一种特异性结合NFIB的单克隆抗体及其在制备药物以及化妆品的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种特异性结合NFIB的单克隆抗体及其在制备药物以及化妆品的用途，经过检测该抗体具有较好的抑制黑色瘤细胞增殖的效果，具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性结合NFIB的单克隆抗体及其在制备药物以及化妆品的用途
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种特异性结合NFIB的单克隆抗体及其在制备药物以及化妆品的用途。
技术介绍
黑色素瘤又称恶性黑色素瘤。是一种与骨伤科有关的皮肤肿瘤。恶性黑色素瘤(melanoma)来源于神经嵴的黑色素细胞，是由此类细胞异常增生引发的皮肤恶性肿瘤。良性黑色素瘤又称色素痣，多不引起注意。黑色素瘤可以一开始即为恶性，但通常由交界痣恶变而来。这是一种恶性程度较高的肿瘤，较为常见。多见于30岁以上的成年人，男女之比为2：1。好发部位为下肢，以足部为最多，其次是上肢、头颈、躯干等处。发病原因尚不明，但部分病例有皮肤受伤的病史，烧伤及X线照射可能是诱因，有少数病例与内分泌因素有关，家族性倾向也有报道。肿瘤呈灰黑色，结节状，质软，时有溃烂。镜下瘤细胞多呈梭形，圆形或多角形，胞浆中含有多少不等的黑色素颗粒，外观呈黑色，瘤细胞大小不等，呈弥散状、巢状、腺样或小梁状排列。好发于皮肤、粘膜和色素膜，其恶性程度极高，是死亡率极高的恶性肿瘤之一。在全世界范围内黑色素瘤发病率和死亡率均持续上升，2014年在美国就有大约8万新增恶性黑素瘤患者，其中有约1万位患者死于该病。在我国2000年发病率统计仅为0.2/10万，2005-2007年我国发病率约1/10万，2008年我国发病率约1.3/10万，占恶性肿瘤的2％，且黑色素瘤患病人数正以每6-10年增加一倍的速度增长。2018年8月，从北京大学肿瘤医院和中国抗癌协会临床肿瘤学协作专业委员会黑色素瘤专家委员会获悉，中国黑色素瘤检出率增加，每年新发病例约2万例。黑色素瘤早期发现并行原发灶切除即可治愈，但其发病隐匿，病程进展较快并具有很高的复发率和转移率。对于恶性黑色素瘤进展至中晚期的患者，主要采用联合治疗方案，包括IFN-α2b、白介素-2、达卡巴嗪及替莫唑等化疗、放疗，免疫治疗和生物治疗的方式。新近发展起来的小分子靶向药物(BRAF抑制剂vemurafenib、dabrafenib及MAPK/MEK抑制剂trametinib，cobimetinib)为携带BRAF等相关基因突变的恶性黑色素瘤患者带来了治疗上的新曙光，但相对那些没有BRAF突变或者BRAF突变治疗后病情恶化进展的患者，几乎没有进一步可选的治疗方法。同时免疫靶向治疗药物CTLA-4抗体、PD-L1抗体对部分抗PD-1阳性的患者病情有所缓解，但易产生耐药性。一旦产生耐药性的恶性黑色瘤患者病情发展呈爆发式，几乎无治疗手段可有效控制转移性恶性黑色素，5年存活率仅16％。黑色素瘤已经成为危害我国人民健康的疾病之一，深入研究黑色素瘤发病机制已成为全世界的难题。随着现代肿瘤免疫学的迅速发展，针对恶性黑色素瘤发生、发展和转移等多个环节进行免疫治疗已成为目前研究的热点。肿瘤免疫治疗的目的是激发或调动机体的免疫系统，增强肿瘤微环境的抗肿瘤免疫力，从而控制和杀伤肿瘤细胞。抗体药物是肿瘤免疫治疗的重要组成部分，以与肿瘤发生发展密切相关的分子作为靶点，通过不同机制，包括抑制肿瘤细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡以及干扰肿瘤新生血管形成等，实现对肿瘤细胞的特异性抑制、杀伤或对肿瘤生长微环境的针对性干扰。因此，与传统治疗措施相比，抗体药物效果更为明显而不良反应大大降低，用于恶性肿瘤的治疗已显示出良好的应用前景，成为包括黑色素瘤在内的恶性肿瘤免疫治疗中一个重要的研究方向。目前抗PD-L1抗体以及多款PD-1抗体已经用于治疗恶性黑色素瘤，US20190194328A1公开了一种治疗黑素瘤的方法，包括给予患有黑素瘤肿瘤的患者一种抗-PD-1抗体或其抗原结合部分，其以每两周240mg或每四周480mg的平剂量特异性结合人PD-1(“抗-PD-1抗体”)同时还给予抗-CTLA-4抗体或其与人CTLA-4特异性结合的抗原结合部分(“抗-CTLA-4抗体”)。US10308721B2公开了一种治疗受试者黑色素瘤的方法，其中所述黑色素瘤的特征在于具有高于阈值指数值的DLL3表达水平，所述方法包括给予所述受试者抗DLL3抗体药物偶联物的步骤。但是针对其他靶点用于治疗黑色素瘤的抗体还较少涉及。已有研究表明NFIB的下调显着抑制黑素瘤细胞增殖，减弱集落形成能力，并抑制细胞迁移和侵袭。总之，这些结果表明NFIB在黑素瘤发生发展中发挥重要作用。但是针对NFIB的单克隆抗体的研究还非常少。
