一种重组大肠杆菌的固定化方法及其在丙谷二肽合成中的应用技术

本发明专利技术公开一种过表达转酯酶重组大肠杆菌的固定化方法及其在丙谷二肽生物催化合成中的应用，其包括培养过表达转酯酶的重组大肠杆菌至对数期，再使用固定化材料将所述重组大肠杆菌进行包埋后诱导培养。采用本发明专利技术所述的固定化时序，本发明专利技术公开了固定化细胞的使用方法，实验结果显示，反应可连续进行600h，且保持产量不降低；生产连续进行10批次以上，收集到的反应液中丙谷二肽浓度在70～76mM之间。固定化细胞活性高，且可回收利用，更可实现连续化反应，转化率基本维持不变。本发明专利技术所述方法操作简单，产品转化率高，分离容易，生产效率高且成本低，容易实现规模化生产，具有良好的工业化应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种重组大肠杆菌的固定化方法及其在丙谷二肽合成中的应用
本专利技术涉及重组菌的固定化生产方法
，具体涉及一种过表达转酯酶重组大肠杆菌的固定化方法及其在丙谷二肽生物催化合成中的应用。
技术介绍
丙谷二肽(L-Ala-Gln)，又称为N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，具有溶解度高，水溶性和热稳定性强的优点已逐渐替代谷氨酰胺(L-Gln)成为主要的肠外营养用药。目前，丙谷二肽的合成主要采用化学合成法和化学合成结合生物酶催化法、微生物产酶合成法。化学合成法生产丙谷二肽反应步骤多、副产物多、试剂毒性大且非环境友好(唐果.N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽的合成与反应研究.厦门大学，2004；中国专利，丙－谷二肽合成方法，CN1392156A)。而化学+生物酶催化法也存在用酶量大，肽生产率低等缺点。(于清新，丙谷二肽的酶促合成研究。天津大学，2010)。微生物产酶合成法是通过筛选菌株得到可用于催化丙氨酰-谷氨酰胺合成的转酯酶，将分离纯化后的酶或直接将微生物菌株应用于催化丙氨酸与谷氨酰胺合成Ala-Gln二肽。(KenzoYokozeki本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种过表达转酯酶重组大肠杆菌的固定化方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将过表达转酯酶的重组大肠杆菌培养至细胞密度为OD

【技术特征摘要】
1.一种过表达转酯酶重组大肠杆菌的固定化方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将过表达转酯酶的重组大肠杆菌培养至细胞密度为OD6000.4～1.0；
(2)使用固定化材料将步骤(1)获得的重组大肠杆菌进行包埋后诱导培养。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的固定化材料选自琼脂粉，琼脂糖，海藻酸钠、卡拉胶中的至少一种。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的固定化材料的包埋方法为将菌体加入1～2％固定化材料混匀后，滴加到交联剂中进行包埋，所述的交联剂选自豆油、2～3％KCl、2～3％CaCl2。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的过表达转酯酶重组大肠杆菌为重组大肠杆菌BL21-pET29a-AET。


5.如权利要求1所述固定化方法在丙谷二肽生物催化合成中的应用。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的在丙谷二肽生物催化合成中所用的底物为L-丙氨酸甲酯盐酸盐和L-谷氨酰胺的混合物，且混合物中L-丙氨酸甲酯盐酸盐和L-谷氨酰胺的摩尔比...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐佳琨，范超，裴绪泽，袁文杰，刘军，吴文忠，
申请(专利权)人：大连医诺生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21