一种合成GHK醋酸盐的方法技术

本发明专利技术属于多肽合成技术领域，尤其涉及一种合成GHK醋酸盐的方法。本发明专利技术合成GHK醋酸盐的方法采用常规市售保护氨基酸，容易获得，转产有保障，采用活化酯法形成酰胺键，全保护氨基酸自肽序C端逐个偶联至肽序N端，合成过程采用的反应均为温和反应，避免了诸多不利副反应；同时采用醋酸挂柱处理的阴离子交换树脂进行离子交换得到GHK醋酸盐，可避免产物三氟乙酸根的存在，保障了产品的安全性，适合工业放大生产，无需使用昂贵设备，可有效控制成本。

【技术实现步骤摘要】
一种合成GHK醋酸盐的方法
本专利技术属于多肽合成
，尤其涉及一种合成GHK醋酸盐的方法。
技术介绍
GHK(glycyl-L-histidyl-L-lysine，蓝铜胜肽小分子肽)存在于人的血液、唾液和尿液中，由美国科学家LorenPickart等于1973年发现。GHK作用于真皮层，能促进细胞外基质如I型胶原蛋白和III型胶原蛋白、弹性蛋白及结构糖蛋白如层黏连蛋白和纤维连接蛋白的合成，促进伤口恢复和组织更新重建，加强真皮层，使皮肤变得更厚，紧致，皱纹得到舒缓，对抗紫外线照射的能力更强。因此，GHK及其铜络合物和修饰后产物被广泛用于功能性化妆品。GHK是重要的化妆品功能性活性物，也是制备铜肽的重要原料。目前，GHK功效评价的报道甚多，都已验证功效真实性，而在其制备工艺方面，也有针对性开发，但多存在各种弊端。公开号CN103665102A专利通过采用亲脂性保护基改变中间体的亲脂性使工艺过程更好操作、产率提升，但是工艺使用非常规市售保护氨基酸，需为氨基酸上保护，路线步骤多，工艺链长，并且最终产物未进行脱三氟乙酸根处理，具有毒害性，不利于应用；公开号CN107098950A专利通过酰氯与硅烷保护的组氨酸反应得到相应的氯取代二肽，与三氟乙酸酐反应得到三氟乙酰基保护物，再与酰氯化试剂反应制成相应的酰氯产物，然后与三氟乙酰赖氨酸反应得到相应的氯取代三肽，最后氨解并脱去三氟乙酰基得到GHK或AHK，但是工艺使用非常规市售保护氨基酸，氨水氨解去保护，过程中反应条件都较剧烈，容易造成氨基酸消旋；公开号CN107778349A专利则使用Trt基团保护氨基，醋酸脱保护来降低工艺成本，但Trt基团不容易脱除干净，并且原子经济性不好，也无工业化市售原料，需定制。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种合成GHK醋酸盐的方法，用于解决现有合成方法原料需定制、存在工艺受限的问题，并且，采用醋酸挂柱处理的阴离子交换树脂进行离子交换得到GHK醋酸盐，可避免产物三氟乙酸根的存在，保障了产品的安全性。本专利技术的具体方案如下：一种合成GHK醋酸盐的方法，包括以下步骤：a)通过碳二亚胺类缩合剂作用，将Boc-Gly与HOSU和/或HONB进行活化反应得到Boc-Gly活化酯；b)将所述Boc-Gly活化酯与H-His(Trt)-OH和/或H-His(Boc)-OH溶于惰性溶剂在碱性条件下反应得到Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或Boc-Gly-His(Boc)-OH；c)将所述Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或所述Boc-Gly-His(Boc)-OH在极性有机溶剂中与碳二亚胺类缩合剂和缩合辅剂反应进行活化反应，再将活化产物与溶解在碳酸盐水溶液中的H-Lys(Boc)-OH进行缩合反应，得到Boc-Gly-His(Trt)-Lys(Boc)-OH和/或Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Boc)-OH；d)将所述Boc-Gly-His(Trt)-Lys(Boc)-OH和/或所述Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Boc)-OH脱保护，再通过醋酸挂柱处理的阴离子交换树脂进行离子交换得到GHK醋酸盐。本专利技术合成GHK醋酸盐的方法采用常规市售保护氨基酸，容易获得，转产有保障，采用活化酯法形成酰胺键，全保护氨基酸自肽序C端逐个偶联至肽序N端，合成过程采用的反应均为温和反应，避免了诸多不利副反应；同时采用醋酸挂柱处理的阴离子交换树脂进行离子交换得到GHK醋酸盐，可避免产物三氟乙酸根的存在，保障了产品的安全性，适合工业放大生产，无需使用昂贵设备，可有效控制成本。优选的，步骤a)所述碳二亚胺类缩合剂选自DCC、EDC或DIC；步骤a)所述Boc-Gly、所述HOSU和/或HONB与所述碳二亚胺类缩合剂的摩尔比为1:(1～1.5):(1.1～2)。优选的，步骤a)所述活化反应的温度为-10～35℃，所述活化反应的时间为4～16h。本专利技术中，Boc-Gly活化酯可纯化分离，优选通过重结晶得到高纯度的Boc-Gly活化酯。优选的，步骤b)所述惰性溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃或乙酸乙酯；步骤b)所述碱性条件中的碱为有机季胺碱；步骤b)所述Boc-Gly活化酯、所述H-His(Trt)-OH和/或H-His(Boc)-OH与所述碱的摩尔比为1:(0.95～1.05):(2.5～3.5)。优选的，步骤b)所述反应的温度为-10～25℃，所述反应的时间为5～24h。本专利技术中，有机季胺碱优选为DIEA和/或三乙胺。步骤b)H-His(Trt)-OH的羧基端不保护，反应时，过量的碱与羧基形成盐形式降低反应活性，避免副反应发生。步骤b)反应后，优选进行酸洗/水洗再浓缩干有机溶剂后获得高纯度的Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或Boc-Gly-His(Boc)-OH。优选的，步骤c)所述极性有机溶剂为1,4-二氧六环和/或DMF；步骤c)所述碳二亚胺类缩合剂选自DCC、EDC或DIC；步骤c)所述缩合辅剂选自HOSU、HONB或HOBT；步骤c)所述碳酸盐水溶液中的碳酸盐选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸钾。优选的，步骤c)所述Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或所述Boc-Gly-His(Boc)-OH、所述缩合辅剂、所述碳二亚胺类缩合剂、所述碳酸盐和所述H-Lys(Boc)-OH的摩尔比为1:(1～1.5):(1～2):(2～3):(1.05～1.6)。优选的，步骤c)所述活化反应的温度为-10～25℃，所述活化反应的时间为5h～16h；步骤c)所述缩合反应的温度为0～25℃。本专利技术中，步骤c)缩合反应后，优选浓缩除去反应溶剂，再采用乙酸乙酯重新溶解，过滤除去不溶物，然后进行酸洗/水洗，再浓缩至加入乙酸乙酯体积的1/5，加入石油醚重结晶，获得高纯度Boc-Gly-His(Trt)-Lys(Boc)-OH。优选的，步骤d)所述脱保护具体为采用三氟乙酸和捕捉剂组合或浓盐酸与醋酸组合进行搅拌反应脱去保护。优选的，步骤d)所述离子交换之后，所述得到GHK醋酸盐之前，还包括：将离子交换产物进行浓缩和析晶。本专利技术中，步骤d)脱保护之后，优选采用不良溶剂(甲基叔丁基醚、乙醚、环己烷或石油醚)析出GHK，离心分离并洗涤后，真空干燥。阴离子交换树脂优选为强碱性阴离子交换树脂，采用醋酸挂柱处理的阴离子交换树脂进行离子交换，将GHK所带的反离子换成醋酸根离子，后续优选将目标馏分浓缩后加入乙醇、异丙醇或丙酮重结晶，收集晶体用纯化水重新溶解，冻干获得高纯度、高品质的GHK醋酸盐，保障产物的安全性。本专利技术换盐过程采用阴离子交换树脂，不使用目前多肽合成广泛采用的制备型液相色谱，很好的保证了产物GHK醋酸盐的纯度和合成成本。综上所述，本专利技术提供了一种合成GHK醋酸盐的方法，包括以下步骤：a)通过碳二亚胺类缩合剂作用，将Boc-Gly与HO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种合成GHK醋酸盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：/na)通过碳二亚胺类缩合剂作用，将Boc-Gly与HOSU和/或HONB进行活化反应得到Boc-Gly活化酯；/nb)将所述Boc-Gly活化酯与H-His(Trt)-OH和/或H-His(Boc)-OH溶于惰性溶剂在碱性条件下反应得到Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或Boc-Gly-His(Boc)-OH；/nc)将所述Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或所述Boc-Gly-His(Boc)-OH在极性有机溶剂中与碳二亚胺类缩合剂和缩合辅剂反应进行活化反应，再将活化产物与溶解在碳酸盐水溶液中的H-Lys(Boc)-OH进行缩合反应，得到Boc-Gly-His(Trt)-Lys(Boc)-OH和/或Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Boc)-OH；/nd)将所述Boc-Gly-His(Trt)-Lys(Boc)-OH和/或所述Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Boc)-OH脱保护，再通过醋酸挂柱处理的阴离子交换树脂进行离子交换得到GHK醋酸盐。/n

