免疫比浊法检测试剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫比浊法检测试剂及其制备方法，其包括乳胶微球、缓冲液、ε‑聚赖氨酸、活化剂和防腐剂，所述的活化剂包括N‑羟基丁二酰亚胺和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，活化剂的浓度为50～300mg/ml，缓冲液的pH在6.0～8.0之间，缓冲液的摩尔质量为20～100mM，防腐剂的质量百分比为0.05％～0.2％。本发明专利技术的免疫比浊法检测试剂，通过优化试剂的组分及配比，对偶联前的乳胶微球进行处理，提高乳胶微球的灵敏度，使得一些检测项目在低值的吸光度得到提升，从而避免在测试低值时不能够准确地反映样本的真实状况而出现检测偏差，提升检测的准确性。

【技术实现步骤摘要】
免疫比浊法检测试剂及其制备方法
本专利技术涉及一种生化分析
，尤其涉及一种免疫比浊法检测试剂。
技术介绍
血清免疫学检查是机体识别“自身”与“非己”抗原，对自身抗体形成天然免疫耐受，对“非己”抗原产生排斥作用的一种生理功能的检测。免疫方法的体外诊断试剂就是应用此原理，在体外用已知的抗原或者抗体检测临床中的血清或者体液中的抗体或抗原。抗原抗体结合中不同的检测方法有不同的表征，用以计算检测中的定量，例如吸光度、发光值等参数。免疫标记技术是指将已知抗原或抗体标记在易显示的物质上，通过检测标记物来计算抗原抗体反应的状况，从而间接地对被检抗体或抗原定性或定量。免疫标记技术具有快速、定性或定量的特点，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。胶乳颗粒增强比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测技术。具体原理是在高分子胶乳微球的表面交联或物理吸附抗体(单抗或者多抗)，当交联有抗体的微球(一般称为Reagent2或者R2)在试剂反应液中(一般称为Reagent1或者R1)与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。其优点是抗原、抗体反应后，直接测定反应液的吸光度值，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤，几分钟就能获得结果。此外，纳米免疫比浊法操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测物质的含量。POCT(point-of-caretesting)即时检验，是指在病人旁边进行的临床检测(床边检测bedsidetesting)，通常不一定是临床检验师来进行。是在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法。其优点为：1、快速，POCT的主要目的就是更快的得到实验结果；2、使用简单，操作简便，容易使用，POCT凭借它的易用性已成为诊断系统的一部分；POCT承担了实验室的职能但又无需传统的医院实验室设备。POCT既可在医生的诊所也可在开动的汽车上完成。POCT可以不受时间、地点限制、24小时全方位为病人服务；3、节约综合成本，实验人员面临的最大问题是控制诊断的成本，但结果总是降低了单个检验的成本，而不是从整体上降低病人整个就医过程的成本。从“单个检验成本”方面考虑，POCT相对较高；但在许多情况下POCT的应用不仅可以改善实验结果而且可以降低资源的占用，病人住院的时间，采样时间，医护人员的占用时间等。现有技术中用于免疫比浊法的胶乳试剂，在进行免疫比浊法中抗体的标记时，由于各种项目的不同，生化仪对各个项目的吸光度测试的结果也有不同，对于一些总体吸光度较低的项目，生化仪测试低值时的检测结果偏差大，检测精度低，因而需要对其进行改进。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对
技术介绍
中所述的现有的免疫比浊法检测试剂在测试低值时检测结果偏差大，检测精度低等问题，提供一种能够解决前述问题的免疫比浊法检测试剂。为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：免疫比浊法检测试剂，其特点是：其包括乳胶微球、缓冲液、ε-聚赖氨酸、活化剂和防腐剂，所述的活化剂包括N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化剂的浓度为50～300mg/ml，缓冲液的pH在6.0～8.0之间，缓冲液的摩尔质量为20～100mM，防腐剂的质量百分比为0.05％～0.2％。ε-聚赖氨酸是一种含有25—30个赖氨酸残基的同型单体聚合物。1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，英文符号为EDC，是个可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取。使用时的pH范围为4.0-6.0，常和N-羟基丁二酰亚胺或N-羟基硫代琥珀酰亚胺连用，以提高偶联效率。N-羟基丁二酰亚胺，英文符号为NHS，白色至类白色结晶，用于合成氨基酸保护剂、半合成卡那霉素及医药中间体。进一步的方案是，所述的防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、Proclin-300、Proclin-950中的一种。进一步的方案是，所述的缓冲液为MES缓冲液。MES为2-(N-吗啉)乙磺酸的简称。本专利技术的另一个目的在于提供一种免疫比浊法检测试剂的制备方法，其包括以下的步骤：1)将一定量的乳胶微球加入容器内，加入pH在6.0～8.0之间缓冲液并充分搅拌；2)向容器内加入一定量的活化剂进行活化，并同时添加一定量的ε-聚赖氨酸，对乳胶微球进行处理，在此过程中对溶液进行充分搅拌；3)活化结束后，对容器内的乳胶微球离心处理并水洗，然后用PB缓冲液进行重悬，充分重悬后进行超声波处理，处理时间为1-3h；4)超声处理结束后在磁力搅拌仪上搅拌一定时间，然后加入抗体，充分搅拌后，移入4℃冰箱中继续搅拌过夜；5)第二天，将容器取出，并移除搅拌子进行超声；超声结束后，加入牛血清白蛋白进行封闭，室温搅拌4-6h，结束后继续在4℃冰箱中搅拌过夜；6)过夜后取出搅拌子离心两次，水洗一次，用R2缓冲液重悬；重悬后超声处理，超声结束后，向其中添加防腐剂，并稀释到需要的浓度保存。PB缓冲液为磷酸盐缓冲液的简称。进一步的方案是，所述的步骤1中的缓冲液为MES缓冲液，其摩尔质量为20～100mM。进一步的方案是，所述的步骤2中的活化剂包括N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化剂的浓度为50～300mg/ml。进一步的方案是，所述的步骤3中的防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、Proclin-300、Proclin-950中的一种，防腐剂的质量百分比为0.05％～0.2％。本专利技术的免疫比浊法检测试剂具有以下优点，本专利技术的免疫比浊法检测试剂，通过优化试剂的组分及配比，对偶联前的乳胶微球进行处理，通过添加ε-聚赖氨酸，在乳胶微球标记抗体的过程中，乳胶微球聚合更多的抗体，提高乳胶微球的灵敏度，使得一些检测项目在低值的吸光度得到提升，从而避免在测试低值时不能够准确地反映样本的真实状况而出现检测偏差，提升检测的准确性。附图说明图1为对比试验中A、B组测试不同浓度样本CV的对比图；具体实施方式下面通过实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1免疫比浊法检测试剂，其包括乳胶微球、缓冲液、ε-聚赖氨酸、活化剂和防腐剂。活化剂包括N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化剂的浓度为50mg/ml。缓冲液为MES缓冲液，缓冲液的pH为6.0，缓冲液的摩尔质量为20mM。防腐剂的质量百分比为0.05％，防腐本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫比浊法检测试剂，其特征在于：其包括乳胶微球、缓冲液、ε-聚赖氨酸、活化剂和防腐剂，所述的活化剂包括N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化剂的浓度为50～300mg/ml，缓冲液的pH在6.0～8.0之间，缓冲液的摩尔质量为20～100mM，防腐剂的质量百分比为0.05％～0.2％。/n

