【技术实现步骤摘要】
本申请涉及寡核苷酸的纯化，尤其涉及一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂及其制备方法、应用。
技术介绍
1、寡核苷酸(oligonucleotide)一般是指一定数目的核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段。寡核苷酸可由仪器自动合成，它可作为dna合成的引物(primer)、基因探针(probe)等，在现代分子生物学研究中具有广泛的用途。寡核苷酸合成过程中会不可避免的引入杂质，包含失败的序列、残留的合成原料、盐类等杂质，这些杂质会影响后续的反应，因此要对寡核苷酸产物进行纯化。
2、寡核苷酸的纯化方法通常有page(polyacrylamide gel electrophoresis)纯化、hplc(high performance liquid chromatography)纯化、opc(oligonucleotidepurification car tridge)纯化等。
3、page纯化是根据合成产物长度和构象的不同，来区分合成的全长序列与失败序列，基于聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法进行分离纯化。虽然page纯化方式效率较高，但由于纯化后还需进行进一步处理，继而将导致纯化产率的下降，这也是page纯化方式的一个弊端，并且page纯化过程步骤繁琐，耗费时间人力较多，产物损耗较多，这样对于大量的寡核苷酸纯化势必产生一定的影响。
4、hplc纯化是基于反向高效液相色谱的原理，对寡核苷酸产物进行纯化的方法。该方法纯化后的产物纯度和灵敏度较高，可有效去除大部分的短片段，但是该方法纯化时间较长，而且较为昂
5、opc纯化是使用一种叫cartridge的反相层析柱，利用寡核苷酸和opc柱内树脂间的亲和作用，进行分离纯化。该纯化方式的纯化速度较hplc纯化和page纯化方法更高，而且成本较低，但是其专一性吸附能力有限，不免有小片段的带入。
6、因此，若能解决现有的opc纯化等纯化方式存在的上述缺陷，将大大提高寡核苷酸的纯化效果。
技术实现思路
1、本申请提供一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂及其制备方法、应用，以解决现有寡核苷酸的纯化方法对寡核苷酸的专一性吸附能力较弱，纯化效果欠佳等问题。
2、本申请实施例提供一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，所述多孔树脂的结构式如下：
3、
4、其中，r1为腈基，r2为苯乙基，r3为二乙基苯。
5、根据本申请实施例提供的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，该多孔树脂具有的腈基可以与寡核苷酸的特定基团配合，使得多孔树脂可以对寡核苷酸进行特异性吸附。由此，将本申请实施例的多孔树脂用于纯化寡核苷酸时可以提高对寡核苷酸的专一性吸附能力，有利于提高纯化效果。
6、在本申请的一些实施例中，所述多孔树脂的内部孔径在范围内。
7、在本申请的一些实施例中，所述多孔树脂的比表面积在421m2/g-450m2/g范围内。
8、在本申请的一些实施例中，所述多孔树脂的粒径在100-200目范围内。
9、本申请另一实施例提供一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，包括将单体、致孔剂、引发剂以及稳定剂进行悬浮聚合，再经过致孔后得到所述用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，其中，所述单体包括二乙烯基苯、苯乙烯以及腈基化合物。
10、本申请实施例提供的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，通过将单体、致孔剂、引发剂以及稳定剂进行聚合得到对应的多孔树脂，使得所得多孔树脂含有特定的腈基基团。从而，利用所得多孔树脂含有的特定腈基基团可以对寡核苷酸进行特异性吸附，则将该多孔树脂用于纯化寡核苷酸时可以提高对寡核苷酸的专一性吸附能力，有利于提高纯化效果。
11、在本申请的一些实施例中，所述腈基化合物包括丙烯腈、甲基丙烯腈、反丁烯二腈和1,4-二氰基-2-丁烯中的一种或多种。
12、在本申请的一些实施例中，所述二乙烯基苯、所述苯乙烯以及所述腈基化合物的重量份数之比为(65-85)：(10-25)：(8-25)。
13、在本申请的一些实施例中，所述二乙烯基苯、所述苯乙烯以及所述腈基化合物的重量份数之比为(65-85)：(15-20)：(8-20)。
14、在本申请的一些实施例中，所述致孔剂包括甲苯、正庚烷、正己烷、异辛烷、十一醇和异辛醇中的一种或多种。
15、在本申请的一些实施例中，所述引发剂包括过氧化二苯甲酰、过硫酸钾、偶氮二异丁腈中的一种或多种。
16、在本申请的一些实施例中，所述稳定剂包括聚乙烯醇、亚甲基蓝、明胶、羟甲基纤维素中的一种或多种。
17、在本申请的一些实施例中，所述制备方法包括：将稳定剂溶于溶剂中形成前溶液，向所述前溶液中加入单体、致孔剂和引发剂，搅拌混合后升温进行聚合反应，所述聚合反应结束后除去致孔剂得到致孔后的所述用于纯化寡核苷酸的多孔树脂。
18、在本申请的一些实施例中，所述制备方法满足以下(1)-(6)中的至少一个条件：
19、(1)所述溶剂包括水；
20、(2)所述搅拌过程的搅拌转速保持不变；
21、(3)所述搅拌转速为400转/min；
22、(4)所述搅拌时间为1-2h；
23、(5)所述聚合反应的温度为75-90℃；
24、(6)所述聚合反应的时间为6-8h。
25、在本申请的一些实施例中，所述除去致孔剂的操作包括：待所述聚合反应结束后过滤得到滤渣，将滤渣经水洗后与丙酮混合反应除去致孔剂，所述混合反应结束后过滤并用酒精洗涤、烘干，经筛分得到所述用于纯化寡核苷酸的多孔树脂。
26、在本申请的一些实施例中，所述混合反应的温度为60-70℃。
27、本申请再一实施例提供根据上述任一项所述的多孔树脂在纯化寡核苷酸中的应用。
28、本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。
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1.一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，其特征在于，所述多孔树脂的结构式如下：
2.根据权利要求1所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，其特征在于，
3.一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，包括将单体、致孔剂、引发剂以及稳定剂进行悬浮聚合，再经过致孔后得到所述用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，其中，所述单体包括二乙烯基苯、苯乙烯以及腈基化合物。
4.根据权利要求3所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求4所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求3所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求3-6中任一项所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
8.根据权利要求7所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足以下(1)-(6)中的至少一个条件：
9.根据权利要求7所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，所述除去致
10.根据权利要求1-9中任一项所述的多孔树脂在纯化寡核苷酸中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，其特征在于，所述多孔树脂的结构式如下：
2.根据权利要求1所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，其特征在于，
3.一种用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，包括将单体、致孔剂、引发剂以及稳定剂进行悬浮聚合，再经过致孔后得到所述用于纯化寡核苷酸的多孔树脂，其中，所述单体包括二乙烯基苯、苯乙烯以及腈基化合物。
4.根据权利要求3所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求4所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求3所述的用于纯化寡核苷酸的多孔树脂的制备方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢晋华，张阳，
申请(专利权)人：河北迪纳兴科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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