【技术实现步骤摘要】
一种重组人成纤维细胞生长因子-21包涵体的纯化工艺
本专利技术属于生物医药领域,具体涉及一种重组人成纤维细胞生长因子-21包涵体的纯化工艺。
技术介绍
rhFGF-21是成纤维细胞生长因子家族的一名新成员,其前体由209个氨基酸组成,N端有特殊的信号肽序列,成熟蛋白181个氨基酸。相对分子质量约为19.4kD。研究还发现该蛋白等电点为5.0-6.0,为酸性蛋白。重组人成纤维细胞生长因子-21(rhFGF-21)是FGFs家族中目前发现的唯一没有促有丝分裂的基因,作为一个内分泌因子与糖脂代谢有着密切的关系。rhFGF-21在脂代谢方面的作用机制主要体现为:1)FGF-21能改善胰岛β细胞的功能。它通过激活ERK1/2和Akt信号通路提高胰岛β细胞的存活率,降低胰岛素抵抗,提高胰岛敏感性。2)FGF21对脂代谢的调控主要表现为降低脂毒性,降低脂质新生,提高脂肪β氧化,提高脂联素含量,促进白色脂肪棕色化,降低血清中甘油三酯及磷脂含量。3)FGF21降低氧化应激反应,抑制炎症因子的释放。因此FGF21在治疗非酒精性脂肪肝炎方面更优势 ...
【技术保护点】
1.一种重组人成纤维细胞生长因子-21包涵体的纯化工艺,其特征在于,包括以下步骤:/n(1)将菌体悬浮于粗提工作液中,加入溶菌酶进行搅拌和超声破碎,然后进行离心、洗涤沉淀得到包涵体;/n(2)将步骤(1)得到的包涵体溶解于变性溶液中得到包涵体溶液,然后将复性溶液加入包涵体溶液,搅拌均匀,得到复性后的包涵体溶液;/n(3)步骤(2)得到包涵体溶液采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换柱进行分离,得到蛋白溶液;/n分离时,以25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素作为缓冲液,以25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1. ...
【技术特征摘要】
1.一种重组人成纤维细胞生长因子-21包涵体的纯化工艺,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将菌体悬浮于粗提工作液中,加入溶菌酶进行搅拌和超声破碎,然后进行离心、洗涤沉淀得到包涵体;
(2)将步骤(1)得到的包涵体溶解于变性溶液中得到包涵体溶液,然后将复性溶液加入包涵体溶液,搅拌均匀,得到复性后的包涵体溶液;
(3)步骤(2)得到包涵体溶液采用QSepharoseFastFlow阴离子交换柱进行分离,得到蛋白溶液;
分离时,以25mmol/LTris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素作为缓冲液,以25mmol/LTris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素、0.05mol/LNaCl作为洗杂液,以25mmol/LTris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素、0.1mol/LNaCl作为洗脱液,以25mmol/LTris-HCl(pH7.8)、1mol/LNaCl作为再生液;
(4)步骤(3)得到的蛋白溶液采用QSepharoseFastFlow阴离子交换柱进行浓缩,得到重组人成纤维细胞生长因子-21;
浓缩时,以25mmol/LTris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素作为层析的上样缓冲液,25mmol/LTris-HCl(pH7.8)、1.0...
【专利技术属性】
技术研发人员:郑诗雨,马金航,张铭浩,惠琦,何鑫,
申请(专利权)人:温州医科大学,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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