【技术特征摘要】
1.一种免疫比浊法检测试剂，其特征在于：其包括乳胶微球、缓冲液、ε-聚赖氨酸、活化剂和防腐剂，所述的活化剂包括N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化剂的浓度为50～300mg/ml，缓冲液的pH在6.0～8.0之间，缓冲液的摩尔质量为20～100mM，防腐剂的质量百分比为0.05％～0.2％。


2.根据权利要求1所述的免疫比浊法检测试剂，其特征在于：所述的防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、Proclin-300、Proclin-950中的一种。


3.根据权利要求1所述的免疫比浊法检测试剂，其特征在于：所述的缓冲液为MES缓冲液。


4.免疫比浊法检测试剂的制备方法，其特征在于：其包括以下的步骤：
1)将一定量的乳胶微球加入容器内，加入pH在6.0～8.0之间缓冲液并充分搅拌；
2)向容器内加入一定量的活化剂进行活化，并同时添加一定量的ε-聚赖氨酸，对乳胶微球进行处理，在此过程中对溶液进行充分搅拌；
3)活化结束后，对容器内的乳胶微球离心处理并水洗，然后用PB缓冲液进行清洗重悬，充分重悬后进行超声波处...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾引军，金君玉，赵年福，张辉，王明伟，吴一凡，
申请(专利权)人：苏州德沃生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32