一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法。本发明专利技术以单糖及其衍生物为原料，利用生物酶催化合成糖核苷酸及其衍生物，未反应完的原料和杂质经钡离子选择性沉淀，离心除去沉淀物，最后得到高纯度的糖核苷酸及其衍生物。本发明专利技术公开的生物酶来自原核生物，具有蛋白表达量高、底物适应性宽、催化效率高等优点，并且生物酶催化合成具有高效性、高区域选择性等优势。本发明专利技术还优化了生物酶的反应浓度，将价廉、易得的单糖及其衍生物高效地合成昂贵的糖核苷酸及其衍生物。本发明专利技术还使用离子沉淀法对产物进行纯化，该纯化步骤操作简单易于放大，并且能够降低成本，提高产物收率。

【技术实现步骤摘要】
一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法
本专利技术涉及生物合成与纯化
，具体涉及一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法。
技术介绍
糖是细胞生命活动所必需的三种生物大分子之一。糖在生命活动过程中发挥着极为重要的作用，是生命活动的能量来源，也是生物体的结构组分。糖能够以游离糖链及与非糖物质，如蛋白质、脂质等形成糖缀合物等形式存在，在正常生命活动如细胞间相互作用、炎症反应、信号转导、受精和发育等诸多过程中发挥着关键作用；此外，糖及糖缀合物也参与了重大疾病的发生发展过程。从糖科学的新视角探索糖链在疾病发生、发展和转移过程中的功能及分子机制是科学研究的热点。化学结构明确糖类化合物的高效获得是制约整个糖科学发展的瓶颈之一。糖基转移酶催化的寡糖合成具有效率高、选择性好、无需对糖底物进行保护等优点，是糖类化合物合成的重要手段之一，但其合成所必需的糖核苷酸供体难于制备和价格昂贵，在一定程度上限制了其在寡糖合成中的应用。糖核苷酸(sugarnucleotide)在结构上是单糖的还原端与核苷二磷酸或者核苷一磷酸的末端磷酸基团连接而成的化合物，是单糖的活化形式。糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：/n步骤(1)利用生物酶催化单糖及其衍生物合成糖核苷酸及其衍生物粗产物；/n步骤(2)利用离子沉淀法纯化得到糖核苷酸及其衍生物；/n所述糖核苷酸及其衍生物的结构为通式Ⅰ：/n

【技术特征摘要】
1.一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：
步骤(1)利用生物酶催化单糖及其衍生物合成糖核苷酸及其衍生物粗产物；
步骤(2)利用离子沉淀法纯化得到糖核苷酸及其衍生物；
所述糖核苷酸及其衍生物的结构为通式Ⅰ：



糖基选自单糖及其衍生物脱去一分子羟基后剩余的基团；
含氮碱基选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤或尿嘧啶；
n选自1、2；
优选地，所述离子沉淀法选自钡离子选择性沉淀法。


2.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括：将步骤(1)得到的含有糖核苷酸及其衍生物粗产物的混合液加入有机溶剂，蛋白变性沉淀，去除蛋白，然后加入盐溶液，离心，收集上清液，再使用离子交换树脂介质吸附去除杂质，收集上清液，得到糖核苷酸及其衍生物。


3.根据权利要求2所述的一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述盐溶液为含有金属离子的溶液；优选地，所述金属离子的溶液为含有钡离子的溶液；更优选地，所述钡离子溶液为氯化钡溶液；所述钡离子能够与核苷三磷酸、核苷二磷酸形成络合物沉淀。


4.根据权利要求2所述的一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的有机溶剂选自：甲醇、乙醇、丙酮；优选地，有机溶剂为乙醇；更优选地，有机溶剂为冰乙醇；将冰乙醇加入混合液中，4℃下静止10-60min，蛋白变性沉淀，去除蛋白。


5.根据权利要求2所述的一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中混合液在4-10℃下离心，收集上清液。


6.根据权利要求2所述的一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中离子交换树脂介质为强酸型阳离子交换树脂介质。


7.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特征在于，
糖基选自






含氮碱基选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶。


8.根据权利要求1、7任一项所述的一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：房俊强，李爽，王鹏，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37