具有较好的产酶能力，尤其是产蛋白酶能力突出，蛋白酶酶活高达1532.5U/g，淀粉酶和纤维素酶的产量也较高，酶活分别达到89.9U/g和162.4U/g，可广泛用于饲料原料及水产全价饲料的发酵处理，高效分解大分子营养物质，提高饲料消化率。枯草芽孢杆菌DN02在对虾肠道内的粘附率高达47.81％，能有效定植于宿主肠道上皮，发挥其生物学特性，抑制病原菌入侵感染、产生消化酶等。枯草芽孢杆菌DN02可作为饲料添加剂，显著促进对虾生长，有效提高饲料利用率，同时提高对虾的免疫力及对病毒的抵抗能力。其中，与对照组相比，添加了枯草芽孢杆菌DN02的益生菌组对虾的特定生长率提高了19.5％，饲料系数降低了21.5％，益生菌组对虾中蛋白酶和淀粉酶活性分别提高了49.9％和91.0％，酚氧化酶和超氧化物歧化酶活性分别提高了178.5％和71.3％；病毒感染17天后益生菌组累计死亡率仅为21.6％，显著低于对照组。枯草芽孢杆菌DN02还可以广泛应用于养殖水体的净化，高效降解养殖水体中的氨态氮和硝态氮。DN02菌粉处理48h后，对虾养殖废水中氨态氮的去除率高达96.5％，亚硝态氮的去除率高达97.1％，效果非常显著附图说明图1为枯草芽孢杆菌DN02液体发酵培养产蛋白酶曲线；图2为枯草芽孢杆菌DN02生长曲线。具体实施方式本专利技术实施例中选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本专利技术技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本专利技术实施例的具体记载。实施例中涉及的培养基配方如下：2216E海水培养基：蛋白陈5g，酵母浸出物1g，磷酸铁0.01g，海水1000ml，pH7.6-7.8，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。TSB培养基：胰蛋白胨大豆肉汤30g，氯化钠15g，蒸馏水1000ml，pH7.4-7.6，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。MRS培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，酵母粉5g，吐温-80lml，磷酸二氢钾2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.15g，蒸馏水1000ml，pH6.2-6.4，加入15-20g的琼脂以配制固体培养基，115℃灭菌20min。下面结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述。实施例1菌株的分离、筛选与鉴定1、样品采集于青岛市胶州对虾养殖场凡纳滨对虾肠道。2、筛选方法取对虾肠道，加入无菌生理盐水，28℃，150rpm振荡摇匀1h，使细菌充分散布于生理盐水中，10倍梯度稀释，分别接种于2216E、TSB和MRS固体培养基上，28℃培养24h-48h。选取均匀清晰的单菌落，划线纯化细菌。将获得的单菌落依此命名为DN01、DN02、DN03、……、DN32。3、对虾消化道共生菌的生物特性分析共生菌(待测菌株)和病原菌(对照菌株)经斜面活化培养，加入适量生理盐水，制成浓度为104-7cells/ml的菌悬液，注射给予健康凡纳滨对虾。其中，鳗弧菌作为强毒对照菌株，粘质沙雷氏菌作为弱毒对照菌株，通过累计死亡率的统计和比较，分析对虾共生菌活菌的生物特性。结果显示：多数菌株不同剂量均与生理盐水注射组无显著性差异，部分菌株高剂量有弱毒性，选择安全、没有毒性的菌株进行下一步抗病菌株筛选。4、对虾病原菌拮抗菌的筛选以致病菌作为指示菌，采用平板拮抗法筛选益生菌。在涂有指示菌的平板上分别点种待筛选的细菌菌液，28℃恒温培养，48h内观察点种区周围是否出现抑菌透明区或覆盖区。结果显示，申请人从凡纳滨对虾肠道分离的15株共生菌中有4株菌对对虾病原菌有明显的拮抗作用。体外拮抗试验结果如表1所示，抑制作用表示为抑菌圈直径与菌落直径的比值，1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO: M2020091。/n

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCCNO:M2020091。


2.权利要求1所述枯草芽孢杆菌在发酵饲料生产中的应用。


3.权利要求1所述枯草芽孢杆菌在水体净化中的应用。


4.权利要求1所述枯草芽孢杆菌在水产饲料中的应用。


5.一种微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂包含权利要求1所述的枯草芽孢杆菌。


6.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：周怡，王磊，倪梦丽，郭本月，刘广，魏万权，
申请(专利权)人：青岛玛斯特生物技术有限公司，青岛冠泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37