技术实现思路
本专利技术提供一种具有高抗原决定簇的NFIB多肽，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。本专利技术提供一种具有高抗原决定簇的NFIB多肽，其核苷酸酸序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术另外，提供一种制备NFIB单克隆抗体的方法，其特征在于以NFIB多肽为免疫原。进一步的，本专利技术提供一种NFIB单克隆抗体，其轻链可变区序列如SEQIDNO：3所示，重链可变区序列如SEQIDNO：4所示。本专利技术还提供了NFIB单克隆抗体用于制备针对黑色素瘤的药物或者化妆品的用途。此外，还提供含轻链可变区序列如SEQIDNO：3所示，重链可变区序列如SEQIDNO：4所示的NFIB单克隆抗体片段。进一步的，本专利技术还提供了一种药物组合物，其含有NFIB单克隆抗体。在某些实施例中，所述单克隆抗体可被制成单位剂量的可注射形式，例如溶液、悬液或乳液。适于注射的药物制剂通常为无菌水性溶液和分散体系。用于可注射制剂的载体可为溶剂或分散介质，含例如水、盐水、磷酸缓冲盐水、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)以及它们的合适混合物。本领域技术人员可容易地确定将在本专利技术方法中给予的组合物中的细胞和可选添加剂、媒介(vehicle)和/或载体的量。通常，任何添加剂(除所述细胞以外)都以0.001wt％-50wt％的量存在于溶液例如磷酸缓冲盐水中。所述活性组分以微克至毫克量级存在，例如约0.0001wt％到约5wt％，优选约0.0001wt％到约1wt％，最优选约0.0001wt％到约0.05wt％，或者约0.001wt％到约20wt％，优选约0.01wt％到约10wt％，最优选0.05wt％到约5wt％。有益效果本专利技术针对NFIB蛋白进行特异性的抗原决定簇分析以及相应的密码子进行优化得了特异性的NFIB抗原肽的氨基酸和核苷酸序列，将所述抗原肽进行重组表达纯化后免疫小鼠，制备得到相应的杂交瘤细胞以及相应的单克隆抗体，经过检测该抗体具有较好的抑制黑色瘤细胞增殖的效果，具有较好的应用前景。附图说明图1为NFIB抗原肽核苷酸序列密码子优化前后对比图。图2为NFIB抗原肽重组表达及纯化后的SDS-PAGE图。图3为抗体效价结果图。图4为Westernblot检测结果图，左边是空白对照，右边是NFIB抗原肽与单克隆抗体的检测结果。图5为单克隆抗体的效价检测结果图。图6为黑色素瘤细胞抑制实验结果图。具体实施方式实施例1NFIB抗原表位的筛选利用TMHMMServerv.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NFIB抗原肽，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种NFIB抗原肽，其特征在于氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。


2.一种NFIB抗原肽的核苷酸序列，其特征在于核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。


3.一种特异性针对NFIB抗原肽的单克隆抗体，其轻链可变区如SEQIDNO：3所示，重链可变区如SEQIDNO：4所示。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海涛，王青，
申请(专利权)人：北京欣颂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11