一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于抗癌药物技术领域，公开了一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚‑苯丁酸氮芥共前体药物及其制备方法和应用。所述共前体药物具有如式(Ⅰ)所示结构。制备方法包括以下步骤：将苯丁酸氮芥溶解于N，N‑二甲基甲酰胺中，再加入N‑乙基‑N'‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，然后在室温下将溶液搅拌10min；然后加入和厚朴酚，并在室温下将反应混合物搅拌过夜；将反应液加入乙酸乙酯，然后用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经色谱法纯化得到和厚朴酚‑苯丁酸氮芥共前体药物。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物及其制备方法和应用
本专利技术属于抗癌药物
，特别涉及一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物及其制备方法和应用。
技术介绍
苯丁酸氮芥(Chlorambucil，CBL)是一种DNA烷基化试剂，属于氮芥家族，是一种用于治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)、淋巴瘤等多种实体肿瘤的化疗药物。N，N-双(2-氯乙基)-胺基部分可与蛋白质、核酸和磷脂共价反应，诱导细胞存活的抑制功能，而CBL与DNA的烷基化反应是细胞毒性的主要形式。CBL修饰DNA交联的形式包括单功能碱基对错配和双功能双链DNA断裂，导致DNA持续损伤。由于CBL与许多生物大分子(核酸、蛋白质、磷脂)具有很高的反应性，导致临床治疗效果差，半衰期短，治疗反应所需的CBL剂量较高。然而，剂量增加会增加严重副作用的风险。而且，这些不稳定性和非特异性反应性的复合结果将降低CBL的生物作用率。目前，虽然已经成功地开发出一些新的药物用于临床，但事实上CBL仍然是老年CLL和一些免疫抑制癌症患者的一线治疗方法。因此，开发新的抗肿瘤活性高、毒性稳定的CBL衍生物对正常健康组织具有重要意义。和厚朴酚(HN，C18H18O2)是从厚朴中分离得到的一种膳食双酚类天然产物。近十年来，大量研究表明，HN通过抗癌、促凋亡、抗炎、抗氧化、抗血管生成等活性，在体内外对恶性肿瘤(如骨髓瘤、白血病)具有广泛的抑制作用，且无明显的亚毒性。此外，HN能有效地抑制多种途径和靶点对癌细胞产生抗增殖作用，如NF-kB、EGFR、STAT3、环氧合酶和其他细胞凋亡因子等，同时，HN还可以治疗是众所周知的耐药肿瘤。HN被认为是一种与普通化疗药物阿霉素(DOX)相当的抗肿瘤药物。非常重要的是，HN可以通过STAT3靶向癌细胞线粒体，阻止肿瘤的进展和转移，这表明HN可能是肿瘤治疗的新的有效的化学预防或治疗实体。但是目前关于HN的临床研究尚不多见。
技术实现思路
为了克服现有技术中存在的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物(HN-CBL)。本专利技术的又一目的在于提供一种上述具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物的制备方法。本专利技术的再一目的在于提供上述具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物，所述共前体药物具有如下式(Ⅰ)所示结构：上述具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物的制备方法，包括以下操作步骤：将苯丁酸氮芥溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，再加入N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，然后在室温下将溶液搅拌10min；然后加入和厚朴酚，并在室温下将反应混合物搅拌过夜；将反应液加入乙酸乙酯，然后用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经色谱法纯化得到和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物。上述具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物在制备抗淋巴细胞白血病药物中的用途。