布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽及其应用，属于生物医药技术领域；所述成熟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明专利技术首次发现Motistin的成熟肽能够抑制LTA4H的水解酶活性，而对其氨肽酶活性没有影响。Motistin的成熟肽能靶向LT44H，通过抑制LTA4H的水解酶活性，抑制免疫细胞的募集和炎症介质产生，还具有抑制由病毒和细菌脂多糖引起的炎症细胞因子IL6，TNFα，IL1β的产生的功能，具备成为炎症抑制的有效药物的潜力。

【技术实现步骤摘要】
布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽及其应用
本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽及其应用。
技术介绍
LTA4H是花生四烯酸途径的最终酶和限速酶。它以其环氧水解酶功能而闻名，可以将LTA4转化为LTB4(Dennis,E.A.&Norris,P.C.Eicosanoidstormininfectionandinflammation.NatRevImmunol15,511–523(2015))。LTB4是一种重要的促炎脂质介体，能够启动和放大先天性和适应性免疫反应，并且对免疫细胞具有化学吸引作用并可以释放炎性介体(Peters-Golden,M.&Henderson,W.R.Leukotrienes.NEnglJMed357,1841–1854(2007)；DiGennaro,A.&Haeggstrom,J.Z.Theleukotrienes:immune-modulatinglipidmediatorsofdisease.AdvImmunol116,51-92(2012))。其受体BLT1和BLT2的参与对嗜中性粒细胞(PMN)，嗜酸性粒细胞和CD8+细胞毒性T淋巴细胞的募集和激活具有特别强的作用。在几乎所有的哺乳动物组织和器官中都可以检测到LTA4H(Haeggstrom,J.Z.LeukotrieneA4hydrolaseandthecommittedstepinleukotrieneB4biosynthesis.ClinRevAllergyImmunol17,111–131(1999))。此外，脂多糖(LPS)能够诱导LTA4H和LTB4的产生。另外，LTA4H的氨肽酶功能可促进三肽Pro-Gly-Pro(PGP)的降解，而PGP具有中性粒细胞的趋化活性(Byzia,A.,Haeggstrom,J.Z.,Salvesen,G.S.&Drag,M.AremarkableactivityofhumanleukotrieneA4hydrolase(LTA4H)towardunnaturalaminoacids.AminoAcids46,1313-1320(2014))。因此，LTA4H具有促炎性(LTB4产生)和抗炎性(PGP降解)的双重功能。目前缺少一种具有抑制LTA4H水解酶活性，而对其氨肽酶活性没有影响的抑制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽及其应用，本专利技术中Motistin的成熟肽具有抑制LTA4H水解酶活性的作用，而对其氨肽酶活性没有影响。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽，所述成熟肽的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术提供了一种编码上述方案所述成熟肽的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。本专利技术提供了一种包含上述方案所述基因的重组质粒，所述重组质粒的构建用骨架质粒包括Pet-32a。本专利技术提供了一种包含上述方案所述重组质粒的重组菌，所述重组菌的原始菌包括大肠杆菌。本专利技术提供了上述方案所述Motistin的成熟肽、所述基因、所述重组质粒或者所述重组菌在制备抑制白三烯A4水解酶活性的药物中的应用。本专利技术提供了上述方案所述Motistin的成熟肽、所述基因、所述重组质粒或者所述重组菌在制备抑制白三烯B4产生和/或炎症因子产生的药物中的应用。本专利技术提供了上述方案所述Motistin的成熟肽、所述基因、所述重组质粒或者所述重组菌在制备免疫抑制剂中的应用。优选的，所述免疫抑制剂用于治疗哮喘、肿瘤、慢性肺部疾病、急性肺部疾病、心血管疾病或囊性纤维化。本专利技术提供了一种治疗炎症类疾病的药物，所述药物的活性成分包括上述方案所述Motistin的成熟肽。优选的，所述炎症类疾病包括胃炎、胰腺炎、结膜炎、结肠炎、关节炎或伤口炎症。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽，所述成熟肽的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术首次发现Motistin的成熟肽能够抑制LTA4H的水解酶活性，而对其氨肽酶活性没有影响。Motistin的成熟肽能靶向LT44H，通过抑制LTA4H的水解酶活性，抑制免疫细胞的募集和炎症介质产生，还具有抑制由病毒和细菌脂多糖引起的炎症细胞因子IL6，TNFα，IL1β的产生的功能，具备成为炎症抑制的有效药物的潜力。附图说明图1为Motistin重组蛋白表达条件探索，其中M：ProteinMarker、1：15℃0.1mMIPTG诱导后、2：20℃0.1mMIPTG诱导后、3：28℃0.1mMIPTG诱导后、4：15℃0.5mMIPTG诱导后、5：20℃0.5mMIPTG诱导后、6：28℃0.5mMIPTG诱导后、7：诱导前样品；图2为鉴定原核表达菌中Motistin重组蛋白是否为分泌型可溶性蛋白，其中M：ProteinMarker、1：诱导前样品、2：诱导后样品、3：诱导超声沉淀样品、4：诱导超声上清样品；图3为Motistin重组蛋白镍离子柱亲和层析，其中M：ProteinMarker、1：破碎后沉淀、2：破碎后上清、3：过Ni柱后流出液、4：20mM咪唑洗杂、5：500mM咪唑洗脱；图4经过高效液相色谱纯化后最终Motistin的成熟肽SDS-PAGE结果，其中M：ProteinMarker、MTX：Motistin多肽；图5表示布氏鼠耳蝠多肽Motistin的抗trypsin活性；图6为反相高效液相色谱检测布氏鼠耳蝠多肽Motistin对LTA4H的水解酶活性作用结果；图7为白三烯A4水解率计算结果；图8为布氏鼠耳蝠多肽Motistin对LTA4H的氨肽酶活性作用结果；图9为布氏鼠耳蝠多肽Motistin对pDC细胞抗炎症因子IL6的作用结果；图10为布氏鼠耳蝠多肽Motistin对pDC细胞抗炎症因子TNFα的作用结果；图11为布氏鼠耳蝠多肽Motistin对pDC细胞抗炎症因子IL1β的作用结果；图12为布氏鼠耳蝠多肽Motistin对小鼠血浆抗炎症因子IL6的作用结果；图13为布氏鼠耳蝠多肽Motistin对小鼠血浆抗炎症因子TNFα的作用结果；图14为布氏鼠耳蝠多肽Motistin对小鼠血浆抗炎症因子IL1β的作用结果。具体实施方式本专利技术提供了布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽，所述成熟肽的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示，具体为：VSPPAIGKAVDCSKYQGKGSRLACTREYKPVCGVDNTVYSNECMYCMKKKERGVVLRKLHDGQCVECTKFSEACTMEYMPHCG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽，所述成熟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。/n

【技术特征摘要】
1.布氏鼠耳蝠白三烯A4水解酶抑制剂Motistin的成熟肽，所述成熟肽的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。


2.一种编码权利要求1所述成熟肽的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。


3.一种包含权利要求2所述基因的重组质粒，所述重组质粒的构建用骨架质粒包括Pet-32a。


4.一种包含权利要求3所述重组质粒的重组菌，所述重组菌的原始菌包括大肠杆菌。


5.权利要求1所述Motistin的成熟肽、权利要求2所述基因、权利要求3所述重组质粒或者权利要求4所述重组菌在制备抑制白三烯A4水解酶活性的药物中的应用。


6.权利要求1所述Motistin的成熟肽、权...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖仞，方鸣谦，唐小芃，张治业，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53