真菌纤维素酶的变体制造技术

本发明专利技术涉及具有纤维素酶活性的多肽，尤其涉及衍生自20K‑纤维素酶的变体。本发明专利技术公开了对纤维素酶的性质并因此对其稳定性和/或性能重要的许多氨基酸残基位置。与亲本纤维素酶相比，该新型变体具有改善的稳定性。特别地，即使在长期实验中，在蛋白酶存在下，在几种洗涤剂组合物中，该新型变体在抗灰应用中具有良好的性能和极好的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】真菌纤维素酶的变体
本专利技术涉及具有纤维素酶活性的多肽，特别地，本专利技术涉及水解纤维素的纤维素分解酶的变体。与亲本纤维素酶相比，该酶经过了改造，具有改善的稳定性。本申请提供了新颖的多肽变体及其应用。
技术介绍
纤维素酶或纤维素分解酶是参与纤维素水解的酶。在纺织工业中，纤维素酶用于牛仔布的精加工，以在生物石磨过程中在牛仔布中形成时髦的石磨洗涤外观，还用于例如清洁绒毛，并防止棉质衣物表面上形成球状物。在洗涤剂工业中，纤维素酶用于增亮颜色，并防止衣物变灰、起球，以改善清洁效果。纤维素酶还用于食品工业和动物饲料生产中，在生物质水解以及纸浆和造纸工业中具有巨大的潜力，例如，在脱墨以从纤维表面释放油墨和改善纸浆排水方面具有巨大的潜力。衍生自热白丝菌(Melanocarpusalbomyces)的20K-纤维素酶已在纺织和洗涤剂行业中广泛使用了多年，已成为数项专利的主题(例如，EP0857216B1和EP1874927B1)。该纤维素酶已被证实具有良好的性能，特别是在抗灰应用中。原生20K-纤维素酶分子是在90年代克隆的。当前对用于衣物的不同洗涤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纤维素酶变体多肽或其活性片段，其特征在于，所述变体多肽具有纤维素酶活性，并且包含与SEQ ID NO：1的残基22-235具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含在一个或多个位置处的取代或缺失，所述一个或多个位置选自：22、122、2、33、35、39、44、48、54、75、82、92、99、108、174、175、177、194、205、206、207、208、209、210、211、212、213和214，其中所述变体多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO：3的成熟氨基酸序列对应来编号。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171221 EP 17209301.5;20171221 US 15/850,7121.一种纤维素酶变体多肽或其活性片段，其特征在于，所述变体多肽具有纤维素酶活性，并且包含与SEQIDNO：1的残基22-235具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含在一个或多个位置处的取代或缺失，所述一个或多个位置选自：22、122、2、33、35、39、44、48、54、75、82、92、99、108、174、175、177、194、205、206、207、208、209、210、211、212、213和214，其中所述变体多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQIDNO：3的成熟氨基酸序列对应来编号。


2.根据权利要求1所述的纤维素酶变体多肽，其特征在于，所述多肽包含以下一个或多个取代或缺失：N2W、N2R、G22A、G22S、G22V、A33R、F35W、F35M、H39P、H39S、V44R、V44Q、V44W、V44L、E48D、S54M、S54A、S54T、S54L、S54VA75H、A75S、A75R、E82S、E82R、E82W、T92I、A99Q、T108I、N122A、N122L、N122S、N122G、N122T、N122V、N122I、Q174R、N175D、D177Q、D177E、A194Q、G205T、F206H、A207R、A207S、del(A207-A214)、del(V208-A214)、del(F209-A214)、del(K210-A214)、del(A211-A214)、del(P212-A214)和del(S213-A214)。


3.根据权利要求1或2所述的纤维素酶变体多肽，其特征在于，所述变体包含在位置22和/或122处的取代，其中在位置22G处取代为A、S或V，在位置122N处取代为A、S、G、T、V或I。


4.根据权利要求3所述的纤维素酶变体多肽，其特征在于，所述变体包含在位置22和122处的取代和至少一个另外的取代或缺失。


5.根据权利要求4所述的纤维素酶变体多肽，其特征在于，所述另外的取代选自以下位置的取代：2、35、44、54、75、82、108、174、177、205、206或207。


6.根据权利要求4所述的纤维素酶变体多肽，其特征在于，所述另外的缺失选自以下：del(A207-A214)、del(V208-A214)、del(F209-A214)、del(K210-A214)、del(A211-A214)、del(P212-A214)或del(S213-A214)。


7.一种分离的核酸分子，包含对权利要求1至6中任一项所述的纤维素酶变体多肽进行编码的核苷酸序列。


8.根据权利要求7所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含SEQIDNO：2所定义的核苷酸序列。


9.一种重组表达载体，包含对权利要求1至6中任一项所述的纤维素酶变体多肽进行编码的核苷酸序列，所述核苷酸序列与能够指导编码所述纤维素酶变体的基因在合适的宿主中表达的调控序列可操作地连接。


10.一种宿主细胞，包含权利要求9所述的重组表达载体。


11.根据权利要求10所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主选自：
真菌细胞，
丝状真菌细胞，其选自子囊菌门，盘菌亚门；优选地，选自下组：粪壳菌纲、肉座菌亚纲、肉座菌目、小囊菌目、曲霉属、金孢属(Chrysosporium)、毁丝霉属和腐质霉属；
更优选地选自下组：肉座菌科、从赤壳科、麦角菌科、小囊菌科、木霉属(无性型肉座菌属)、镰孢霉属、赤霉菌属、丛赤壳属、葡萄状穗霉属、麦角菌属、绿僵菌属、稻绿核菌属(Villosiclava)、蛇形虫草属、头孢霉属、赛多孢子菌属；
更优选地选自下组：里氏木霉(红褐肉座菌)、柠檬绿木霉(T·citrinoviridae)、长枝木霉(T·longibrachiatum)、绿木霉(T·virens)、哈茨木霉(T·harzianum)、棘孢木霉(T·asperellum)、深绿木霉(T·atroviridae)、近里氏木霉(T.parareesei)、尖镰孢霉、禾本镰孢霉、假禾谷镰孢霉、镶片镰孢霉(F.venenatum)、藤仓赤霉(Gibb...

【专利技术属性】
技术研发人员：卡里·云图宁，莉娜·瓦尔塔卡里，苏珊娜·梅基宁，玛丽卡·阿拉普拉内恩，昂德里克·赫尔穆特，彭蒂·奥亚帕洛，马克·门尼肯，乌利齐·施瓦内贝格，大卫·舍恩鲍尔，泰尔希·普拉宁，
申请(专利权)人：生化酶股份有限公司，
类型：发明
国别省市：芬兰;FI