一种检测酶免微孔板质量的试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及体外诊断领域，特别涉及一种检测酶免微孔板质量的试剂盒及方法。该试剂盒包括包被液、封闭液、低值质控品Q1、高值质控品Q2、底物液和显色剂；封闭液的配方为：NaH

【技术实现步骤摘要】
一种检测酶免微孔板质量的试剂盒及方法
本专利技术涉及体外诊断领域，特别涉及一种检测酶免微孔板质量的试剂盒及方法。
技术介绍
酶联免疫法的原理：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①与固相载体结合的抗原或抗体；②酶标记的抗原或抗体；③酶作用的底物(显色剂)。抗原、抗体和其它生物分子通过多种机制吸附至固相载体表面，这包括通过疏水键、流水/离子键的被动吸附，通过引入其它活性基团如氨基和碳基的共价结合，以及通过表面改性后的亲水键结合。固相载体性能的好坏直接影响酶联免疫反应结果，在整个免疫反应中起着至关重要的作用。通过合适的检验方法选择合格的酶免微孔板作为固相载体显得尤为重要。酶免微孔板是体外诊断领域不可或缺的原料，作为载体的酶免微孔板表面对抗原、抗体或抗原抗体复合物的吸附起着重要作用，抗原、抗体和其它生物分子通过多种机制吸附至载体表面(包括通过疏水键、流水/离子键的被动吸附，通过引入其它活性基团如氨基和碳基的共价结合，以及通过表面改性后的亲水键结合)，再与被检样本中的抗体、抗原等结合形成复合物，通过显色反应检测出被测样本中抗体、抗原的阴阳性，由此可见，酶免微孔板在整个免疫反应中起着至关重要的作用。目前常用的酶免微孔板检验方法是在各项目上检验，方法相对单一，对于其他项目不具有适用性，检验效率较低。如乙肝表面抗体用酶免微孔板的检验方法如下：将酶免微孔板包被成乙肝表面抗体包被板，依次加入精密性参考品50μL，乙肝表面抗体酶结合物50μL，在37℃温育30min，取出后使用洗涤液冲洗6次，加入底物液、显色剂各50μL后与37℃温育10min，然后加入终止液50μL，使用酶标仪进行读数，对检测的信号值进行分析，计算平均值M和方差SD，变异系数CV＝SD/M×100％。若信号值在2.0±0.2范围，且板内板间CV≤8％，批间CV＜15％，该批酶免微孔板判定为合格，否则，判定为不合格。该方式检验效率较低，不具有通用性，且只评价一种信号值2.0左右的内控。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种检测酶免微孔板质量的试剂盒及方法。该试剂盒及方法能对大部分酶免微孔板(包括中、高结合力酶免微孔板)进行质量检验，且该检验方法操作简单，结果准确，适用范围广，可节省大量人力资源。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种检测酶免微孔板质量的试剂盒，包括包被液、封闭液、低值质控品Q1、高值质控品Q2、底物液和显色剂；包被液由CB缓冲液和IgG抗体组成；CB缓冲液的配方为：Na2CO31.5～1.7g、NaHCO32.8～3.0g、水补足至1L；封闭液的配方为：NaH2PO40.5～0.7g、Na2HPO45～7g、NaCl8～10g、酪蛋白8～12g、KCl1～3g、蔗糖45～55g、ADP0.8～1.2g、Tween-200.8～1.2mL、防腐剂0.8～1.2mL、水补足至1L；低值质控品Q1由IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液组成，以g/mL/mL计，低值质控品Q1中IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液的比例为(0.8～1.2)：(800～1200)：(4000～6000)；高值质控品Q2由IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液组成，以g/mL/mL计，高值质控品Q2中IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液的比例为(1.8～2.2)：(800～1200)：(4000～6000)；Casein酶稀释液的配方为：NaH2PO40.5～0.7g、Na2HPO45～7g、NaCl8～10g、牛血清白蛋白2.5～3.5g、酪蛋白8～12g、ADP0.8～1.2g、防腐剂0.8～1.2mL、水补足至1L；pH值为7.4±0.05；X溶液的配方为：pH值为7.4±0.05的Tris-HCl缓冲液800～900g、ADP0.8～1.2g、酪蛋白1～3g、牛血清白蛋白2～4g、小牛血清180～220mL、防腐剂0.8～1.2mL、Trition-1000.8～1.2mL、抑菌剂0.8～1.2g、色素0.08～0.12g。作为优选，CB缓冲液的配方为：Na2CO31.59g、NaHCO32.93g、水补足至1L。作为优选，NaH2PO4为NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4为Na2HPO4·12H2O。作为优选，封闭液的配方为：NaH2PO4·2H2O0.593g、Na2HPO4·2H2O5.8g、NaCl9g、酪蛋白10g、KCl1.8g、蔗糖50g、ADP1.0g、Tween-201mL、防腐剂1mL、水补足至1L。作为优选，以g/mL/mL计，低值质控品Q1中IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液的比例为1.0：1000：5000。作为优选，以g/mL/mL计，高值质控品Q2中IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液的比例为2.0：1000：5000。作为优选，Casein酶稀释液的配方为：NaH2PO40.59g、Na2HPO45.8g、NaCl9g、牛血清白蛋白3.05g、酪蛋白10g、ADP1g、防腐剂1mL、水补足至1L；pH值为7.4。作为优选，X溶液的配方为：pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液810.36g、ADP1g、酪蛋白2.1g、牛血清白蛋白3.02g、小牛血清200mL、防腐剂1mL、Trition-1001mL、抑菌剂1g、色素0.1g。作为优选，按g/L计，IgG抗体与CB缓冲液的比例为1：(100～1000)。优选地，按g/L计，IgG抗体与CB缓冲液的比例为1：(400)。作为优选，防腐剂为Proclin-300。作为优选，Tris-HCl缓冲液的配方为：Tris5～7g、NaCl7～9g、水补足至800mL；Tris-HCl缓冲液的pH值为7.4±0.05。优选地，Tris-HCl缓冲液的配方为：Tris6.05g、NaCl8.2g、水补足至800mL。作为优选，抑菌剂为Bronidox。作为优选，色素为胭脂红色素。本专利技术还提供了一种检测酶免微孔板质量的方法，采用上述试剂盒检测酶免微孔板质量，包括如下步骤：步骤1：检验酶免微孔板的外观、匹配性、空白值；步骤2：采用包被液对酶免微孔板进行包被，洗板后得到包被板；...

