常温等温快速检测副溶血弧菌的引物、探针、试剂和方法技术

本发明专利技术适用于副溶血弧菌检测技术领域，提供了一种常温等温快速检测副溶血弧菌的引物和探针。本发明专利技术还提供一种包括上述引物和探针的常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂和方法。本发明专利技术可以在常温等温条件下，对副溶血性弧菌进行快速、实时、特异性检测。通过特异性引物、特异性荧光探针、4种工程酶、其它化学组分的共同作用下，在具备荧光检测功能的仪器中实现核酸目标物的快速检测，并通过严格的实验操作步骤保证闭管检测，有效防止气溶胶污染；适合应用于多种荧光检测设备进行检测。

【技术实现步骤摘要】
常温等温快速检测副溶血弧菌的引物、探针、试剂和方法
本专利技术涉及副溶血弧菌检测
，尤其涉及一种常温等温快速检测副溶血弧菌的引物、探针、试剂和方法。
技术介绍
副溶血弧菌(VibrioParahemolyticus，VP)隶属弧菌科，弧菌属，革兰阴性嗜盐菌，多形态杆菌或稍弯曲弧菌，1950年，被日本Fujino等学者首次分离得到，命名为副溶血性溶血巴斯德氏菌。1955年，Takikawa等由于发现它具有耐盐性，鉴定为嗜盐菌，直至1963年Sakazaki等将其定名为副溶血弧菌。副溶血性弧菌为多形态菌，常见的有弧状、卵圆状、棒状或丝状，多为不规则分布，偶尔成对，有鞭毛，不产芽胞与荚膜。该菌长约1.4-2.4μm，宽约0.5-0.8μm。副溶血性弧菌有两种鞭毛形式：丛生鞭毛和单端鞭毛。能够在0.5～8.0％盐度和5～44℃范围内生长，其最佳生长盐度和温度分别为3％和35℃。最佳生长pH为7.7。根据抗原结构可将副溶血性弧菌分为13个群(O抗原)和65个型(K抗原)。由于该菌是一种嗜盐性菌，在无盐环境下不能生长。因此副溶血性弧菌一般存在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种常温等温快速检测副溶血弧菌的引物和探针，其特征在于，上下游引物和探针的序列具体如下：/n上游引物VP-4-F：CAACGACGCAGCAATGCAGCCAGATCAAATCAAC/n下游引物VP-4-R：GTAAACAAGGTGTTTGCTGGTTTGTAGTTCTTC/n探针VP-Probe：/nCATCACAATGGCGCTTCCCTAACCCGAACAGC(F)G(H)(B)TCTTAGGTCACTTCTC—Spacer C3。/n

【技术特征摘要】
1.一种常温等温快速检测副溶血弧菌的引物和探针，其特征在于，上下游引物和探针的序列具体如下：
上游引物VP-4-F：CAACGACGCAGCAATGCAGCCAGATCAAATCAAC
下游引物VP-4-R：GTAAACAAGGTGTTTGCTGGTTTGTAGTTCTTC
探针VP-Probe：
CATCACAATGGCGCTTCCCTAACCCGAACAGC(F)G(H)(B)TCTTAGGTCACTTCTC—SpacerC3。


2.一种常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物和探针。


3.根据权利要求2所述的常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，所述试剂包括聚乙二醇、Tris、乙酸钠、二硫苏糖醇、酸磷酸腺苷、磷酸肌酸二钠盐、磷酸肌酶、脱氧核糖核苷三磷酸、海藻糖、甘露醇、重组酶、单链DNA结合蛋白、DNA聚合酶和核酸外切酶。


4.根据权利要求3所述的常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，所述试剂的制备方法包括：
将反应液在-80℃条件下预冻1～1.5小时得到预冻试剂；
将预冻试剂先置于-35～-45℃环境下干燥2～10小时，再置于10～18℃环境下干燥1～2小时，得到冻干粉。

【专利技术属性】
技术研发人员：曹伟，刘琼瑶，娄志英，宋文凤，刘国宪，
申请(专利权)人：潍坊安普未来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37