一种消化核酸污染的试剂及其制备方法应用技术

本发明专利技术提供了一种消化核酸污染的试剂及其制备方法和应用。本发明专利技术的消化核酸污染的试剂包括A液和B液，所述A液是质量含量为0.2‑0.4％的过氧化氢溶液，所述B液是金属离子和缓冲剂的混合溶液，所述混合溶液中金属离子的浓度为0.5‑1.5mM，缓冲剂的浓度为3‑5mM，所述混合溶液的pH值为7.0‑8.0。本发明专利技术的试剂能够灵活地处理实验室中的试剂、缓冲液和设备中的各种核酸污染，处理时间短，消除核酸污染的效果好，使用无毒，应用范围广泛。

【技术实现步骤摘要】
一种消化核酸污染的试剂及其制备方法应用
本专利技术涉及一种试剂，尤其是涉及一种消化核酸污染的试剂及其制备方法和应用。
技术介绍
近年来，核酸检测技术在我国得到逐步的推广和应用，其具有灵敏度高等特点，同时实验室也容易导致污染。目前，实验室消除核酸污染的常见途径包括高压蒸汽灭菌、紫外线照射、核酸酶处理等。使用高温高压蒸汽灭菌可以使试剂盒缓冲液中的微生物失活、核酸降解来去除污染；然而该方式只能处理试剂和缓冲液，对实验室环境和实验设备中残留的核酸污染无法处理，且某些试剂不能采用高温高压蒸汽灭菌的方式来处理。紫外线照射是实验室常见的操作，其可以大范围照射实验室空间，包括实验室中的设备，紫外线照射可以杀死微生物，同时使微生物的核酸断裂或形成嘧啶二聚体。然而，紫外线照射存在很多的死角和阻隔，比如对放置于柜子或瓶子中的试剂溶液等情况无能为力，此外紫外线照射产生的臭氧对人体有毒害作用。核酸酶处理核酸污染也是较为常见的一种方式，但通常仅限于处理缓冲液中的核酸污染。因此，现有的上述不同方法均存在使用上的限制因素或不利之处。鉴于此，特提供本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种消化核酸污染的试剂及其制备方法和应用，该试剂能够灵活地处理实验室中的试剂、缓冲液和设备中的各种核酸污染，处理时间短，消除核酸污染的效果好，使用无毒，应用范围广泛。本专利技术提供一种消化核酸污染的试剂，包括A液和B液，所述A液是质量含量为0.2-0.4％的过氧化氢溶液，所述B液是金属离子和缓冲剂的混合溶液，所述混合溶液中金属离子的浓度为0.5-1.5mM，缓冲剂的浓度为3-5mM，所述混合溶液的pH值为7.0-8.0。在本专利技术中，通过过氧化氢与金属离子反应能够轻松得到活性氧自由基，其可能包括过氧化物(O22-)、超氧化物(O2-)以及羟自由基(OH)。通过过氧化物和金属离子产生的活性氧自由基能够有效地、快速地消除核酸残余；同时，在消化完核酸后可以通过加热的方式降解H2O2或者加入螯合剂来去除金属离子，还可以使用离子交换树脂进行去除。上述方式可以有效应用于实验室设备去污染，也可以用于处理分离介质(比如磁珠)。本专利技术通过反应产生活性氧自由基来氧化和降解试剂、缓冲液、样品和实验室设备的DNA污染，反应涉及的试剂并不昂贵，易于使用，而且在消除DNA污染后易于从试剂、缓冲液等中取出。在本专利技术中，所述金属离子可以选自铁、锰、铜、镍、钴和锌离子中的至少一种，更优选为铜离子；此外，金属离子的氧化态可以是+1、+2、+3、+4或者+5价，其中+2和+3价金属离子能够更加有效地参与反应产生活性氧自由基，其他的氧化态需要通过与其他物质进行氧化或还原反应得到。因为多种金属离子可能参与到这个降解途径，因此DNA操作前需要通过EDTA等来螯合金属离子防止降解。由于反应生成的活性氧自由基的具体成分会随着时间和pH值变化，为了保证核酸消除效果，本专利技术还添加了缓冲剂并将pH值控制为7.0-8.0，优选为7.5。其中，所述缓冲剂可以选自Tris、MOPS、HEPES、TAPSO、Tricine和DIPSO中的至少一种，更优选为Tris。在一实施方式中，所述B液可以是CuSO4和Tris的混合溶液；优选地，所述混合溶液中CuSO4的浓度为1mM，Tris的浓度为4mM，且所述A液是质量含量为0.3％的过氧化氢溶液。本专利技术还提供上述消化核酸污染的试剂的制备方法，包括：A)采用超纯水对过氧化氢母液进行稀释，制得所述A液；B)将金属盐和缓冲剂溶于超纯水中，调节pH值，制得所述B液。本领域技术人员能够根据上述试剂的组成确定各成分的用量，以容易地制得具有上述特定组成的消化核酸污染的试剂。本专利技术还提供上述消化核酸污染的试剂在消化核酸污染中的应用。本专利技术还提供一种消化核酸污染的方法，采用上述消化核酸污染的试剂进行，所述方法包括：先向待消化核酸污染的物体上喷洒所述A液，随后立即喷洒所述B液，静置后润洗、干燥。其中，所述静置的时间可以为5-15min；较短的静置时间(例如5min)能够实现消化核酸污染的目的，而更长的静置时间(例如15min)还可以实现除菌的目的。本专利技术对所述A液和B液的喷洒量不作严格限制；具体地，所述A液的喷洒量例如可以为15-25mL/m2，优选为20mL/m2；所述B液的喷洒量例如可以为15-25mL/m2，优选为20mL/m2。此外，本专利技术对待消化核酸污染的物体不作严格限制，可以是相关试验过程中所接触到的各种物体，例如工作台、仪器、塑料容器、玻璃容器、PCR管、移液器等。本专利技术还提供另一种消化核酸污染的方法，采用上述消化核酸污染的试剂进行，所述方法包括：先向待消化核酸污染的液体中加入所述A液和B液。进一步地，在加入所述A液和B液时，可以控制A液与B液的体积比为1：(0.8-1.2)，优选为1：1。本专利技术对所述A液和B液的喷洒量不作严格限制；具体地，所述A液的加入量可以为15-25mL/m2，优选为20mL/m2；所述B液的加入量可以为15-25mL/m2，优选为20mL/m2。此外，本专利技术对待消化核酸污染的物体不作严格限制，可以是相关试验过程中所接触到的各种试剂、溶液等。本专利技术的实施，至少具有以下优势：1、本专利技术的试剂能够灵活地处理实验室中的试剂、缓冲液和设备中的各种核酸污染，处理时间短，使用无毒且不受限制，消除核酸污染的效果好，应用范围广泛；2、本专利技术的方法通过反应产生活性氧自由基来氧化和降解试剂、缓冲液、样品和实验室设备的DNA污染，反应涉及的试剂并不昂贵，易于使用，而且在消除DNA污染后易于从试剂、缓冲液等中取出。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例4的试验结果图；图2为本专利技术实施例5的试验结果图；图3为本专利技术实施例6的试验结果图。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种消化核酸污染的试剂，其特征在于，包括A液和B液，所述A液是质量含量为0.2-0.4％的过氧化氢溶液，所述B液是金属离子和缓冲剂的混合溶液，所述混合溶液中金属离子的浓度为0.5-1.5mM，缓冲剂的浓度为3-5mM，所述混合溶液的pH值为7.0-8.0；/n优选地，所述金属离子选自铁、锰、铜、镍、钴和锌离子中的至少一种，更优选为铜离子；/n优选地，所述缓冲剂选自Tris、MOPS、HEPES、TAPSO、Tricine和DIPSO中的至少一种，更优选为Tris。/n

