一种检测大气环境中四环素类耐药基因tetA的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测大气环境中四环素类耐药基因tetA的方法。包括：(1)将已知浓度的四环素类耐药基因tetA的标准样品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应，利用设计引物序列对模板DNA进行定量PCR扩增，记录得到的循环数；(2)运用10倍梯度稀释法，利用已知浓度模板起始拷贝数标准样品做出目的基因的标准曲线；(3)按照步骤(1)方法确定大气环境样品中四环素类耐药基因tetA的循环数，利用步骤(2)绘制的标准曲线，计算得到目标基因tetA的含量。本发明专利技术使用定量PCR技术即可快速精确地检测到大气环境中待测样品中四环素耐药基因tetA的浓度含量。

【技术实现步骤摘要】
一种检测大气环境中四环素类耐药基因tetA的方法
本专利技术属于环境生物学领域，具体涉及一种检测大气环境中四环素类耐药基因tetA的方法。
技术介绍
空气污染严重影响着人类健康，特别是在工业化和城市化快速崛起的发展中国家，大气中颗粒物的增加，导致公共健康存在极大潜在风险。近年来，我国华北地区持续出现多起时间较长的雾霾重污染天气，大气污染随之也被提升到国家重点治理层面。抗生素是指由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物，是一种能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质，现已广泛用于医疗及畜禽养殖等行业。在为人类带来重要贡献的同时，抗生素的大量使用，导致人体及动物肠道内诱导出抗性菌株，以排泄物等形式释放到环境中，并可通过与细胞中的可移动因子(如质粒、转座子、基因盒等)相结合，在不同的细菌群体间传播，进而扩散到水、大气、土壤等各种环境介质中，造成抗生素耐药基因污染。抗生素滥用造成的环境污染问题已引起全球的高度重视。到目前为止，尽管大量文献报道了有关抗生素耐药基因方面的研究，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测大气环境中四环素类耐药基因tetA的引物序列，其特征在于，包括正向引物和反向引物，碱基序列为：/n正向引物：GCTACATCCTGCTTGCCTTC；/n反向引物：CATAGATCGCCGTGAAGAGG。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测大气环境中四环素类耐药基因tetA的引物序列，其特征在于，包括正向引物和反向引物，碱基序列为：
正向引物：GCTACATCCTGCTTGCCTTC；
反向引物：CATAGATCGCCGTGAAGAGG。


2.一种利用权利要求1所述的引物序列检测大气环境中四环素类耐药基因tetA的方法，其特征在于，包括：
(1)将已知浓度的四环素类耐药基因tetA的标准样品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应；提取标准样品四环素类耐药基因tetA中的DNA，以此提取出来的DNA作为模板，利用权利要求1中的引物序列对模板DNA进行定量PCR扩增，当达到荧光阈值时，记录得到的循环数；
(2)运用步骤(1)中得到的达到荧光阈值时的循环数，根据定量PCR测定目的基因tetA质粒标准样品的标准曲线；运用10倍梯度稀释法，利用已知浓度模板起始拷贝数标准样品做出目的基因的标准曲线，以标准样品的拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，使标准质粒浓度分别为：102、103、104、105、106、107，108，确保R2>0.99，扩增效率在90％-110％之间时为有效曲线；
(3)按照步骤(1)所述方法确定大气环境样品中四环素类耐药基因tetA的循环数，将得到的目标待测基因tetA的循环数代入步骤(2)绘制的标准样品的标准曲线中，计算得到目标大气环境样品中四环素类耐药基因tetA的含...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪庆，梁海崟，杨光，王丽涛，杨卫华，侯立泉，任晓芬，
申请(专利权)人：河北工程大学，
类型：发明
国别省市：河北;13