【技术特征摘要】
1.一种合成GHK醋酸盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)通过碳二亚胺类缩合剂作用，将Boc-Gly与HOSU和/或HONB进行活化反应得到Boc-Gly活化酯；
b)将所述Boc-Gly活化酯与H-His(Trt)-OH和/或H-His(Boc)-OH溶于惰性溶剂在碱性条件下反应得到Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或Boc-Gly-His(Boc)-OH；
c)将所述Boc-Gly-His(Trt)-OH和/或所述Boc-Gly-His(Boc)-OH在极性有机溶剂中与碳二亚胺类缩合剂和缩合辅剂反应进行活化反应，再将活化产物与溶解在碳酸盐水溶液中的H-Lys(Boc)-OH进行缩合反应，得到Boc-Gly-His(Trt)-Lys(Boc)-OH和/或Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Boc)-OH；
d)将所述Boc-Gly-His(Trt)-Lys(Boc)-OH和/或所述Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Boc)-OH脱保护，再通过醋酸挂柱处理的阴离子交换树脂进行离子交换得到GHK醋酸盐。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述碳二亚胺类缩合剂选自DCC、EDC或DIC；
步骤a)所述Boc-Gly、所述HOSU和/或HONB与所述碳二亚胺类缩合剂的摩尔比为1:(1～1.5):(1.1～2)。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述活化反应的温度为-10～35℃，所述活化反应的时间为4～16h。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)所述惰性溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃或乙酸乙酯；
步骤b)...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，陈东煌，王小燕，岳坤，姜交华，罗日朗，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，广州赛莱拉生物基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44