【技术特征摘要】
1.一种消化核酸污染的试剂，其特征在于，包括A液和B液，所述A液是质量含量为0.2-0.4％的过氧化氢溶液，所述B液是金属离子和缓冲剂的混合溶液，所述混合溶液中金属离子的浓度为0.5-1.5mM，缓冲剂的浓度为3-5mM，所述混合溶液的pH值为7.0-8.0；
优选地，所述金属离子选自铁、锰、铜、镍、钴和锌离子中的至少一种，更优选为铜离子；
优选地，所述缓冲剂选自Tris、MOPS、HEPES、TAPSO、Tricine和DIPSO中的至少一种，更优选为Tris。


2.根据权利要求1所述的消化核酸污染的试剂，其特征在于，所述B液是CuSO4和Tris的混合溶液；
优选地，所述混合溶液中CuSO4的浓度为1mM，Tris的浓度为4mM；
优选地，所述A液是质量含量为0.3％的过氧化氢溶液；
优选地，所述混合溶液的pH值为7.5。


3.权利要求1或2所述的消化核酸污染的试剂的制备方法，其特征在于，包括：
A)采用超纯水对过氧化氢母液进行稀释，制得所述A液；
B)将金属盐和缓冲剂溶于超纯水中，调节pH值，制得所述B液。


4.权利要求1或2所述的消化核酸污染的试剂在消化核酸污染中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：卢晋华，曹文刚，
申请(专利权)人：河北迪纳兴科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13