【技术保护点】
1.一种检测酶免微孔板质量的试剂盒，其特征在于，包括包被液、封闭液、低值质控品Q1、高值质控品Q2、底物液和显色剂；/n所述包被液由CB缓冲液和IgG抗体组成；所述CB缓冲液的配方为：Na

【技术特征摘要】
1.一种检测酶免微孔板质量的试剂盒，其特征在于，包括包被液、封闭液、低值质控品Q1、高值质控品Q2、底物液和显色剂；
所述包被液由CB缓冲液和IgG抗体组成；所述CB缓冲液的配方为：Na2CO31.5～1.7g、NaHCO32.8～3.0g、水补足至1L；
所述封闭液的配方为：NaH2PO40.5～0.7g、Na2HPO45～7g、NaCl8～10g、酪蛋白8～12g、KCl1～3g、蔗糖45～55g、ADP0.8～1.2g、Tween-200.8～1.2mL、防腐剂0.8～1.2mL、水补足至1L；
所述低值质控品Q1由IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液组成，以g/mL/mL计，所述低值质控品Q1中IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液的比例为(0.8～1.2)：(800～1200)：(4000～6000)；
所述高值质控品Q2由IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液组成，以g/mL/mL计，所述高值质控品Q2中IgG抗体、Casein酶稀释液、X溶液的比例为(1.8～2.2)：(800～1200)：(4000～6000)；
所述Casein酶稀释液的配方为：NaH2PO40.5～0.7g、Na2HPO45～7g、NaCl8～10g、牛血清白蛋白2.5～3.5g、酪蛋白8～12g、ADP0.8～1.2g、防腐剂0.8～1.2mL、水补足至1L；pH为7.4±0.05；
所述X溶液的配方为：pH为7.4±0.05的Tris-HCl缓冲液800～900g、ADP0.8～1.2g、酪蛋白1～3g、牛血清白蛋白2～4g、小牛血清180～220mL、防腐剂0.8～1.2mL、Trition-1000.8～1.2mL、抑菌剂0.8～1.2g、色素0.08～0.12g。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，按g/L计，所述IgG抗体与所述CB缓冲液的比例为1：(100～1000)。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为Proclin-300。

【专利技术属性】
技术研发人员：张金蕊，邢政，刘利晶，葛建臣，陈静，李彬，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41