本专利技术的原理：基于苯丁酸氮芥(CBL)和和厚朴酚(HN)的分子机理背景，本专利技术人认为从已获批准的治疗药物或安全的膳食天然产物中开发新的抗肿瘤试剂，而不是其它未知化合物，将促进其在癌症治疗中的转化和应用。本专利技术设计并合成了和厚朴酚-苯丁酸氮芥(HN-CBL)酯共前体药物，通过碳酸盐酯键结合，HN-CBL的释放反应机制是与HN和CBL偶联的双碳酸酯，在较高的细胞内酯酶催化下(例如癌症)可以简单地水解细胞溶解，并且对肿瘤酸性微环境特别敏感(pH＝5.5vspH＝7.4)。用体外MTT细胞毒性法评价HN-CBL对一系列癌细胞和正常细胞系的抑制作用时，通过直接增强线粒体活性，HN-CBL比其母体药物HN和CBL具有更好的治疗效果。HN-CBL可选择性增强对淋巴细胞白血病(LL)细胞的杀伤作用，治疗浓度下未观察到红细胞溶血反应。此外，HN-CBL可显著促进LLs细胞凋亡，但对正常PBMCs无损伤。计算对接和western-blotting研究表明，HN-CBL也可以在某些疏水残基上与STAT3蛋白结合并下调STAT3蛋白的磷酸化水平。总之HN-CBL可显著延缓白血病细胞的体内生长，且无明显的生理毒性。这些结果表明，与游离药物相比，HN-CBL可能提供一种新的选择性治疗LLs的前药，副作用小。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：HN-CBL能显著抑制人白血病细胞株CCRF-CEM、Jurkat、U937、MV4-11和K562的增殖能力；此外，HN-CBL还能选择性地抑制淋巴细胞白血病细胞的存活，增强白血病细胞的线粒体活性，诱导LLs细胞凋亡；分子对接和western-blot研究表明，HN-CBL还可以在某些疏水残基上与STAT3蛋白结合，下调STAT3蛋白的磷酸化水平；HN-CBL可显著延缓白血病细胞的体内生长，且无明显的生理毒性。因此，HN-CBL可能为淋巴细胞白血病的靶向治疗提供了一种新的、有效的靶向治疗方法。附图说明图1是HN-CBL在肿瘤细胞中的体外靶向释放药代动力学图，其中A为HN-CBL在不同pH值的正常等渗缓冲液PBS中水解率，B为HN-CBL在不同生物介质中的水解率。图2是HN-CBL的抗增殖特性和原发性淋巴细胞白血病细胞的治疗结果。图3是HN-CBL对mt′超氧化物水平及其膜电位图，其中A为超氧物浓度增加图示，B为mt'膜电位降低图示。图4是HN-CBL、HN和CBL诱导淋巴细胞白血病细胞凋亡对比图。图5是HN、CBL和HN-CBL体内抑制肿瘤生长的对比图。图6是HN、CBL和HN-CBL体内抑制肿瘤生长的病理对照图。图7是HN-CBL的溶血实验图。图8是流式细胞仪测定分析HN-CBL对健康献血者的外周血淋巴细胞和淋巴细胞白血病患者的淋巴细胞的作用结果图。图9是经过不同处理的老鼠的主要器官病理切片图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。以下实施例中使用到的试剂和仪器：苯丁酸氮芥(CBL，HPLC纯度>95％)、和厚朴酚(HN，HPLC纯度>95％)、N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、乙酸乙酯和硫酸钠购自中国上海能源化工有限公司。色谱纯度乙腈(ACN)来自赛默飞世尔。MTT(98％)来自MedChemExpress(中国上海)。AnnexinV-FITC的细胞凋亡检测试剂盒和其他细胞实验试剂来自美国赛默飞世尔(GrandIsland)的LifeGibcoTechnologies公司。p-STAT3(#9134S)、STAT3(9139S)和肌动蛋白的抗体购自CellSi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物，其特征在于：所述共前体药物具有如下式(Ⅰ)所示结构：/n

【技术特征摘要】
1.一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物，其特征在于：所述共前体药物具有如下式(Ⅰ)所示结构：





2.根据权利要求1所述的一种具有抗淋巴细胞白血病功效的和厚朴酚-苯丁酸氮芥共前体药物的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：将苯丁酸氮芥溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，再加入N-乙基-N'-(3-二甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏黎，汪小根，张雷红，沈小钟，张树潘，李绍林，
申请(专利权)人：广东食品药品职业学院，
类型：发明
国别省市：广东;44